慢性丙型肝炎患者HCV基因分型研究

我国是丙型肝炎的高发地区。自然人群中丙型肝炎病毒（HCV）感染率为0.7%~3.1%。作者对兰州市部分人群调查健康人群HCV感染率为4.4%。HCV感染虽不如HBV感染常见，但是HCV感染更容易引起慢性化，并在肝硬化和肝癌的发生发展中起作用。HCV基因型的地理分布差异较大。目前人们对不同基因型感染致病机理和临床意义的研究还较少，为不断积累我国HCV基因分型地区性分布资料，了解本地区HCV基因型的分布特点，我们对慢性丙型肝炎患者血清进行了HCV基因分型研究。1 材料与方法1.1 研究对象1996年6月—1999年12月我院传染科住院和门诊的慢…     

HCV基因分型在丙肝诊断和治疗中的应用

目的 建立ＨＣＶ基因分型方法，研究ＨＣＶ基因型与肝病程度的关系，探讨ＨＣＶ基因型与ＩＦＮ－ａ２ｂ抗病毒疗效的关系。方法 ＨＣＶ基因组ＮＳ５区ＰＣＲ扩增产物酶切分型。结果 ７３例ＨＣＶ感染者中有ＨＣＶⅡ型４５例，ＨＣＶⅢ型２８例。Ⅱ型ＨＣＶ感性肝炎３１例，肝硬化１４例；Ⅲ型ＨＣＶ感染者中有慢性肝炎２６例，肝硬化２例。Ⅱ型ＨＣＶ感染者的肝硬化发生率显著高于Ⅲ型ＨＣＶ感染者（Ｐ〈０．０５）。所有病人均应     

慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与疾病严重程度的相关性研究

目的探讨慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与病情严重程度的相关性。方法对105例慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA阳性的标本,采用PCR-反向点杂交法测定HBV基因分型,同时检测患者的肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、谷氨酰转肽酶(GGT)。结果 105例HBV-DNA阳性的标本中B型、C型、非B非C型各为45例、45例和15例,分别占42.9%、42.9%和14.2%。各型在病情和肝功能指标ALT、AST、TBil、GGT的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论慢性乙型肝炎患者HBV基因分型与病情严重程度没有相关性。     

二硫键寡核苷酸Microarray用于丙型肝炎病毒检测及HCV1b分型的研究

利用二硫键法制作寡核苷酸DNA Microarray,并将该技术应用到HCV检测中,建立了一种快速、灵敏、安全的寡核苷酸DNA Microarray丙肝病毒检测体系。该体系还可同时对占中国丙肝病毒75％左右的HCV1b亚型进行分型。另外,在丙肝病毒基因组RNA反转录的过程中采用随机引物,从而为进一步的多种肝炎病毒的寡核苷酸DNA Microarray混合检测奠定了基础。     

戊型肝炎病毒基因分型的研究进展

戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)是一种能引起急性、自限性病毒性肝炎的RNA病毒.主要经粪-口、血液等途径传播,常引起暴发性流行,或呈散发性流行.目前,HEV基因型分型不明确,给戊型肝炎的诊断、预防、流行病学调查及交流造成了一定困难.文章综述了戊型肝炎病毒基因分型的研究进展,目的是为HEV的研究奠定基础.     

HCV非结构基因NS5分子生物学研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因5(NSS)区是RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)及一种磷蛋白的编码区,与HCV的复制、致病及抗药性关系密切。就HCV NS5区有关的分子生物学研究进展进行了综述。     

不同因素HCV结构区基因重组诱发小鼠产生抗体的影响

目的：寻求ＨＣＶ基因免疫的最佳动物实验方法,探讨不同处理因素对基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１诱发小鼠产生抗体的影响。方法：用分子生物学技术构建丙型肝炎病毒基因重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１,采用不同免疫次数、途径、剂量和不同处理方法免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠。结果：重组体ｐＣＤ－ＨＣＶ１经肌肉１、２、３和４次免疫小鼠后（１００μｇ／只,ｎ＝１２）,抗体水平分别为０．１８３±０．００６、０．４２８±０．０５、０．７０     

Apo E基因multi-ARMS与PCR-RFLP分型法的比较研究

目的：以聚合酶链反应——限制性酶切片段长度多态性（PCR-RFLP）方法作为参照，建立一种ApoE基因分型方法。方法：以基因组DNA为模板，用PCR-RFLP法和等位基因特异性复合PCR方法（Multiplex Amplification Refractory Mutation System,multi-ARMS）检测了75例个体的ApeE基因型。结果：共检测出5种常见的ApoE基因型：ε2/2,ε3/3,ε2/3,ε3/4,ε2/4。两种方法所得的结果完全一致。结论：说明multi-ARMS方法快速简便、准确可靠，具有失言应用价值。     

HCV感染的动物模型研究进展

丙型肝炎（HC）是由丙型肝炎病毒（HCV：一种正链RNA病毒[1]）引起的一种传染性疾病，该病毒的流行呈世界性分布。HC曾一度归入NANBH中，到1989年Choo[1]等，从实验感染的黑猩猩血液中成功地分离出丙肝病原体并成功克隆出其全部核苷酸，才确证了HCV为NANBH的主要病原体的证据，同年在日本召开的国际病毒性肝炎会议，正式将病毒性肝炎分为甲、乙、丙、丁、戊五型；并将相应的病毒命名为HAV、HBV、HCB、HDV、HEV。近年来的研究证实病毒性肝炎还存在另外两型即已型肝炎（HF）和唐型肝炎（HG）。HC病原体分离出来后，对HC的…     

ARMS实时PCR基因分型特异性的研究

以原癌基因K-ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT,突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型,采用SYBR GreenⅠ为实时PCR指示剂,进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究.结果表明在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引入故意错配碱基,将ARMS引物浓度稀释10倍,并对传统三步PCR循环进行改良,即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异,在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤,可消除引物二聚体的影响,使ARMS引物的特异性增强,得到清晰的基因分型结果.实验表明这种基于SYBR GreenⅠ的ARMS实时PCR基因分型方法,无需合成探针,实验设计简单,是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法,可推广用于其他基因的分型,并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一.     

HCV多表位抗原基因与β—半乳糖苷酸基因融合表达,产物纯化及酶活性分析

设计一个２７０ｂｐ的丙型肝炎病毒复合多表位抗原基因,与β－半乳糖苷酶基因融合后,在高浓度肉汤培养其中,于转接１％量后３．２５ｈ,     

HCV感染与多种自身抗体高检出率的关系

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染后体内出现的自身抗体的病理意义及其引起的自身免疫的发生机制。方法：对１６１例ＨＣＶ感染者进行了八种自身抗体（抗核抗体、类风湿因子、抗甲状腺球蛋白抗体、抗甲状腺微粒体抗体、抗双链ＤＮＡ抗体、抗ＲＮＰ抗体、抗Ｓｍ抗体、抗精子抗体）的检测。结果：有５２例检出６９项次自身抗体,自身抗体检出率为３２．３％,显著高于健康人对照组（Ｐ＜０．００５）（未计抗精子抗体）。结论：ＨＣＶ感染可能是诱发自身免疫反应的一个重要因素     

呼伦贝尔市啮齿动物携带汉坦病毒的基因分型研究

为了研究内蒙古自治区呼伦贝尔市啮齿动物中汉坦病毒(HV)的型别及携带病毒情况,采用间接免疫荧光法(IFA)检测鼠肺中HV抗原,用RT-PCR法扩增阳性标本中HV的S(620~999nt)片段,使用clustalX(1.83)以及Phylip3.63构建系统发生树进行分型研究。结果表明,在呼伦贝尔市HFRS疫点共捕获啮齿动物185只,在7份鼠肺样品中检测到HV抗原,其中6只为黑线姬鼠,1只为大林姬鼠,病毒携带率为3.78%。扩增到其中6份HV抗原阳性样品中S片段(620~999nt),分析获得的序列表明与现有的HTNV有最高的同源性,均为HTNV。其中NAa90、NAa118、NAa121和NAp137这4株病毒与分离自黑龙江黑线姬鼠的Bao14株分在同一分支,与病毒的亲缘关系最近,而NAa78、NAa100这2株病毒构成另一分支,与A9株的同源性为94.5%~95.5%,用部分M(2001~2301nt)片断的核苷酸序列构建的系统进化树与S片段的结果一致。结论:呼伦贝尔市的黑线姬鼠与大林姬鼠携带不同亚型的HT-NV,表现出HTNV在同一地区的遗传多样性。     

HCV不同基因型对慢性丙型肝炎抗病毒治疗疗效的影响

目的探讨干扰素联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎患者临床疗效的相关影响因素.方法对110例慢性丙型肝炎患者进行PEG-IFNα-2a 180μg/周联合RBV 800~1200 mg/d的标准治疗,并完成治疗后24周随访,同时分析HCV基因型、HCV-RNA定量对持续病毒学应答(SVR)的影响.应用罗氏试剂检测丙肝病毒定量,应用反转录-套式聚合酶链反应(PT-PCR)法检测HCV基因型.结果在110例进行标准联合治疗、并完成治疗后24周随访的慢性丙型肝炎患者中,68例患者获得SVR.其中,HCV基因1b型感染者SVR率为51.4%(37/72),HCV基因N-1b型感染者SVR率为81.5%(31/38);基线HCV-RNA水平1.0×10~5IU/m L的患者SVR率为71.2%(42/59),基线HCV-RNA水平≥1.0×10~5IU/m L的患者SVR率为50.9%(26/51).结论非1b基因型SVR率高于1b基因型;基线低病毒RNA水平(血清HCV-RNA水平1.0×10~5IU/m L)SVR率高于基线高病毒RNA水平(血清HCV-RNA水平≥1.0×10~5IU/m L).     

ARMS实时PCR基因分型特异性的研究

以原癌基因K—ras基因12位密码子的4种基因型(野生型为GGT，突变型为AGT、TGT、CGT)质粒DNA为研究模型．采用SYBR Green I为实时PCR指示剂，进行ARMS实时PCR基因分型特异性的研究．结果表明：在和模板匹配的ARMS引物3′端附近引人故意错配碱基．将ARMS引物浓度稀释10倍，并对传统三步PCR循环进行改良．即根据目的产物和引物二聚体的熔点差异．在传统延伸步骤之后增加一步恒温80℃检测荧光步骤。可消除引物二聚体的影响．使ARMS引物的特异性增强．得到清晰的基因分型结果．实验表明这种基于SYBR Green I的ARMS实时PCR基因分型方法，无需合成探针，实验设计简单．是一种快速、简便、经济、特异性好的基因分型方法，可推广用于其他基因的分型。并可望成为应用于临床的基因诊断技术之一．     

丙型肝炎病毒E2基因在转基因番茄植株中的表达

以T-E1E2为模板扩增得到丙型肝炎病毒包膜蛋白基因E2,构建该基因的植物表达载体p35s-E2．通过农杆菌介导的叶盘法转化番茄子叶．转基因番茄植株叶片总DNA的PCR、Southern blot检测结果表明,E2基因已整合进了转基因番茄植株基因组中;RT-PCR,Western blot分析证实E2基因在转基因番茄植株叶片中表达．     

丙型肝炎病毒NS5A基因的克隆以及在原核和昆虫细胞中表达的研究

克隆了丙型肝炎病毒的NS5A基因，并在细菌和昆虫两种不同的系统中成功地进行了该基因的表达。利用PCR方法获得了NS5A完整的编码区并克隆到原核表达载体pGEX—KG上，在大肠杆菌中诱导表达了78kDa的NS5A与GST的融合蛋白。同时发现，融合蛋白被部分切割为50kDa的NS5A和28kDa的GST。在原核细胞中表达的78kDa和50kDa两种蛋白均具有较高的免疫原性，通过免疫家兔获得了高特异性的兔抗血清。另外，利用两种昆虫表达系统，即AcMN—PV和HaSNPV的Bac-to-Bac系统对NS5A进行了表达，表达产物为58kDa。     

丙型肝炎病毒感染与口腔扁平苔藓相关性的Meta分析

目的 对丙型肝炎病毒感染与口腔扁平苔藓之间的关系进行系统评价.方法 计算机检索Cochrane图书馆2007年第3期MEDLINE、Pubmed、Highwire、CBM、CNKI,检索时间从1992年～2007年.纳入所有研究丙型肝炎病毒与口腔扁平苔藓相关性的配对与非配对的病例对照研究.由2名评价者共同评价纳入研究质量.采用RevMan 4.2软件对数据进行Meta分析,估计其OR值和95%CI.结果 共纳入11个研究,包括口腔扁平苔藓患者754例,正常对照1973例.其中以正常人为对照研究的6例,以除扁平苔藓以外的口腔粘膜病为对照的4例,以两者为对照研究的1例,按照对照来源进行亚组分析,结果表明口腔扁平苔藓组丙型肝炎病毒感染率明显高出对照组,且结果有显著差异[OR合并=5.70(95%CI 3.64,8.94),OR合并=5.23(95%CI 3.78,8.09)].结论 研究结果显示,丙型肝炎病毒感染与口腔扁平苔藓有关,口腔扁平苔藓患者有更高的丙型肝炎病毒感染率.但由于纳入研究存在选择性偏倚、混杂性偏倚以及诊断性偏倚的中、高度可能性,可能影响了研究结果.     

丙型肝炎病毒感染与口腔扁平苔藓相关性的Meta分析

目的 对丙型肝炎病毒感染与口腔扁平苔藓之间的关系进行系统评价。方法计算机检索Cochrane图书馆2007年第3期MEDLINE、Pubmed、Highwire、CBM、CNKI,检索时间从1992年-2007年。纳入所有研究丙型肝炎病毒与口腔扁平苔藓相关性的配对与非配对的病例对照研究。由2名评价者共同评价纳入研究质量。采用RevMan4．2软件对数据进行Meta分析,估计其OR值和95％CI。结果共纳入11个研究,包括口腔扁平苔藓患者754例,正常对照1973例。其中以正常人为对照研究的6例。以除扁平苔藓以外的口腔粘膜病为对照的4例,以两者为对照研究的1例,按照对照来源进行亚组分析,结果表明口腔扁平苔藓组丙型肝炎病毒感染率明显高出对照组,且结果有显著差异[OR合并=5．70（95％CI3．64,8．94）,OR合并=5．23（95％CI3．78,8．09）]。结论研究结果显示,丙型肝炎病毒感染与口腔扁平苔藓有关,口腔扁平苔藓患者有更高的丙型肝炎病毒感染率。但由于纳入研究存在选择性偏倚、混杂性偏倚以及诊断性偏倚的中、高度可能性,可能影响了研究结果。