培养方法及胎牛血清浓度对人胎儿成纤维细胞体外生长的影响

采用单细胞培养法和组织块培养法从原代培养人胎儿成纤维细胞,并在不同体积分数胎牛血清(FBS)(0%、4%、8%、10%、12%)的条件下观察人胎儿成纤维细胞培养的状况并采用台盼蓝染色法进行活细胞计数.结果表明,早期由组织块培养法原代培养获取的细胞形态要比单细胞培养法原代培养获取的细胞稍好些,且在细胞传代后极少出现无法贴壁的死细胞.FBS对hFFs生长影响比较明显.在实际应用中,在体积分数8%FBS下,采用组织块培养法进行人胎儿成纤维细胞体外培养,效果良好.     

牦牛心脏原代成纤维细胞系的建立及鉴定

旨在建立牦牛胚胎心脏原代成纤维细胞系并对其进行鉴定.以牦牛胚胎心脏组织块为研究对象,运用组织块法对其进行分离培养获得原代细胞,使用胰酶消化法对原代细胞进行传代培养,通过MTT法检测细胞增殖活性,利用HE染色法及秋水仙素处理染色体鉴定细胞外形,选取4个成纤维标志性基因TGF-β、FSP-1、S100A4、Vimentin,通过RT-qPCR技术对基因的表达情况进行鉴定.结果显示成功将原代分离培养的成纤维细胞传代至11代;通过外型的一系列检测方法发现其符合成纤维细胞的外形,该细胞活力充足,生长规律符合“S”型生长曲线;荧光定量检测以上四种成纤维细胞特征性基因在不同代数中均表达且相对稳定,结果证实分离培养出的细胞符合成纤维细胞系的分子表达特征.本研究成功建立了牦牛胚胎心脏原代成纤维细胞系,集成了该细胞系的鉴定流程,为今后牦牛进一步研究提供相关的细胞系平台.     

大鼠胚胎成纤维细胞的原代培养和分裂抑制

大鼠胚胎成纤维细胞（REF）可以作为培养大鼠胚胎干细胞的滋养层．对REF进行分离、原代培养、冻存和有丝分裂抑制,得出如下结论：分离REF时使用组织块生长法优于胰酶消化法;应用血清含量〉40％、DMSO含量为20％的冻存缓冲液能在冻存时最大程度地降低REF所受的伤害;进行REF分裂抑制时使用丝裂霉素C处理的最适终浓度为3ug／m1．     

二乔刺槐组织培养及其体外植株再生技术研究

以二乔刺槐叶片为试验材料,进行组织培养及其体外植株再生技术研究.结果表明,二乔刺槐幼嫩叶片进行组织培养的适宜基本培养基为WPM,芽诱导最适培养基为WPM+IBA0.25mg.L-1+BA5mg.L-1+GA30.05mg.L-1,根诱导最适培养基为WPM+IBA0.3mg.L-1.该结果为二乔刺槐的细胞工程和基因工程操作及其新品种的快速繁殖奠定了基础.     

丹参嫩茎组织培养及无性系建立的研究

为保护濒危植物丹参,实现人工栽培,以嫩茎为材料,进行了愈伤组织诱导与分化、试管苗生根、继代、移栽和定植研究.结果证明:MS+6-BA0.3 mg.L-1+2,4-D2.0 mg.L-1+NAA0.8 mg.L-1是丹参嫩茎愈伤组织诱导培养和继代培养的理想培养基;1/2MS+AgNO30.2 mg.L-1和1/2MS+AgNO30.2 mg.L-1+6-BA 0.1 mg.L-12种培养基是丹参颗粒状愈伤组织块分化培养的理想培养基;以经过浓度为10mg.L-1的NAA溶液处理3 m in的不定芽为材料、以1/3MS+IAA0.4 mg.L-1为培养基的方法是丹参不定芽生根培养的理想方法.试管苗移栽成活率为92.7%,定植成活率为99.2%.定植的试管苗保持了野生丹参的所有生物性,建立起丹参的无性系.     

组织工程—体外重建人体组织

全部或部分重建皮肤、肝、骨髓、神经等组织一直是基础研究、临床医学和生物工程领域的科学家们所追求的目标，动物细胞与组织体外培养技术的发展使之成为可能。本文主要综述组织工程的研究现状，应用及存在的问题。     

树鼩角膜内皮细胞体外原代培养方法的建立

摘要: 目的 建立树鼩角膜内皮细胞( corneal endothelial cells,CECs) 体外分离、培养及纯化的稳定技术,为人类眼科角膜疾病提供新的实验材料。方法 通过比较揭膜法、双酶消化法及揭膜-消化两步法,确定每种树鼩原代 CECs 取材方法的优劣性。分别使用 DMEM /F12,M199,Ham’s F12 /M199 三种培养液以确定树鼩 CECs 原代细胞最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂、低血清培养法及梯度消化法来探讨树鼩 CECs 纯化的可行性。苏木精-伊红染色观察细胞形态,根据树鼩神经元烯醇化酶( NES) 设计并筛选特异性引物,使用 PCＲ 方法检测细胞 NES 表达情况并用 NES 抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果 揭膜法可以快速、有效得到高纯度的树鼩 CECs 细胞。Ham’s F12 /M199 培养液是树鼩 CECs 的最适培养液。使用 TGF-β 抑制剂可以达到 CECs 的纯化目的。结论 优化的树鼩 CECs 细胞培养纯化方法对树鼩 CECs 的体外培养更适宜,优化条件下分离培养的细胞符合 CECs 的一般特征。     

雨久花的组织培养及无性系的建立

为满足人工栽培对雨久花种苗的大量需求,以组织培养及无性系建立的方法进行了雨久花快速繁殖的研究.试验以雨久花的嫩茎为材料,进行了愈伤组织的诱导、分化、不定芽生根、试管苗移栽与移植的研究.结果证明,MS+BA 0.6 mg·L-1+2,4-D 1.2 mg·L-1是诱导嫩茎形成具有分化能力愈伤组织的理想培养基,1/2MS+Ag(N03)20.6 mg·L-1是诱导愈伤组织分化的理想培养基,1/3MS+IAA0.5 mg·L-1是试管苗生根培养的理想培养基.试管苗在温室中移栽成活率可达98 %以上,移植于池塘边后试管苗生长旺盛.建立起的雨久花无性系可作为人工栽培的种苗.     

植物组织培养实验教学改革与实践

为适应创新型、复合型和应用型人才培养的需要,对植物组织培养实验教学进行了改革。通过完善实验教学大纲,增加基本技能培养的内容;改革实验课程体系,优化实验内容;紧密结合科学研究,培养学生创新能力,以及优化实验考核体系等途径和方法,取得了良好的教学效果,全面培养了学生的能力。     

新生大鼠心肌细胞原代培养方法的改进

探讨更为简单的SD大鼠心肌细胞原代培养的方法,使分离的心肌细胞达到理想的存活率和纯度,为临床应用建立心肌细胞模型.取出生24 h内SD大鼠的左心室,剪碎、消化、分离和纯化,进行培养,0.1 g/L胰酶消化,可以分离到形态完整、贴壁生长的心肌细胞.进一步通过离心、差速贴壁和化学试剂抑制非心肌细胞生长,纯化得到95%以上的心肌细胞.成功建立了心肌细胞体外培养模型,获得了高纯度的心肌细胞.     

高山杜鹃花苞组织培养和优化体系的建立

以高山杜鹃"粉冠博士"的花苞为外植体,对其进行初代培养、继代增殖培养、生根培养和组培苗炼苗移栽的研究,建立高山杜鹃组织培养快速繁殖技术体系。结果表明:花苞外植体最佳诱导培养基为Anderson+IAA 1.0 mg/L+KT 12 mg/L;组培苗继代增殖培养基为Anderson+IAA 1.0 mg/L+KT 3.0 mg/L;组培苗生根培养基为1/2 Anderson+IAA 4.0 mg/L+活性炭3.0 mg/L;组培苗炼苗移栽到进口草炭与珍珠岩体积比为3∶1的基质中,成活率达86%。     

培养及接种方式对丽格海棠组培快繁的影响

以丽格海棠叶片为外植体,研究不同接种模式和培养方式对丽格海棠组培快繁的影响.结果表明:丽格海棠叶片诱导分化培养时,叶片反放的接种模式优于叶片正放;丽格海棠丛生芽增殖培养时,液体培养,尤其是丛生芽前期增殖时采用液体旋转培养效果优于固体培养.此结果对丽格海棠组培快繁具有一定的指导意义.