竹节参总皂苷对人肺腺癌A549细胞凋亡和Caspase-3活性的影响

研究竹节参总皂苷对人肺腺癌A549细胞凋亡和Caspase-3活性的影响,选取0.05、0.1、0.2、0.5、1 mg/m L浓度的竹节参总皂苷作用于体外培养的人肺腺癌A549细胞;并设空白对照组,分别作用24、48、72 h后,应用MTT法检测人肺腺癌A549细胞增殖情况。流式细胞术检测人肺腺癌A549细胞凋亡情况,比色法检测竹节参总皂苷作用于人肺腺癌A549细胞48h后Caspase-3活性。不同浓度的竹节参总皂苷对人肺腺癌A549细胞的增殖有显著的抑制作用(P0.05);并呈浓度和时间依赖性。流式细胞术检测结果为竹节参总皂苷可以诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,各浓度组的细胞凋亡率明显高于空白对照组(P0.05);并呈浓度依赖性。说明竹节参总皂苷可抑制人肺腺癌A549细胞增殖和诱导其凋亡。     

绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI诱导肺腺癌A549细胞凋亡

研究了绿豆胰蛋白酶抑制剂BBI对人肺腺癌A549细胞增殖抑制作用和对肺腺癌A549细胞凋亡的影响.结果显示:绿豆BBI对人肺腺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用,绿豆BBI可以促使人肺腺癌A549细胞出现明显的染色质浓缩和凋亡小体,诱导人肺腺癌A549细胞的凋亡.说明绿豆BBI能抑制人肺腺癌A549细胞增殖、诱导人肺腺癌A549细胞凋亡,为绿豆BBI抗肿瘤效应提供了依据.     

牡蛎低分子活性物质对人肺腺癌A549细胞的生物学效应

以新鲜牡蛎为材料，经特酸抽提和分子筛凝胶层析，获得牡蛎低分子活性物质，SDS－PAGE凝胶电泳分析鉴定为该组分为主要由8种蛋白组成，应用该物质处理人肺腺癌A549细胞，实验结果显示，经0．1mg/mL牡蛎低分子活性物质处理的人肺腺癌A549细胞，细胞生长抑制率达62．2％，细胞分裂指数下降28．95％。光镜观察显示经牡蛎低分子活性物质 处理的细胞形态发生明显改变。结果表明，牡蛎低分子活性物质能有效的抑制肺癌细胞的增殖。     

维康醇诱导A549人肺癌细胞凋亡作用研究

为探讨维康醇诱导人肺癌A549细胞凋亡的机制,本研究采用噻唑蓝(MTT)法检测维康醇对人肺癌A549细胞细胞增殖的影响,用Hoechst 33258染色法观察药物处理后细胞形态的变化,用吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光染色法观察细胞凋亡形态,Annexin V-FITC/PI染色检测A549细胞凋亡率,Caspase-9/3试剂盒检测半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的活性。结果表明:维康醇能显著抑制A549细胞的恶性增殖,并呈剂量依赖性(P<0.0或P<0.01),细胞致死率也不断上升(P<0.05或P<0.01),经维康醇处理后的A549细胞出现明显的形态改变,细胞表现出染色体边集、核浓缩、核碎裂等典型凋亡形态学特征。细胞凋亡率随维康醇浓度的增加而升高。同时,Caspase-9、Caspase-3活性也在逐渐升高(P<0.05或P<0.01)。由此可知,维康醇能够通过抑制A549细胞的恶性增殖,最终诱导细胞的凋亡,其机制可能是通过活化Caspase-9并进一步激活Caspase-3,从而诱导A549细胞凋亡。推测维康醇诱导A549细胞凋亡是通过线粒体调控的内源通路所介导,这个过程依赖于Caspase-3、Caspase-9的激活。     

水提三七达玛烷20(S)-原人参二醇型皂苷诱导A549细胞凋亡机制的研究

三七总甙对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但从三七茎叶、花梗、果梗提取到的达玛烷20(S)-原人参二醇型皂苷(20(S)-PPDS)对肺癌A549细胞的作用及机理尚不清楚.本研究采用噻唑蓝(MTT), Hoechst33258 染色,免疫组化以及Western blot法研究20(S)-PPDS对肺癌A549细胞的作用.结果显示20(S)-PPDS对A549细胞的具有抑制作用,125,250,500 μg·mL-1的20(S)-PPDS与A549细胞作用72 h后,细胞抑制率依次为28.67%,41.97%,73.02%;20(S)-PPDS对A549细胞作用24,72 h的IC50分别为398.94,315.96 μg·mL-1;20(S)-PPDS通过活化Caspase-3, 上调Bax蛋白表达,下调Pro-Caspase-3、Bcl-2蛋白表达诱导A549细胞凋亡.这些研究结果表明20(S)-PPDS对A549细胞具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.     

水提三七达玛烷20(S)-原人参二醇型皂苷诱导A549细胞凋亡机制的研究

 三七总甙对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但从三七茎叶、花梗、果梗提取到的达玛烷20(S)-原人参二醇型皂苷（20(S)-PPDS）对肺癌A549细胞的作用及机理尚不清楚.本研究采用噻唑蓝（MTT）, Hoechst33258 染色,免疫组化以及Western blot法研究20(S)-PPDS对肺癌A549细胞的作用.结果显示20(S)-PPDS对A549细胞的具有抑制作用,125,250,500μg·mL^-1的20(S)-PPDS与A549细胞作用72h后,细胞抑制率依次为28.67%,41.97%,73.02%;20(S)-PPDS对A549细胞作用24,72h的IC50分别为398.94,315.96μg·mL^-1;20(S)-PPDS通过活化Caspase-3, 上调Bax蛋白表达,下调Pro-Caspase-3、Bcl-2蛋白表达诱导A549细胞凋亡.这些研究结果表明20(S)-PPDS对A549细胞具有抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.     

石榴鞣花酸提取物对人肺癌细胞A549凋亡的诱导

为了探讨石榴鞣花酸提取物(EAEFP)诱导人肺癌细胞凋亡的作用及其可能的作用途径,以A549肺癌细胞为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法评估EAEFP对A549肺癌细胞的抑制效果。通过4′,6-二脒基-2苯基吲哚(DAPI)染色法观察EAEFP对A549肺癌细胞形态的作用。利用流式细胞仪测定EAEFP对A549肺癌细胞分裂周期和细胞凋亡的影响。研究结果表明:石榴鞣花酸提取物能显著抑制A549肺癌细胞的生长。随着石榴鞣花酸提取物质量浓度的增加,A549肺癌细胞形态发生明显变化,细胞周期被阻滞在G1期,细胞凋亡率显著增加。石榴鞣花酸提取物能抑制A549肺癌细胞增殖,通过阻滞细胞周期从而诱导细胞凋亡。     

CeO2纳米颗粒对A549细胞的保护作用

探讨了CeO2纳米颗粒对体外培养的人肺腺癌细胞A549的生物效应.使用扫描电子显微镜(SEM)对CeO2纳米颗粒进行了表征,采用噻唑蓝比色法测定了不同质量浓度CeO2纳米颗粒悬液对A549细胞活性的影响,对其抗氧化能力进行了检测,并且测定了30 nm CeO2作用24 h后细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(G...     

肺腺癌A549细胞膜上磷脂翻转酶的存在与顺铂耐药性

为证实肺腺癌细胞膜上是否存在磷脂翻转酶,将含有NBD－PE荧光探剂的脂质体与A549和A549／DDP细胞融合,根据外膜NBD－PE的荧光强度变化来检测细胞膜上磷脂翻转酶的存在及其活性。当含有NBD－PE的A549和A549／DDP细胞在保温0,30,60和90 min时,测定外膜NBD－PE的结果表明,A549细胞的NBD－PE荧光强度在上述不同时间保温后分别为0％,1．4％,2．9％和7．8％;而A549／DDP细胞则相应为0％,10．5％,15．5％和18．3％,证实A549肺腺癌细胞上存在磷脂翻转酶。而且,具有抗药性的A549／DDP细胞膜上的磷脂酶的活力明显高于药物敏感的A549细胞。用多药耐药逆剂Verapamil(20μmol/L）在37℃处理A549／DDP细胞60min后测定其结果又表明,NBD－PE在膜外侧的增加较对照降低了25．0％,而用治疗肺腺癌的特异性抗癌药cisplatin(25 μmol/L)处理时,NBD－PE在膜外侧的增加降低了31．6％,且随cisplatin的浓度增加进一步降低达79．4％。这与肺腺癌细胞的耐药性可能相关。     

原人参二醇和三醇的制备

将三七总皂苷与碱混合,在非溶剂的条件下,加热150℃进行常压碱解,再经硅柱层析纯化得到20(S)-原人参二醇(产率10%,纯度>90%)和20(S)-原人参三醇(产率18%,纯度>90%).     

氧化石墨烯对人肺腺癌细胞的毒性产生的剂量效应

氧化石墨烯(GO)具有比表面积大、亲水性、溶液分散性好等独特的理化性质,而日趋广泛应用在生物医学。目前,在其低剂量下暴露细胞的生物安全性方面的报道很少,本实验选取GO,并对其理化性质表征。制备成浓度为0μg/m L、2μg/m L、4μg/m L、8μg/m L、16μg/m L、32μg/m L使其暴露24 h在体外培养的人肺腺癌细胞A549,检测胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT的活性,以及胞内的蛋白含量,荧光染色检测细胞产生的活性氧(ROS)的含量。MTT检测24 h、48 h、72 h细胞活性。结果表明,GO暴露24 h,8μg/m L对A549的活性具有最高促进作用。胞内SOD、CAT活性显著升高,蛋白含量增加,胞内ROS、MDA的含量降低。结论是GO对A549细胞活性具有双重性,低浓度下下调细胞内ROS,降低GO对A549的氧化损伤,从而提升细胞活性;高浓度下对细胞产生氧化损伤,抑制细胞活性。     

芒果苷对人肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用及其机制研究

利用相差显微镜观察细胞形态变化情况;用MTT法测定芒果苷对A549细胞增殖作用的影响以及Western-Blot法检测芒果苷对Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9蛋白分子表达水平的影响.结果显示,与对照组相比,芒果苷对人肺腺癌A549细胞的抑制率与浓度和时间均呈正相关性.在有效浓度为3μM,作用最佳时间为48h时,A549细胞的镜下形态和结构发生显著的变化;并且导致Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性以及它们的剪切小体数量增加.表明芒果苷对人肺腺癌A549细胞具有抑制增殖的作用,并且通过caspase依赖性途径诱导A549细胞凋亡.     

肺腺癌A549细胞膜上磷脂翻转酶的存在与顺铂耐药性

为证实肺腺癌细胞膜上是否存在磷脂翻转酶,将含有NBD-PE荧光探剂的脂质体与A549和A549/DDP细胞融合,根据外膜NBD-PE的荧光强度变化来检测细胞膜上磷脂翻转酶的存在及其活性.当含有NBD-PE的A549和A549/DDP细胞在保温0,30,60和90min时,测定外膜NBD-PE的结果表明,A549细胞的NBD-PE荧光强度在上述不同时间保温后分别为0%,1.4%,2.9%和7.8%;而A569/DDP细胞则相应为0%,10.5%,15.5%和18.3%,证实A549肺腺癌细胞膜上存在磷脂翻转酶.而且,具有抗药性的A549/DDP细胞膜上的磷脂翻转酶的活力明显高于药物敏感的A549细胞.用多药耐药逆转剂Verapamil(20μmol/L)在37℃处理A549/DDP细胞60min后测定其结果又表明,NBD-PE在膜外侧的增加较对照降低了25.0%.而用治疗肺腺癌的特异性抗癌药cisplatin(255μmol/L)处理时,NBD-PE在膜外侧的增加降低了31.6%,且随cisplatin的浓度增加进一步降低达79.4%.这与肺腺癌细胞的耐药性可能相关.     

A549／CDDP多药耐药细胞系的建立

以顺铂(CDDP)为诱导物,采用间歇逐步增加剂量法建立了人肺腺癌多药耐药细胞系A549/CDDP;MTT法测定A549/CDDP对顺铂、丝裂霉素C、5-氟尿嘧啶、长春新碱、表阿霉素及紫杉醇等的耐药指数.A549/CDDP细胞较亲本细胞略小,核质比增加,倍增时间没有明显变化;MTT法测定A549/CDDP的药物敏感性,对顺铂的耐药指数是20.29,对丝裂霉素C、5-氟尿嘧啶、长春新碱、表阿霉素及紫杉醇等药物有不同程度的耐药性,但对卡氮芥和羟基喜树碱无耐药性;A549/CDDP对顺铂的敏感性降低,其顺铂的含量较亲本细胞下降.     

20(S)-原人参二醇衍生物对HT1080细胞侵袭转移的影响

检测了所合成的20(S)-原人参二醇衍生物GY1和GY2的抗肿瘤活性. GY1对HT1080、SMMC7721、A549的增殖有显著的抑制作用,呈明显的剂量依赖关系,IC₅₀分别为：35.2±0.9mg/L,29.6±1.1mg/L,24.1±1.5mg/L;而GY2并没有表现出的明显的细胞毒作用,其IC₅₀ 大于100mg/L. 5mg/L GY1作用48h可显著降低HT1080细胞对基底膜成分的粘附和侵袭能力,并对细胞的运动能力有一定影响;而相同浓度的GY2虽然对细胞的粘附性和侵袭性有一定影响,但对细胞的运动性却无明显的影响.     

SLC44A5对肺腺癌细胞迁移影响

肺癌是发病率和死亡率最高的恶性肿瘤.SLC44A5是一种胆碱转运蛋白,其与肿瘤关系的相关报道较少.有报道显示其与肝癌的发生发展有关,然而其在肺癌中的作用尚未有相关报道.为探讨SLC44A5的影响,使用人肺腺癌细胞系H1299和H1792构建SLC44A5低表达细胞系,利用MTT法证明敲低SLC44A5会抑制细胞增殖.使用细胞划痕实验和Transwell细胞迁移实验证明敲低SLC44A5抑制细胞迁移.结果表明SLC44A5可能参与了肺癌的转移,具有成为肿瘤治疗分子靶点的潜力.     

A549／TaxR多药耐药细胞系的建立

采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合,通过210 d建立了人肺腺癌多药耐药细胞系A549/TaxR.MTT法测定A549/TaxR的药物敏感性,对紫杉醇的耐药指数是24.79,对丝裂霉素C、5-氟尿嘧啶、长春新碱、表阿霉素、足叶乙甙、顺铂及卡铂等药物有不同程度的耐药性,但对卡氮芥和吉西他滨无耐药性.本研究建立了稳定的人肺腺癌细胞系(A549/TaxR),可用于下游的实验研究.     

源于原人参二醇的ocotillol型C24差向异构体的形成机理探讨

C24差向异构ocotillol型人参皂苷的心肌保护作用及其药代动力学性质存在显著立体差异,有关其半合成的研究已有报道,但其形成机理研究报道较少.20(S/R)-原人参二醇经过氧酸氧化得到C24差向异构ocotillol型皂苷,结合烯烃双键的环氧化反应和亲核取代反应特点,推测其形成机理为:过氧酸从烯烃平面两侧氧化24(25)碳碳双键,生成C24差向异构24,25-环氧中间体,在酸性条件下,该环氧中间体氧原子接受一个质子,生成徉盐,20位羟基氧原子进攻24位碳原子,经分子内S_N2反应,生成C24差向异构体.     

原人参二醇、人参皂苷CK和原人参三醇对阿霉素诱导足细胞损伤的保护作用

为探讨原人参二醇(PPD)、人参皂苷CK和原人参三醇(PPT)对肾病综合征(NS)中足细胞损伤的保护作用,本研究采用阿霉素(ADR)诱导足细胞损伤。通过CCK8及细胞划痕、Transwell实验分析,结果表明三种人参皂苷可以改善ADR损伤后足细胞的增殖活力并抑制其迁移能力。Western blot及细胞免疫荧光实验结果表明PPD、人参皂苷CK和PPT均可以通过降低Desmin、NF-κB P65、p-NF-κB P65、p-IκBα及升高IκBα的表达水平缓解足细胞损伤,并且可以促进GR的表达及其核转位,其中PPD的作用效果较好。计算机分子对接结果显示PPD、人参皂苷CK和PPT与GR均具有一定的结合活性,但PPD与GR的结合活性最优。因此,PPD、人参皂苷CK和PPT均可以在一定程度上改善ADR诱导的足细胞损伤,其中PPD在保护足细胞损伤方面具有一定的优势。     

NaNO_3对人肺A549细胞和大鼠海马神经元的毒性研究

为了研究NaNO3对人肺A549细胞以及大鼠海马神经元细胞的毒性作用,用不同浓度NaNO3(10、30、100、300和1 000μmol/L)分别对大鼠原代培养海马神经元和A549细胞进行24h暴露处理,考察了不同处理组细胞中即早基因c-fos和c-jun以及凋亡基因p53,bax和bcl-2mRNA的表达变化情况。结果显示,NaNO3处理可诱导A549细胞c-fos和c-jun基因表达的增加,bax/bcl-2mRNA比值也呈上升趋势;同时,不同浓度NaNO3可明显上调大鼠海马神经元bax/bcl-2mRNA比值,而对p53mRNA表达无明显影响。由此推断,NaNO3可能会通过刺激即早基因和其下游凋亡调控基因的表达引起肺和脑的损伤效应。