人防御素研究进展

人防御素是机体天然防御体系的重要组成部分,存在于人中性粒细胞中,具有广泛的杀菌活性,是当前国内、外生物医学研究的热点.文章介绍了人、β、三种防御素的最新研究进展,重点强调其结构特征,特别是人β-防御素的结构特征.     

兔防御素基因酵母表达的研究

防御素是由动植物体内产生的一种多肽类抗菌、抗病毒活性物质,本研究根据巴斯德毕赤 酵母偏爱密码子的特性,设计兔防御素NP2基因,并构建巴斯德毕赤酵母的表达质粒pGAPZα-NP2,通 过LiCl法转入巴斯德毕赤酵母中,筛选和检测结果表明,兔防御素NP2基因已经成功地转入巴斯德毕 赤酵母,并得到表达。该实验可为兔防御素NP2抗菌抗病毒的研究和开发奠定理论和物质基础。     

运动诱导中性粒细胞的呼吸爆发及其氧化应激损伤——运动性疲劳的自由基学说的活性氧产生特点及其途径之一

目的:探讨运动引起中性粒细胞呼吸爆发与氧化应激及其过氧化损伤的关系,从而为运动引起的过氧化损伤导致的运动性疲劳的诊断及其防御提供理论根据.方法:通过文献法及逻辑推理法分析运动诱导中性粒细胞的呼吸爆发过程及其产生的活性氧对机体的氧化损伤导致的运动性疲劳的特点.结果:运动激活中性粒细胞NADPH氧化酶介导产生活性氧增多导致中性粒细胞的氧化应激反应,而体内活性氧增多引起的运动性疲劳体内的发生机理是运动诱导的中性粒细胞氧化应激导致的过氧化损伤所致.结论:运动引起中性粒细胞的氧化应激和过氧化损导致免疫细胞功能降低及其运动性疲劳发生的主要因素,可通过抗氧化剂、谷氨酰胺补充、NADPH氧化酶的抑制等手段进行防护.     

哺乳动物防御素的研究及应用

防御素(Defensins)是近年来发现的广泛存在于生物界的一类阳离子抗菌活性肽.其中哺乳动物防御素的抗菌谱最为广泛,具有很高的应用潜力.文章针对哺乳动物防御素的组成分布、表达调控、生物学活性、基因工程等方面进行了研究.     

β-防御素的生物学活性及应用前景

β-防御素是近年来发现的一类具有广谱抗微生物活性的阳离子小肽,在天然性免疫和获得性免疫中发挥着重要的作用.本文对β-防御素生物学活性及应用研究进展进行了综述.     

新生家兔白细胞系统数量和形态的日龄相关性变化

本文对15～65日龄新生家兔外周血白细胞总数、白细胞分类计数及各类白细胞的形态变化作动态观察,并将各有关指标与成年兔的相应指标作了比较。结果指出,15日龄新生兔白细胞总数略低于成年兔,且其中嗜中性粒细胞和单核细胞数量较多,而淋巴细胞数量较少;25日龄前后白细胞总数与嗜中性粒细胞和单核细胞数量达到最大值,此后便趋减少;45日龄前后白细胞总数明显降低,稍后,又趋回升;从15日到65日龄淋巴细胞在数量上稳定增加,在形态上渐趋成熟。结果提示,15日龄新生兔非特异性免疫和特异性免疫均较弱;25日龄前后非特异性免疫功能最强,随后即趋下降并渐为特异性免疫功能所取代。     

人防御素HNP4在毕赤酵母中的表达

为了构建人防御素HNP4重组毕赤酵母（Pichia pastoris）表达载体pPIC9K-HNP4,建立高效、稳定表达人防御素HNP4的毕赤酵母表达菌株,并对表达产物进行检测与分析.利用PCR技术从pUC18-HNP4上扩增人防御素HNP4,构建人防御素HNP4重组表达载体pPIC9K-HNP4.SacI线性化后电击法转化入毕赤酵母GS115中,再通过同源重组到酵母染色体上,用G418筛选高表达菌株,在三角摇瓶中0.5%甲醇诱导表达.SDS-PAGE和Western blotting检测表达产物,用标准大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌株混菌板鉴定活性.结果显示,SDS-PAGE和Western-blotting可检测到大小4.0 kDa左右的目的蛋白条带,表达量可达到500 mg/L,表达的重组人防御素HNP4具有较强的杀菌或抑菌活性.提示成功构建人防御素HNP4重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-HNP4,并建立高效、稳定表达有明显抗菌活性的重组人防御素HNP4的毕赤酵母表达菌株.     

离乳1周SPF级与普通级新西兰兔血液学参数比较

目的测定离乳1周龄SPF级和普通级新西兰兔的血液生理生化参数,并进行比对研究。方法选取离乳1周龄健康的SPF级和普通级新西兰兔各20只,均雌雄各半;全部动物耳缘静脉取血,运用血液分析仪、全自动生化分析仪,对所采血液进行生理生化指标测定;将测定数据输入计算机,用SPSS软件统计分析,计算均数和标准差(x珋±s),并做t检验。结果离乳1周龄SPF级雌性与雄性兔相比较,白细胞数、总蛋白指标差异极显著(P<0.01),红细胞、葡萄糖等6项指标差异显著(P<0.05)。普通级雌兔和雄兔在平均血红蛋白浓度、淋巴细胞比率、总胆红素等3项指标差异显著(P<0.05)。SPF级雄兔和普通级雄兔比较,白细胞、中性粒细胞、碱性磷酸酶等20项指标差异极显著(P<0.01),红细胞、嗜碱性粒细胞等5项指标差异显著(P<0.05)。SPF级雌兔和普通级雌兔相比较、在白细胞数、中性粒细胞、碱性磷酸酶等9项指标差异极显著(P<0.01),在平均血红蛋白浓度、嗜酸性粒细胞等4项指标差异显著(P<0.05),其余差异不显著(P>0.05)。结论同等级新西兰兔血液生理生化参数差异较小,不同微生物控制等级对新西兰兔血液生理生化参数有显著影响。     

寡糖Lewis A模拟肽对小鼠急性腹膜炎的抑制作用

选择寡糖Lewis A模拟肽作为特异阻断剂, 探讨通过阻断E-选择素与其配体的结合抑制炎症的可能性. 向一组小鼠腹膜内注射酵母聚糖3 h后, 再于静脉注射表达寡糖Lewis A模拟肽IELLQAR的噬菌体或合成肽IELLQAR, 以空噬菌体或BSA作对照, 观察到实验组腹腔冲洗液中的嗜中性粒细胞显著减少. 为证实该结果, 髓过氧化物酶活性被测定, 酶活性的降低同嗜中性粒细胞的减少平行, 表明注射寡糖Lewis A模拟肽可能通过阻断E-选择素与其配体结合, 防止急性炎症的发生.     

中性粒细胞外诱捕网在肿瘤形成过程中的作用机制研究

中性粒细胞诱外捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)是一种来源于中性粒细胞的DNA网状结构,能够捕获和杀死病原微生物,从而在宿主防御中发挥重要作用.越来越多的证据表明NETs与肿瘤的进展密切相关,且能够通过多种方式促进肿瘤的复发转移.其临床意义也逐渐突显出来.本综述重点阐述促癌微环境中NETs的形成及促进肿瘤复发转移的机制,并对NETs临床应用价值进行探究.     

蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性

蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ,精氨酸酯酶活力为 2 1.98TAMEμmol/mg·min .该组分具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,但没有明显的出血反应 .肝素不影响该组分的凝血酶和精氨酸酯酶活性 ,EDTA、PMSF、DFP则会产生不可逆抑制作用 ,表明该组分属于金属蛋白 .     

水溶性海参皂苷的分离纯化及其抗真菌活性研究

从冻干仿刺参加工废弃液中分离纯化出水溶性海参皂苷,筛选并纯化出其强抗真菌活性组分,为利用水溶性海参皂苷研制高效抗真菌药物创造条件. 先后利用大孔树脂柱层析和硅胶柱层析对水溶性海参皂苷进行了纯化,并对各种纯化组分的抗真菌活性进行了测定. 在30%,50%,70%,80%,95%乙醇溶液的大孔树脂柱层析洗脱组分中,70%乙醇溶液洗脱组分对裂殖酵母菌和白色念珠菌的抗真菌活性最强. 70%乙醇溶液洗脱组分经硅胶柱层析进一步纯化后,得到了SC-1、SC-2、SC-3和SC-4四种纯化样品,除SC-1无抗真菌活性外,其它3种纯化样品对裂殖酵母菌和白色念珠菌均具有显著的抗真菌活性,且组分SC-2和SC-3的抗真菌活性高于SC-4. SC-2纯化样品在高压液相柱层析（HPLC）图谱中仅显示为单一洗脱峰,且在旋转蒸发后可形成结晶,表明其纯度极高,可用于高效抗真菌药物的研制.     

水溶性海星皂苷的分离纯化及其抗真菌活性研究

为了分离纯化出具有强抗真菌活性的水溶性海星皂苷,以罗氏海盘车(Asterias rollestoni)腕为实验材料,利用水抽提方法获得水溶性海星皂苷粗品,依次利用大孔树脂和硅胶柱层析对水溶性海星皂苷进行了纯化,并对其抗真菌活性进行了测定。研究结果发现,在30％、50％、70％、80％、95％乙醇溶液的大孔树脂柱层析洗脱组分中,70％乙醇溶液洗脱组分对白色念珠菌和裂殖酵母菌的抗真菌活性最强。70％乙醇溶液洗脱组分经硅胶柱层析进一步纯化后,得到了SF-1、SF-2、SF-3和SF-4四种纯化样品,其中SF-1纯化样品没有抗真菌活性,SF-2纯化样品具有极弱的抗真菌活性,SF-3和SF-4纯化样品均具有很强的抗真菌活性。SF-3纯化样品在高压液相柱层析(HPLC)图谱中仅显示单一洗脱峰,表明其纯度很高,可应用于高效抗真菌药物的研制。研究结果为利用水溶性海星皂苷研制高效抗真菌药物奠定了基础。     

野花生豆凝集素半胱氨酸残基的研究

将野花生豆经浸取、硫酸铵分级沉淀、猪胃粘蛋白-Sepharose4B亲和层析和SephacrylS-200HR分子筛层析后,可得到对人类A型血专一凝集的野花生豆凝集素（Crotalaria mucronata Lectin,CML),纯化的CML在PAGE和SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,在含8mol/L,脲和不含脲的缓冲体系中,分别用NEM修饰CML中的半胱氨酸残基,经计算被修饰巯基数目分别为3.1个和3.2个,且修饰后的CML的活性仍不丧失,通过NR/R单向SDS-PAGE和NR/R双向对角线SDS-PAGE研究,发现CML不含二硫键,表明CML中的半胱氨酸残基既与CML的凝集活性无关,也不形成稳定蛋白质结构的二硫键。     

Purification of mouse interferon by sequential affinity chromatography on poly(U)--and antibody--agarose columns.

Mouse interferon has been purified to homogeneity by twostep affinity chromatography. Two polypeptide bands were obtained on sodium dodecyl sulphate--polyacrylamide gel electrophoresis migrating at molecular weights 35,000 and 22,000, both having antiviral activity. The 35,000 but not the 22,000 band, also stained with periodic acid--Schiff. The specific activity was 8 X 10(9) of our laboratory units, corresponding to 2.4 X 10(9) NIH reference units.     

蚕豆外源凝集素的研究

用葡聚糖凝胶G—75亲和层析柱和猪甲状腺球蛋白—ABSE交联琼脂亲和层析柱纯化所得的蚕豆外源凝集素,其聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示:前一方法提取的蚕豆外源凝集紊呈一条深色带,一条浅色带,后一方法提取的蚕豆外源凝集素呈一条显色带。经SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其亚基分子量为23800。血凝反应表明蚕豆外源凝集素能显著地凝集兔的红细胞,对人(A型和O型)和猪的红细胞也有不同程度的凝集效应,并对人的外周血淋巴细胞具有促有丝分裂作用。用猪甲状腺球蛋白—ABSE交联琼酯作为亲和吸附剂与国外沿用的Sephadex G—75法相比较,具有成本低、操作步骤较简便的优点,此外,它所提取的蚕豆外源凝集素的生物活力也较鬲。     

对生玉米5-氨基酮戊酸脱水酶的简单快速纯化

以聚乙二醇６０００分级沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ,ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析和制备电泳初步纯化了对生玉米的５－氨基酮戊酸脱水酶,它在ｐＨ８．５时比活为３１Ｕ／ｍｇ蛋白,酶纯化了１１２倍,得率为１２％,其亚基分子量为４１ＫＤ,它可以用于酶促合成胆色素原,也可用于联合法测定胆色素原脱氨酶的酶活     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

低热固相法合成稀土三元混配配合物

首次在室温条件下通过固相法合成了了铈水杨酸8-羟基喹啉三元配合物Ce(Hsal)2(hq)(hq-=C9H6NO^-；Hsal^-=C7H5COO^-)．产物经元素分析、红外光谱、X-射线粉末衍射、热重-差热分析等手段确定了配合物的组成、结构以及成键特征．X-射线粉末衍射结果表明：8-羟基喹啉的加入使反应迅速完成，同时分析了可能的固相反应机理．抑菌实验表明该类配合物对常见的细菌和真菌有比较好的杀灭效果．     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.