转AlNHX1基因大豆后代遗传稳定性及耐盐性分析

为了获得耐盐性有所提高的转AlNHX1基因大豆后代材料,以已获得的转AlNHX1基因的6个株系中的3个株系后代为研究对象,通过分别对这3个株系转基因大豆各后代进行PCR分子检测并结合耐盐性鉴定,以分析外源基因在转基因大豆中遗传稳定性和耐盐性.结果表明:AlNHX1基因在转基因植株的后代中遗传;选取3个株系中部分阳性植株做耐盐性检测,结果表明:转基因大豆耐盐性状均好于野生型大豆.在150mmol/L NaCl胁迫下,转基因大豆叶片中维持了相对较高的K+/Na+比值,相对含水量较野生型提高了9%,而渗透势降低了39%,表明转基因大豆具有较好的吸水和保水能力;在盐胁迫下,超氧化物歧化酶(SOD)与过氧化物酶(POD)活性较野生型大豆分别提高了45%与69%.综上,通过耐盐筛选获得的转AlNHX1基因大豆具有较强的耐盐性.     

作物耐盐性的分子生物学研究进展

本文从作物耐离子胁迫、耐渗透胁迫和细胞编程性死亡调节三个方面概述了作物耐盐的生理生化机制;介绍了目前利用分子生物学技术克隆与植物耐盐相关的基因,并根据作物的耐盐机理,对这些与耐盐相关的基因进行了分类;总结分析了转耐盐基因植物的研究现状及其转基因植物的耐盐生状况,并提出了利用转基因技术,改良植物耐盐性的方法和对策。     

植物耐盐性及耐盐相关基因的研究进展

植物耐盐性的研究对作物抗逆育种研究有重要的指导意义.从整体水平上阐述了植物感受盐渍胁迫及其应答的基本分子机理,并系统介绍了近年来植物耐盐相关基因的研究进展.     

由TMV54＊10^3蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的 …

通过土壤农杆菌的介导，将烟草花叶病毒的５４＊１０＾３蛋白ｃＤＮＡ转入番茄植物中，得到了转基因植株，这些植株抗卡那霉素，具有胭脂碱合成酶的活性。     

盐胁迫下水稻,番茄蛋白变化的电泳分析

水稻品种９０１７经盐胁迫后,分子量约为４５ＫＤ蛋白质减少,约为３８ＫＤ蛋白质增加,同时出现了分子量与调渗蛋白相类似的２６ＫＤ蛋白质,随着盐胁迫浓度的提高及胁迫时间的加长,上述蛋白质谱带变化更为明显。番茄品种白果丰经盐胁迫后其真叶中分子量约为１４ＫＤ和１７ＫＤ蛋白质减少,同时诱导出一条分子量约为２２ＫＤ的新带。     

乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄的遗传转化体系的建立

以丽春番茄无菌苗的子叶为外植体，以农杆菌菌株EHA105(包含质粒pBin438S)为载体，将乙肝表面抗原小蛋白S基因导入番茄组织中，基本培养基采用MS 6—BA1．0mg／L IAA0．2mg／L，在共培养时加入乙酰香酮100μmol／L作为诱导剂，经过组织培养得到转基因植株，对转化植株基因组进行的分子学PCR检测表明，外源基因有可能已整合到番茄基因组中，该转基因遗传体系的建立为利用转基因植物生产乙肝口服疫苗奠定了基础。     

转番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因烟草植株的培育及其抗虫特性分析

将分离的番茄蛋白酶抑制剂Ⅱ基因cDNA序列tin2和含有一个109bp内含子的基因组DNA序列tin2i,分别构建成植物表达载体pBCT2和pBT2.然后通过农杆菌介导转化烟草叶片外植体,获得了两类转基因烟草植株.分子生物学检测和胰蛋白酶抑制剂活性分析结果表明,tin2序列和tin2i序列都能够在转基因烟草中正确表达.抗虫活性检测结果显示,转tin2i序列的烟草植株的抗虫活性高于转tin2序列的烟草植株,推测这可能与tin2i序列中内含子的存在有关.     

木榄细胞膜Na~+/H~+逆向运输蛋白BgSOS1功能的初步验证

根据木榄BgSOS1的序列信息从木榄中克隆到了全长的BgSOS1基因,该片段包含1个3 462 bp的开放阅读框,可编码1 153个氨基酸的多肽.生物信息学的分析结果表明:该氨基酸序列所编码的蛋白与拟南芥、番茄、水稻、小麦、盐芥和杨树的SOS1蛋白高度同源,同源性分别为63.86%,66.61%,62.18%,60.19%,63.97%和75.97%;BgSOS1蛋白的N端含有12个跨膜的结构域,C端为1个较长的胞内结构域.尽管单个BgSOS1的表达并不能提高转基因酵母的抗盐性,但SOS1,SOS2和SOS3共表达的酵母,其抗盐性明显提高,这表明SOS2/SOS3蛋白激酶复合体可能通过调控BgSOS1的Na+/H+交换功能来提高木榄的抗盐机理.     

转BpmiR156基因白桦株系的耐盐性分析

【目的】探究植物年龄响应因子miR156的耐盐功能。【方法】以BpmiR156过表达白桦株系和非转基因对照株系为材料,通过PCR及qPCR分析各转基因株系中外源BpmiR156的稳定性及表达情况;同时对转基因及对照株系进行NaCl胁迫处理,调查胁迫后盐害指数、生理指标及生长速度。【结果】各转基因株系中外源BpmiR156已整合到白桦基因组中,且表达量显著高于非转基因对照株系;NaCl胁迫后,转基因株系的H₂O₂、丙二醛(MDA)含量及盐害指数高于对照株系,生长速度变慢。【结论】BpmiR156基因在白桦中稳定表达,BpmiR156基因过表达白桦株系与对照株系相比,在盐胁迫后盐害指数增加,生长速度变慢,膜系统损伤更严重,说明转入miR156基因在一定程度上降低了白桦的耐盐性。     

番茄ACC合成酶基因的反义RNA—核酶嵌合基因植物表达载体的构建及对番茄的转

将克隆的番茄ACC合成酶基因的反义RNA－核酶联合的DNA序列用Hind Ⅲt KpnI切割后重组于植物表达载体pGA643中,用三亲融全导入农杆菌LBA4404中,采用叶盘法转化茄子叶,诱导出再生小植株,获得了卡那霉素的抗性植株。提取植物总DNA,用pGA643作探针,通过斑点杂交,已筛选出整合有外源基因的工程植株。为进一步研究该嵌合基因对ACC合成酶基因表达的影响及获得商品化的转基因番茄奠定了基础。     

番茄基因转化研究初报

番茄子叶及下胚轴切段能被含ｎｐｔ－Ⅱ基因和ｍｔｌＤ基因的根癌农杆菌感染，目前已获Ｋａｎ￣ｒ的愈伤组织     

BYDV CP基因转化小麦原生质体及转基因植株再生

用原生质体融合技术与ＰＥＧ介导的直接转基因方法相结合，使高频率分裂的小麦济南１７７悬浮细胞系原生质体与具有分化能力的小麦济南１７７胚性意伤组织原生质体融合，形成具有分裂和分化能力的融合细胞；同时，利用ＰＥＧ对原生质体的直接转基因作用，将带有抗病毒基因（ＢＹＤＶＣＹｇｅｎｅ）的质粒Ｐｐｐ１５与带有抗性选择标记基因的质粒严ＰＢｌＡｃｔＳＮ导入融合细胞中．经抗性筛选获得抗潮霉素（Ｈｍ）的阳性克隆并再生植株．对再生植株作ＰＣＲ检测表明，ＣＰ基因已整合到转化植株的基因组中并稳定表达．     

组成型表达线粒体小分子热激蛋白提高番茄抗冷性

线粒体小分子热激蛋白不但是线粒体的主要热诱导产物,而且也被低温诱导,线粒体小分子热激蛋白可以提高植物的耐热性,但目前还不清楚它是否与植物的耐冷性有关．本实验利用基因工程方法,将番茄线粒体小分子热激蛋白基因（LeHsp23．8）导入番茄,Northern—blotting及Western—blotting分析结果表明,在35sCaMV启动子的驱动下,导入的线粒体小分子热激蛋白基因呈现组成型表达．转基因番茄呈现耐低温性更强的表型,说明组成型表达线粒体小分子热激蛋白基因能提高番茄的抗冷性．     

抗番茄青枯病内生拮抗细菌的筛选及室内防效测定

从健康番茄体内分离到了93株内生细菌。采用含菌平板抑菌圈测定法，筛选出了3株对番茄青枯菌具有较强拮抗力的细菌菌株ZB—1、ZB-2和ZB-6。温室盆栽防病试验结果表明，内生细菌菌株ZB-6对植株进行预处理后，番茄青枯病防病效果可达63—65％，说明该菌株对番茄青枯病发生具有较好预防效果。     

微弹射击将大麦黄矮病毒外壳蛋白基因转入小麦获可育植株

以小麦品种济南１７７、３８４、４７１的幼胚和济南１７７的胚性愈伤组织为材料，质粒为ｐＰＰＩ２［含大麦黄矮病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因和ＧＵＳ（β－葡萄糖苷酸酶）基因］；ｐＰＰＩ５（含ＣＰ基因）＋ｐＥｍｕＧＮ（含ＧＵＳ基因），用高速基因枪轰击钨粉质粒进入幼胚和胚性愈伤组织细胞．ＧＵＳ基因的瞬间表达平均频率幼胚约为４２％，愈伤组织为１８．５％．转化处理后用ＰＣＲ扩增技术检测植株中ＣＰ基因是否存在并稳定遗传．检测结果表明，来源于幼胚的Ｔ０代转化频率为２～９％（１９９３～１９９４年），并获得Ｔ１、Ｔ２和Ｔ３代稳定表达的转化植株．用愈伤组织转化，其转化频率３月龄者为０．４％；２年龄者为零．潮霉素（Ｈｍ）用于对转化幼胚和愈伤组织的筛选，低浓度时不能抑制非转化细胞的生长，高浓度则使细胞受伤害，不能再生正常健壮的植株     

昌黎沿海野生大豆分布及其耐盐性

对河北省昌黎县沿海地区生长在河沿岸、低洼地、苇塘、沟边、海滩等潮湿环境下的野生大豆进行了实地考察。该地区野生大豆茎纤细、缠绕攀援生长 ;其种子具有硬实现象 ;在株型、叶片、生长势、抗逆性等方面差异较大。经种子耐盐萌发试验和盐池鉴定发现 :昌黎沿海地区野生大豆芽期耐盐性达 0 .9% ,植株在盐的质量分数为 0 .0 0 5～ 0 .0 0 6的土壤中可以生长。     

杂鳞库蚊复组28S rRNA基因5′端序列研究

对我国三带喙库蚊、环带库蚊和伪杂鳞库蚊共计79只蚊虫的28SrRNA基因5′端序列进行测定,获得的序列长度为301bp,3蚊种的该段序列相同。为设计杂鳞库蚊复组近缘种的PCR鉴别方法打下基础。     

葡萄籽提取物对人二倍体成纤维细胞寿命及c - fos基因表达的影响

研究葡萄籽提取物对人二倍体成纤维细胞寿命及原癌基因c—fos转录的影响,探讨葡萄籽抗衰老的细胞和分子基础．采用体外培养细胞、Northern杂交RNA电泳及细胞染色体常规检查的方法进行检测．葡萄籽提取物在体积分数为0．030％时,能有限地延长2BS细胞的寿命;葡萄籽提取物能诱导衰老2BS细胞c—fos基因的低水平转录．葡萄籽具有一定的延缓细胞衰老的作用,其对衰老2BS细胞c—fos基因转录的诱导作用,可能是延缓细胞衰老的分子机理之一．     

细胞分裂素在mRNA和蛋白质水平上同时促进rbcS基因的表达

将紫萍半叶状体首先在不含细胞分裂素的培养液上于黑暗条件下培养10d，然后转移到长日照条件下、分别在含有或不含6—苄基嘌呤的新鲜培养液上培养．对半叶状体在培养过程中干重、叶绿素和可溶性蛋白含量方面的变化进行了分析，并且用Northern　blot的方法拉测了rbcS mRNA水平的变化，用SDS—PAGE分离和考马氏亮蓝染色的方法检测了其编码蛋白(1，5—二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶的小亚基，SSU)水平的变化．结果表明，6—苄基嘌吟显著地促进了半叶状体干重、叶绿素和可溶性蛋白含量、rbcS基因mRNA及其编码蛋白SSU水平的增加．由于在没有外源细胞分裂素的情况下，rbcS基因mRNA水平的增加并不能引起SSU水平的增加，所以认为细胞分裂素对该基因表达的促进作用同时发生在mRNA和蛋白质水平上．     

真核生物的热击反应及转录调控的研究现状

真核生物受热击及其他应激作用后能诱导产生ＨＳＰ。ＨＳＰ在生物体内起着重要的生理功能。研究热击反应有助于搞清植物基因表达调控的机理，这也是科学家们近几年来研究的热点。随着植物基因工程技术的完善和发展，这一研究进展很快。ＨＳＥ、ＨＳＦ和ＨＳＰ在热击基因转录和调控过程中起着非常重要的作用。