苏云金芽孢杆菌cry1I基因沉默的研究

分析了苏云金芽孢杆菌(Bt)cry1和cry1I基因的保守区,在cry1类基因的下游和cry1I基因的上游设计了一对通用引物,用于检测cry1I与cry1类基因的连锁现象.从鉴定的142株Bt分离株中,PCR扩增发现71株出现约1.4kb的阳性带,说明这一现象广泛存在于Bt菌株中.在此基础上用pGEM-T Easy载体克隆了菌株Bt07和J8中的连锁序列,序列分析表明,Bt07中是cry1I基因与cry1Db基因连锁,间隔区为504bp;J8中是cry1Ia基因与cry1Ac基因连锁,间隔区为506bp.进一步比较间隔区序列,同源性达93.7%,同时含有多个原核生物终止序列,且未发现启动子序列,揭示了这两个菌株中cry1I基因沉默的成因.     

透明颤菌血红蛋白基因在苏云金杆菌中的表达

采用大肠杆菌与枯草杆菌的穿梭质粒pMK4作为载体,构建了含有果聚糖酶基因(sacB)启动子和vgb基因的重组质粒pMK-SV.通过原生质体和电转化,将pMK-SV转入苏云金杆菌中,经影印筛选得到转化子Bt4.对Bt4诱导表达,与原菌株相比Bt4的生长量增加了20.2%.     

我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌污染调查、耐药性及其肠毒素基因检测

调查了2011—2016年我国市售食用菌中金黄色葡萄球菌的污染情况,并对分离到的相关菌株进行了肠毒素基因的检测和耐药性分析。收集全国39个城市699份市售食用菌,利用定性和定量检测方法,检出金黄色葡萄球菌阳性样品33份,平均污染率4.72%,污染水平9.75MPN/g。24种抗生素的药敏结果显示,分离株耐药情况严重,对利奈唑胺、利福平敏感,对氨苄西林等22种抗生素都产生不同程度的耐药。7株分离株经表型和分子鉴定确定为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。运用聚合酶链式反应法对分离的39株金黄色葡萄球菌进行了18种肠毒素基因检测,约60%分离株携带4~6种肠毒素基因,携带率最高的肠毒素基因是sei,其次是sem、seg、seq、sec、seb、sen。本研究反映了我国市售食用菌金黄色葡萄球菌污染的潜在风险,相关分离株具毒性潜力,且耐药性严重,应引起重视。     

源于地衣的苏云金芽孢杆菌分离及PCR-RFLP分析

以非维管植物地衣为分离材料,采用热处理加抗生素及醋酸钠的方法,经常规形态学鉴定,分离到6株苏云金芽孢杆菌.为了解其生物学特性,分别对这6株菌株进行生理生化测定和cry基因的PCR-RFLP检测,结果显示: 6个菌株均含有cry1、cry1I 、cry2基因,所有菌株均不含cry3、cry4、cry5、cry6、cry8、cry10、cry11基因.初步确定6株菌株中含有5种 cry1亚类基因(cry1Ad,cry1Ba,cry1Cb,cry1Da,cry1Ea),1种cry2亚类基因cry2Ac,2种cry1I基因亚类(cry1Ia1、cry1Ib1),其中有2个菌株的PCR-RFLP图谱均出现特异性片段,推测可能存在新基因.     

种植转Bt水稻对固氦细菌多样性和固氮酶铁蛋白基因nifH的水平转移的影响

通过对具有不同种植年限和不同种植强度的转Bt基因水稻与非转Bt基因水稻土壤中的细菌以及固氮细菌群落结构进行研究,发现转Bt水稻的种植可能会影响土壤中微生物群落的多样性,但是这种影响的可能只是暂时的,通过对测量种植水稻的芽长实验也得出相似的结论．另外,根据16SrDNA基因构建的系统发育进化树揭示了本实验分离的固氮细菌的遗传多样性,发现实验土壤中的固氮细菌主要分为放线菌门（Actinobacteria）（92％）和α-变形菌门（α-Pro—teobacteria）两大类．分离出的8株典型的固氮菌株,其16SrDNA基因和固氮基因nifH的序列两者的分布不一致,nifH的分布更为紧凑,为固氮基因可能发生了原位水平基因转移提供了证据．     

几丁质酶在苏云金芽孢杆菌中的分布及抑小麦赤霉菌菌株的筛选

利用几丁质平板法和几丁质酶基因特异引物PCR两种方法,对本室保藏的995株苏云金芽孢杆菌的几丁质酶及其基因进行了检测.结果显示所有被检测的菌株都可以在几丁质为唯一碳源的平板上生长.其中93.0%的菌株PCR检测阳性,54.1%的菌株可产生明显的水解圈.证明苏云金芽孢杆菌中几丁质酶普遍存在.通过研究发现Bt几丁质酶活力高低与其血清型及杀虫晶体蛋白基因的类型无相关性.同时对286个菌株进行了抑小麦赤霉菌实验,筛选出19株抑真菌效果较好的苏云金芽孢杆菌.     

抗虫基因Bt的研究进展

植物抗虫基因为防治农业害虫提供了一条崭新途径。而Bt基因的应用最普遍，对Bt基因的作用机理、分类、应用及可行性改造等方面作了详尽的阐述，着重分析和探讨了目前抗虫基因Bt植物转基因育种中存在的一些问题。并就这些问题及如何合理持续利用Bt基因进行了探讨。     

大肠杆菌不耐热肠毒素及其分子生物学

产肠毒素大肠杆菌是与腹泻相关的一类大肠杆菌 ,肠毒素可分为耐热肠毒素和不耐热肠毒素。文章从肠毒素免疫性与作用机理 ,不耐热肠毒素的基因质粒、定位、亚基因克隆及表达 ,以及牛源大肠杆菌不耐热肠毒素等方面内容的国内外进展进行了讨论     

转录组分析sgf73基因缺失对粟酒裂殖酵母生长代谢影响的分子机制

为研究粟酒裂殖酵母sgf73基因缺失后的关键基因和关键代谢通路,采用RNA-Seq测序技术对野生型酵母菌株及sgf73基因缺陷型菌株进行测序及生物信息学分析,并进行GO和KEGG功能富集分析.结果表明：sgf73基因缺陷型菌株中高表达基因有1 834个,极高表达基因有6个,且有1 714个差异表达基因,包括934个上调基因,780个下调基因;sgf73基因敲除导致细胞代谢和跨膜转运过程异常变化;MAPK信号通路中参与周期调控cki1,cki2和cdc25基因的下调导致sgf73Δ菌株有丝分裂时间延长;调控细胞骨架rgf2,rho1和stt4基因的下调导致sgf73Δ菌株肌动蛋白环收缩异常.     

提高苏云金芽孢杆菌制剂杀虫效果的策略

苏云金芽孢杆菌制剂是一种主要的生物杀虫剂 ,本文从培育高效菌株、增加昆虫对 Bt的摄入量、化学杀虫剂促进 Bt的杀虫作用、植物次生物质的增效作用、Bt与其杀虫微生物及其代谢产物的协同作用、简单化合物提高 Bt的毒力以及保护 Bt免受紫外光的损伤等方面提高 Bt制剂的杀虫活性进行了论述。     

Inheritance of resistance to Helicoverpa armigera of 3 kinds of transgenic Bt strains available in upland cotton in China

There are 3 kinds of transgenic Bt strains, Shanxi 94-24, Zhongxin 94, and R19, in upland cotton in China. Their transgenic Bt insect-resistance cultivars or hybrids have been developed and grown by farmers. Genetic studies indicate that the resistance of the 3 transgenic Bt cotton strains to Helicoverpa armigera is controlled by one pair of non-allelic dominant genes. Linkage relationship between the resistant genes of R19 and Shanxi 94-24 transgenic Bt strains shows that they may be inserted in the same chromosome. F₁ hybrids crossed among the 3 strains show that high levels of protection from feeding damage are the same as that of their parents. Therefore, there is no co-suppression phenomenon in many transgenic plants. The results presented here afford a fundamental reliance in developing transgenic Bt insect-resistant cultivars and exploiting the heterosis of hybrids in upland cotton.     

苏云金芽孢杆菌cry1基因的PCR-RFLP鉴定分析

利用PCR—RFLP技术对含有已知cry1基因的8株标准菌株和2株遗传工程菌进行了基因分析，证实了该方法的可行性．并在此基础上鉴定了分离保藏的70株B．t菌株的cry1型基因，结合SDS—PAGE分析以及室内生物测定结果，讨论了基因型与蛋白表达及毒力之间的关系．     

Evaluation of transgenic tobacco expressing two insecticidal genes to delay resistance development ofHelicoverpa armigera

The resistance ratio ofHelicoverpa armigera to Cry1 Ac insecticidal protein fromBacillus thuringiensis (Bt) is 13.1- and 3.02-fold after 18 generations of selection by transgenic tobacco expressing Bt or two (Bt and CpTI) insecticidal protein genes, in which the average corrected mortality for each selection treatments is about 60%. The mortality of selected population by transgenic Bt gene tobacco is significantly lower than the control strain when fed on transgenic tobacco plants. The mortaltty of the selected population by transgenic two genes tobacco was not significantly different from the control strain. This is the first experiment under laboratory condition which has proved that transgenic two genes tobacco could significantly delay resistance development ofH. armigera compared with one gene.     

双亲灭活原生质体融合技术在苏云金杆菌菌种选育上的应用(Ⅱ)——融合产物的鉴定

在双亲灭活原生质体融合选育苏云金杆菌新菌株的过程中,最终筛选出一株毒力效价较双亲分别提高４１％和１１７％的新菌株３＃。该菌株的酯酶同工酶谱及晶体蛋白多肽均与双亲有显著不同。     

杀虫防菌Bt工程菌的构建

N-乙酰高丝氨酸内酯（N-acyl-homoserine lactones,AHLs）是革兰氏阴性细菌胞间通讯的信号分子,能够调控许多植物病原菌的致病基因的表达,但如果内酯酶将其水解,则会影响病原菌的致病活性,植物就不会染病。苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）,作为生物杀虫剂已有多年使用的历史,本研究通过生物技术手段成功地构建了携带信号分子AHL水解酶基因的穿梭载体pHTss10304,并转入到具有Bt中,构建成工程菌Bt24、工程菌Bt33、工程菌Bt34和工程菌Bt36。通过设计,实现了Bt工程菌的多功能改造,为BT工程菌的应用提供了更为广阔的空间,为生物防治菌的开发现有菌剂提供了新的思路。     

含铀土壤中苏云金芽胞杆菌的分离与鉴定

从新疆某铀矿厂采集土样,通过光学显微镜观察其伴胞晶体,并经生理生化特征和cry基因的鉴定确认为苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）,将其命名为BRC-ZYR4。利用PCR．RFLP方法和SDS—PAGE方法对该菌株进行了cry基因型和杀虫晶体蛋白（Insecticidal Crystal Proteins,简称ICPs）的鉴定。结果表明,BRC-ZYR4可能含有crylAd、crylcb和crylEa基因,含有约130、75、50、30和25kDa ICPs。     

酯酶同工酶技术在选育Bt新菌株中的应用

研究了苏云金杆菌亲本菌株及通过原生质体融合而获得的融合子的酯酶同工酶谱，通过比较分析，融合子的酯酶同工酶谱较之亲本菌株有显著变化，表明酯酶同工酶在原生质体融合中可作为鉴定融合子的遗传标记     

土壤放线菌分离及无抗菌活性株的激活

从广州的稻田土里分离出三支菌，其中一株（２０号）产生的抗生物质不仅可抑制多种细菌，而且也可抑制白色念珠菌，经初步鉴定为诺卡氏菌属放线菌；另外两支为天然无抗生活性的放线菌，属拟诺卡氏菌。对两株无活性的菌进行紫外照射，然后用四环素和盐酸羟胺复合诱变，经初筛后发现三支激活株，其中一支产生了较明显的抗真菌活力。最后对激活株和２０号菌所产生的抗生物质进行初步研究，证明可能是一种非多烯大环内酯类抗真菌抗生素。实验结果表明这几支天然无活性的供试菌中均含有可被激活的沉默基因，这些基因和抗生素合成有关。