关于放射碘化胰岛素(I~(125)或I~(131))的制备

为建立放射免疫法测定胰岛素的含量和放射受体法测定胰岛素的活性,以便代替古老的小白鼠惊厥法和繁杂的兔血糖法,为胰岛素生产工艺改革和糖尿病的临床研究提供条件,首先必须制备高比强度的标记胰岛素,即在胰岛素分子上标记一种放射性物质。胰岛素是一种蛋白激素,在构成胰岛素分子中的酪氨酸的苯环可被碘化,且不影响其生物活性。我们采用国产的I125或I131制备成高比强度的碘化胰岛素,用于放射免疫或放射受体测定。 一、所用试剂及其配制 1. NaI125或 NaI131无载体 2.胰岛素溶液用0.05M pH7.4 Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液配制成每毫升含1毫…     

大鼠肝细胞膜胰岛素受体与胰岛素的相互作用

采用125I-胰岛素标记法研究大鼠肝细胞膜中胰岛素受体与胰岛素的结合性质,用31P-核磁共振法(31P-NMR)研究大鼠肝细胞膜中胰岛素刺激下的胰岛素受体体外自磷酸化,实验结果表明大鼠肝细胞膜胰岛素受体与胰岛素结合的最佳酸度大约为pH=7.5,并且表明大鼠肝细胞膜上的胰岛素受体为高亲和、低容量和低亲和、高容量两型受体.非放射性的31P-NMR波谱法检测到胰岛素刺激下的大鼠肝细胞膜胰岛素受体的体外自磷酸说明所提取纯化的胰岛素受体具有生物活性.     

固相放射免疫法测定胰岛素及其在工艺改革中的应用

放射免疫分析是把同位素的高度灵敏性和免疫化学技术的高度特异性结合起来,对超微量样品进行定量分析的方法。目前,用放射免疫法测定胰岛素含量还不普遍,特别是把它应用到工业生产中去,尚为一新问题。要改革胰岛素生产工艺,没有切实可行的测定方法是不行的。我们遵照毛主席“教育必须为无产阶级政治服务,必须同生产劳动相结合”的教导,想工农兵之所想,急工农兵之所急,并与有关单位协作,克服了重重困难,建立了方法,并测定了工艺改革中近百个样品。现将放射免疫测定法的基本原理、测定方法及测定结果分述于下。 一、基本原理 免疫的本质是抗原…     

糖尿病家兔胰岛素受体结合性质及巯基含量的研究

采用^125I-胰岛素标记法研究糖尿病模型家兔肝细胞膜中胰岛素受体与胰岛素的结合性质,用巯基测试法测定正常和糖尿病模型家兔肝脏胰岛素受体的巯基含量,实验证明糖尿病家兔肝细胞膜胰岛素受体不论是胰岛素的高亲和位点还是低亲和位点,胰岛素受体与胰岛素的解离都显著减弱．巯基测试结果表明糖尿病模型家兔肝脏的胰岛素受体巯基含量明显下降,提示糖尿病家兔肝脏可能存在氧化损伤．     

甜菜碱的生物活性研究

介绍了甜菜碱的生物活性,包括调节体内渗透压,增加细胞Na/K-ATP酶的活性;促进脂肪代谢,抑制脂肪肝,其机制是甜菜碱能显著促进体内腺苷甲硫氨酸(SAM)的合成,降低肝脏中胆固醇和甘油三酯的含量;应用受体的放射配基结合分析法测定出甜菜碱对大鼠肝细胞膜表皮生长因子受体(EGF)及其酪氨酸蛋白激酶(TPK)有显著的结合抑制作用.     

生物提取胰岛素中高分子蛋白杂质去除工艺的优化

对猪胰脏来源的胰岛素原料药中的高分子蛋白质杂质采用超滤膜和微孔滤膜过滤方法去除并对工艺进行了优化. 通过去除后的原料药活性、收率、高分子蛋白质杂质去除率等参数并与标准品的比对,确定了高分子蛋白质杂质去除最佳条件. 结果表明,经50 kD 超滤膜过滤方法能有效去除生物提取胰岛素原料药中高分子蛋白质杂质,并且收率较高,生物活性损失较低,可用于猪胰脏来源生物提取胰岛素的生产.     

唐古特青兰挥发油抗Ⅱ型糖尿病机理研究

目的:研究唐古特青兰挥发油对实验性Ⅱ型糖尿病模型大鼠的作用,并探讨其作用机制.方法:尾静脉注射链脲霉素(50mg/kg),喂饲高脂高热量饲料从而建立实验性Ⅱ型糖尿病大鼠模型,经灌胃治疗后观察唐古特青兰挥发油对实验动物的作用效果,测定其血糖、血脂、血清胰岛素、和肝细胞膜的胰岛素受体的含量.结果:唐古特青兰挥发油高剂量组能明显降低糖尿病小鼠的血糖水平,改善血脂水平,使胰岛素水平恢复正常,增加肝细胞膜胰岛素受体数目,与模型组相比有显著性差异(P0.01).结论:唐古特青兰挥发油高剂量对实验性Ⅱ型糖尿病模型大鼠有显著治疗作用,其作用机制可能与改善胰岛素受体水平,增加肝细胞膜胰岛素受体数目有关.     

关于(A6,A11)-双位点突变胰岛素原作为外源肽呈递骨架可行性的研究

通过重组DNA技术,以(A6,A11)-双突变胰岛素原分子为支架构建了含有外源抗栓肽功能区的嵌合分子,并在大肠杆菌进行了表达和纯化.对嵌合分子进行胰岛素受体结合活性、放射免疫活性及抗血小板聚集活性分析,结果表明该嵌合分子具有较强的血小板聚集抑制活性,而无胰岛素生物活性,证明以(A6,A11)-双突变胰岛素原作为外源肽序列呈递骨架是可行的.     

发光免疫分析法在医学中的应用

自从Berson和Yalow发展放免测定技术以来，超微量物质的示踪分析有了很大突破，然而由于放射标记物和有关废物处理产生很多环境放射污染问题，迫使人们去寻找敏感性高的非放射性标记的免疫分析法。发光免疫分析技术（LIA）就是其中之一。发光现象早己为人们所知，把发光反应与免疫反应结合起来建立发光免疫分析法却是近二十余年的事。这种方法即有发光检测的灵敏、快速性，又有免疫分析的特异性，为免疫分析技术提供了类同放免的新方法。1基本原理化学发光是指化学反应引起反应产物形成激发态，若此产物分子具有发射荧光的能力，则可发出…     

药用胰岛素中高分子蛋白质杂质含量过程控制方法研究

采用高效液相色谱法,以牛血清白蛋白为标准,对照品对生物提取法制备的药用胰岛素中高分子蛋白质杂质进行含量测定,高分子蛋白和胰岛素保留时间分别在7.2-9.2 min和12.0 min之间,能够达到基线分离,整个过程控制相对标准偏差RSD10%,符合生产工艺要求.对后期生产工艺实施两种不同改进措施(1、2)得到的产品胰岛素含量90%,符合国家生产标准.实验结果表明实施工艺改进措施2后能生产出符合国家标准的药用胰岛素.研究建立的测定方法适合原料药胰岛素企业对生产过程中高分子蛋白质杂质含量控制,并为生物提取法进行原料药胰岛素研究与开发提供相关技术信息.     

实时定量PCR研究大鼠肌肉组织基因表达

运用实时定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)研究了正常以及患有糖尿病大鼠的肌肉组织中胰岛素信号转导通路中重要的信号传导分子基因表达,结果表明:四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠肌肉组织的胰岛素受体、胰岛素受体底物1和葡萄糖转运体4的mRNA表达下调,胰岛素磷脂酰肌醇3激酶的mRNA表达上调;糖尿病大鼠骨骼肌葡萄糖转运体4的mRNA含量下降可能会引起糖摄取能力的下降.从而导致四氧嘧啶诱导大鼠肌肉组织胰岛素抵抗.     

胰岛素测定的进展

<正>胰岛素是胰腺中β细胞分泌的一种蛋白激素,1921年Banting Best首先从胰腺中提取成功。1995年Sanger阐明了它的化学结构。1965年我国科学工作者首先用人工合成的方法成功地合成了具有生物活性的牛胰岛素。 胰岛素是调节糖代谢的重要激素,是治疗由于胰岛素缺乏而引起的糖尿病的重要药物。由于疗效确切,世界各国药典都收载该药物。该药生理作用强、剂量小,因此测定方法要求灵敏、准确。     

凝聚法测定调理素蛋白的生物活性

调理素蛋白在临床上可以用于该蛋白减少病人的治疗,在细胞培养中可以用于无血清培养。它的活性测定可以作为临床诊断的指标。国外虽有巨噬细胞吞噬法和明胶胶乳凝聚法等测定其生物活性,但是由于方法繁琐或须用到一些贵重仪器,所以在国内未能发展,本文介绍的凝聚法可以用一般的分光光度计(或光电比色计)测定其生物活性,是一种适于国内实际情况的简便方法。     

线性拟和法测定E和μ

文中介绍了测定材料弹性模量E和泊松比μ的线性拟和法，阐述了直线拟和的方法和基本原理，并将拟和法结果与实验值作了比较，充分证明用该方法处理实验数据是切实可行的。     

阿尔茨海默病胰岛素信号通路的研究进展

胰岛素受体高度表达于海马,在大脑正常功能中发挥重要作用。提高脑内胰岛素作用可以增强与海马相关的学习和记忆过程。阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)与脑脊液胰岛素水平降低及脑胰岛素抵抗密切相关,并伴有胰岛素及胰岛素样生长因子受体表达降低,胰岛素受体底物-1的丝氨酸磷酸化增强等。因此,胰岛素信号通路受损可能是导致AD的重要原因。     

振动法测定织物弯曲刚度的探讨

本文对弯曲共振法测定织物弯曲刚度的基本原理进行了分析讨论和对不同弯曲刚度的八种类型的织物进行了测定;并与斜面法、心形法和风格仪等测定的弯曲刚度指标进行了比较。实验结果显示出振动法与其他方法测得的弯曲刚度指标间存在着良好的线性相关。     

米非司酮受体结合力及抗糖皮质激素活性的研究

目的:探讨米非司酮与孕激素受体及糖皮质激素受体相互作用的关系。方法:以放射配体结合实验测定米非司酮与家兔子宫胞浆孕激素受体及大鼠肝细胞浆糖皮质激素受体的相对结合亲和力。结果:与孕酮相比较,米非司酮的相对结合亲和力(RBA)为396.67±25.32,50%抑制浓度(IC50)为(6.61±1.20)nmol/L,P<0.01;与地塞米松相比较,米非司酮的RBA为344.41±57.41,50%IC50为(4.21±1.02)nmol/L,P<0.05。结论:米非司酮与孕激素受体的结合力强于孕酮,具有强的抗孕激素作用和一定的抗糖皮质激素作用。     

几种蛋白质或多肽放射性碘化方法的比较

在放射免疫和放射受体分析中,所要测量的蛋白质或多肽的浓度往往在 pMole 或更低的范围,因此要求放射性配体必需有高比放射性。多肽、蛋白质用 H~3或 C~(14)标记比较困难,最常用的是 I~(131)或 I~(125)标记。后者不仅经济便宜,测量操作简便,而且灵敏度也大大提高。多肽或蛋白质的碘化,要求被标记物的用量少,比放射性高,特别是要保持生物活性。比较熟悉的碘化方法为1.一氯化碘法,2.电解法,3.氯胺-T 法和乳过氧化物酶法。这些方法大多基于蛋白质分子中酪氨酸残基的亲电子碘化作用(为图1所示)。但这些方法存在的共同问题是亲电子碘化作用所要求的氧化条件导致了蛋白质的受     

旋转部件密封油脂杂质含量的消光法测定

探讨了利用消光法原理来测定密封油脂中煤尘含量的基本原理，给出了具体的测定方法和自动测定的软、硬件设计，测定结果经比对试验满足精度要求，方法简便、快速。     

液下气泡检漏方法研究

探讨了液下气泡检漏法的基本原理、泄漏率计算方法以及检漏精度和分辨率。应用该方法对石棉橡胶垫片的泄漏率进行了测定，试验结果与采用集漏空腔增压法测得的泄漏率具有较好的可比性。分析了液下气泡法用于工程实际时应注意的问题。