抗家蚕抗菌肽单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

首次报道了抗家蚕抗菌肽（一种小分子多肽）单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立．用ＦＰＬＣ纯化家蚕抗菌肽（ＡＢＰ）获得了电泳一条带的均一样品；将它与辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）偶联，以此偶联物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ鼠．以抗菌肽—牛血清白蛋白（ＡＢＰ－ＢＳＡ）做包被物ＥＬＩＳＡ筛选出５个阳性杂交瘤细胞株，冻存复苏后得到三个稳定分泌抗体的阳性细胞株，抗体ＩｇＧ亚型为ＩｇＧ２ａ．统计了杂交瘤的染色体数     

两种单克隆抗体杂交瘤细胞系染色体的研究

本文对猪痢疾密螺旋体单克隆抗体杂交瘤细胞系和鸭瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞系(6H细胞系和D细胞系)的染色体进行了初步研究。6H细胞系,染色体平均数为97.5条;染色体数目分布在95—115条之间的细胞占48.33％。D细胞系,染色体平均为99条;染色体数目分布在95—115条之间的占总数54.54%。 两种细胞系细胞的绝大部分染色体为端部着丝点,只有两条中部着丝点染色体,且在两种细胞系中保持相对稳定,可以作为标记染色体。 本文还对两例杂交瘤细胞染色体进行了核型分析。两例染色体都为106条,其中,104条端部着丝点,2条中部着丝终点。     

天花粉蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0细胞）与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。     

抗基因工程人rIFN-γ杂交瘤细胞株的建立

用杂交瘤技术将基因工程人γ－干扰素（ｒＩＦＮ－γ）免疫的Ｂ淋巴细胞与ｓｐ２／０鼠骨髓瘤细胞融合，建立了 ３株抗 ｒＩＦＮ－γ杂交瘤细胞株。这些细胞株经两年多的传代培养仍保持稳定分泌抗体的能力，并与ｒＩＦＮ－γ及新型γ－干扰素呈特异性反应，可用于亲和层析纯化γ－干扰素．     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。     

HMC14单克隆抗体杂交瘤株的建立

以北京鸭红细胞提取的ＨＭＧｓ免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，取其脏压细胞与Ｓｐ２／０（小鼠骨髓瘤细胞）融合，经选择培养，阳性筛选，克隆化以及冻存复苏，获得了三株稳定分泌抗ＨＭＧ１４的杂交瘤细胞株，经ＷｗｓｔｅｒｎＢｌｏｔ鉴定，与其它几种ＨＭＧ无反应，抗体为ＩｇＧ１亚型。腹水ＨＭＧ１４单隆抗体经ＳｅｐｈａｄｘＣＬ－４Ｂ亲和柱得到了纯化。     

抗牛免疫缺陷病毒（BIV）穿膜蛋白gp45杂交瘤细胞株的建立

编码牛免疫缺陷病毒（ＢＩＶ）穿膜蛋白的一个４００ｂｐ的基因片断被克隆到ｐＡＴＨ表达载体上，此 重组的融合蛋白ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８在大肠杆菌中得到高效表达，而且包含有与ＢＩＶ抗体特异性反应的抗原决定簇。我们用此融合蛋白免疫ｂａｌｂ／ｃ小鼠得到与ＢＩＶ穿膜蛋白特异性反应的杂交瘤。此单克隆抗体在蛋白印迹法分析中与重组的ＴｒｐＥ－Ｅｎｖ８有特异性反应，用免疫酶染色法可检测ＢＩＶ在体外的复制。     

抗孕酮单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

应用自制的结合抗原孕酮—BSA,免疫Balb/c小鼠,取其脾脏细胞与SP_2/0骨髓瘤细胞进行二次融合、共384孔、杂交瘤细胞102孔,融合率为25.26％,其中15个阳性孔、占10.7％,获得PE_7 PG_4两个阳性分泌细胞株。经四次克隆冻存多批,保存七个月后,其抗体效价稳定。经载体取代实验,证明单克隆抗体仅对黄体酮起反应;对BSA呈阴性反应。单抗对雌二醇无交叉反应。     

抗促黄体激素单克隆抗体的研制 Ⅰ杂交瘤细胞株的建立

用促黄体激素(LH)为抗原免疫BALB/C小鼠,通过免疫小鼠脾细胞和SP_2/0小鼠骨髓瘤细胞的融合,产生分泌抗LH单克隆抗体(McAbs)的杂交瘤细胞。用ELISA法检测融合细胞培养上清,从195份检样中测出两份能与LH抗原起反应。对该2孔杂交瘤细胞进行亚克隆和扩大培养。经体外四个月传代培养及液氮冻存后复苏培养。仍保持分泌抗LH的McAbs的能力,所建立的二株杂交瘤细胞命名为AL—01和AL—02。给予注液体石蜡的BALB/C小鼠注入该二种细胞,均能诱生腹水。用ELISA法测腹水抗体,效价分别为10~(-6)以上和10~(-5)以上。通过染色体组型分析,确认AL—01和AL—02皆为杂交瘤细胞。     

分泌抗弓形虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用弓形虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠,取脾细胞,与Ｓｐ２／０ 细胞融合,获得３ 株能稳定分泌抗弓形虫单克隆抗体的细胞。细胞培养上清液和腹水中的单克隆抗体效价分别为１∶１６ ～２５６ 和１０ － ６ ～１０ － ７ 。单抗类型均为ＩｇＭ。杂交瘤细胞经液氮冻存１２ 个月后,复苏生长良好,分泌活性稳定。在ＭｃＡｂ－ Ｄｏｔ－ ＥＬＩＳＡ 实验中,所能测出可溶性抗原的最小浓度为１０ ｎｇ／ ｍＬ     

南方鲶SME—1细胞系,草鱼CIK细胞系与原鱼种的RAPD图谱比较

研究了ＳＭＥ１和ＣＩＫ细胞系，以及南方鲶、鲶、大鳍、草鱼等６个样品的ＲＡＰＤ图谱，测定了各样品间的Ｎｅｉ相似系数和单匹配相似系数，并绘制了聚类树形图．Ｎｅｉ相似系数更适于细胞系与原种动物的相似性分析；细胞系与原鱼种的相似系数大于种间相似系数；培养时间短的ＳＭＥ１细胞与其原鱼种南方鲶的相似系数大于培养时间长的ＣＩＫ细胞与其原生鱼种草鱼的相似系数．     

Preparation of monoclonal antibody based indirect competitive ELISA for detecting 19-nortestosterone residue

19-Nortestosterone (NT) has been illegally used in horse racing to boost physical performance, and in animal husbandry to accelerate weight gain. To monitor the abuse of NT, our goal was to develop a commercial enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) kit. For this purpose, hybridomas were prepared by fusing NS0 mouse myeloma cells with splenocytes isolated from immunized BALB/c mouse. Noncompetitive and competitive indirect ELISA were used to screen positive cell clones. To optimize the indirect competiti...     

Establishment and cryopreservation of liver, heart and muscle cell lines derived from the Chinese alligator （Alligator sinensis）

The Chinese alligator, Alligator sinensis, is a critically endangered species. A conservation project of gene resources for an endangered species first involves the preservation of organs, tissues, gametes, genomic DNA libraries and cell lines. The present study is the first to establish and cryopreserve cell lines of liver, heart and muscle tissues from the Chinese alligator. The study revealed that there was a large discrepancy in cell migration time in primary cultures among liver (11-12 d), heart (13-14 d) and muscle (17-18 d) tissue pieces. The differences in time in primary cell culture suggested that it was relatively easy to build visceral-derived cell lines for reptiles. Biological analysis showed that the population doubling time for thawed cells was approxi- mately 36 h. Karyotyping revealed that the frequency of Chinese alligator cells showing chromosome number as 2n=32 was 88.6%-93.4%. Chinese alligator cell lines established here provide a vital resource for research and are likely to be useful for protection of this rare and critically endangered species. Furthermore, the establishment of these methods may supply technical and theoretical support for preserving genetic resources at the cellular level for other reptile species.     

鳞翅目昆虫细胞抗菌肽的诱导、筛选及抗菌活性的研究

选取3种离体培养的鳞翅目昆虫细胞系,采用热灭活的大肠杆菌诱导的方法,诱导其产生抗菌肽,并进行抗菌活性检测、诱导动力学研究及Tricine SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分析．结果筛选到1株诱导抗菌活性较高的昆虫细胞系——粉纹夜蛾BTI-Tn-5B1细胞系,并发现该粉纹夜蛾5B1细胞在诱导后16h产生了1个分子量大约为8000的抗菌肽,抗菌活性检测表明其对金黄色葡萄球菌（Sta phylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli K12D31）、德氏卑沙门氏菌（Salmonella derby）均有不同程度的抑制作用,其中特别是对革兰氏阴性菌——大肠杆菌K12D31和德氏卑沙门氏菌有较强的抑菌活性．     

杂交瘤细胞流加培养中葡萄糖浓度的控制

通过 Wu T3杂交瘤细胞的流加培养 ,当葡萄糖浓度分别控制在 0 .2、0 .5、1 .0和 1 .5g/L时 ,葡萄糖的平均比消耗速率为 1 .1 4× 1 0 -11、1 .47× 1 0 -11、1 .78× 1 0 -11和 2 .2 4× 1 0 -11g/( cell· h) ,乳酸的平均比生成速率为 6.0× 1 0 -12 、8.3× 1 0 -12 、1 1 .6× 1 0 -12 和 1 6.6× 1 0 -12 g/( cell· h)。葡萄糖转化成乳酸的比例为 52 %、57%、64%和 74%。结果表明 ,在 Wu T3细胞的流加培养中 ,当葡萄糖浓度在 0 .2～ 1 .5g/L时 ,葡萄糖浓度越低 ,葡萄糖的比消耗速率和乳酸的比生成速率越低 ,葡萄糖转化成乳酸的比例越低 ,从而提高了葡萄糖的有效利用率 ,减少副产物的生成。     

二维机械装配图轮廓识别与消隐裁剪算法

基于 ＡｕｔｏＣＡＤ软件系统,利用 ＡｕｔｏＣＡＤ软件提供的二次开发环境和技术,针对绘制机械装配图中的装配图轮廓识别和消隐裁剪算法问题,设计了零件的统一表示模式,提出了一种新的轮廓自动识别算法,可将内外轮廓识别统一起来,并采用线段端点分类点排序的策略,快速可靠地解决需要消除的部分。最后,给出一个稳定可靠的任意多边形裁剪算法。     

人GrnE单克隆抗体的制备和鉴定

为了制备获得针对人Grn E单克隆抗体,将原核表达GST-Grn E蛋白作为免疫原,免疫Balb/c小鼠,经过融合及初步筛选,获得5株针对Grn E的单克隆细胞株.选取其中3株(1D5、2E1和3F7)制备腹水,并通过western blot和免疫荧光染色对该3株单克隆抗体进行鉴定.在此基础上,进一步对1D5和3F7两株单克隆抗体是否可以用于免疫沉淀实验进行了检测.上述实验表明,本研究成功制备了针对Grn E结构域的单克隆抗体,而且所制备的单克隆抗体具有良好的特异性.     

JAL1杂交瘤细胞的批量培养研究

研究了不同葡萄糖、谷氨酰胺浓度下JAL1细胞的生长、糖耗、乳酸及氨的生成、单抗合成等代谢过程及该株细胞的基本代谢规律，同时对该株细胞生长和单抗生产的动力学方面进行了研究，在细胞培养箱中，采用方瓶批量培养杂交瘤细胞，培养条件为pH7.0-7.5，温度37℃，5％CO2。实验表明，在不同浓度葡萄糖、谷氨酰胺的培养液中，细胞的活性细胞密度、总细胞密度、细胞活性上均有不同，相应地，对细胞的最大比生长速率、葡萄糖最大比消耗速率、乳酸最大比生成速率以及单抗最大比合成速率也有不同程度的影响。实验结果还表明，该株细胞的单抗分泌是属于负生长耦联型的。