肝片形吸虫成虫及虫卵的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜系统观察了肝片形吸虫的体表结构和虫卵.1.在口腔内壁上密市有细绒毛,其间还有很多小孔.2.肝片形吸虫的体棘在头锥部份排列整齐而有规则,共有60圈,每圈60～70个.在腹吸盘以后的体棘则规律不明显.3.本文将观察到的不同形态的体棘,按其发育过程分为初生期,早期,中期及后期体棘四类,它们的末端都呈锯齿状.体棘窝较浅.因此体棘较易脱落.4.在张开的生殖腔中,同时观察到了雌雄生殖系统的2个开口,并对伸出体外的阴茎进行了描述.5.肝片形吸虫卵的表面光滑,但在其外膜脱落后则有散在性的小凹陷;卵盖与卵壳连接处虽不很整齐,但并不呈锯齿状.约60%的虫卵后端也具有小结节.     

肝片吸虫和巨片吸虫染色体和同工酶的研究

本文研究了来自国内数省份的片形吸虫的染色体和同工酶,发现肝片吸虫的染色体为三倍体型,巨片吸虫的染色体为二倍体型。根据二者核型相近、酯酶同工酶一致以及生活史各期虫体形态相似,作者认为肝片吸虫是巨片吸虫的同源三倍体的种类。     

肝片形吸虫精子发生的染色体动态研究

采用常规细胞染色空气干燥标本制片技术制片及直接涂片,观察100个虫体的200张滴片,20个虫体的40张涂片,发现肝片形吸虫精子发生的染色体动态是:1.精原细胞,分为A型和B型。A型胞核内染色质细粒状,着色较深。B型胞核内染色质颗粒多沿核膜分布,着色较浅。在精原细胞增殖的有丝分裂中,其染色体中期相2n=20。2.初级精母细胞,核内染色质呈颗粒团,随后细胞进入第一次成熟分裂(减数分裂),其过程分为前期、中期、后期和末期,各期细胞染色体形状、大小相异。3.次级精母细胞,核内有大小不等的染色质颗粒团或染色痕迹。4.精细胞,染色体为单倍体(n=10)胞核由圆形迎渐为椭圆形、钉子形、V形、S形、弯梭形,最后由弯梭形的细胞分化产生精于。5.精子,头颈部螺旋状锥形,尾细长。     

常温下肝片形吸虫成虫的体外培养

肝片形吸虫成熟虫体175条在常温下置不同培养液中体外培养,其结果是:在常温下,肝片形吸虫在适宜培养液中可存活10—12天,平均11天;在3类,17种培养液中以1640血清混合液为最佳,199血清混合液次之,台氏液最差,其中又以10％血清1640液为好;不同室温对肝片形吸虫的影响:在20～23℃与11～17℃的室温下,虫体产卵数与产卵天数均无明显差异,但在11～17℃下,虫体的存活时间明显延长。     

山羊血浆环核苷酸在感染肝片吸虫前后的变化

用放射免疫方法测定山羊血浆ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ正常水平值以及感染肝片吸虫后的动态变化。结果表明：山羊血浆ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ的正常值分别为（０．８０±０．０３）,（０．８３±０．０３） ｐｍ ｏｌ·ｍ Ｌ－ １,（０．６９±０．０４）,感染１ 组和２ 组山羊在感染后第１～６ 周,血液中ｃＡＭＰ水平显著低于或低于对照组,以后两组水平相当。感染１ 组的ｃＧＭＰ水平在感染后５～９ 周期间低于对照组,而感染２ 组山羊的ｃＧＭＰ水平在感染后１～４ 周高于对照组。感染１ 组和２ 组山羊的ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ比值分别在感染后１～４ 周和１～６ 周呈现低于对照组的趋势,但差异不明显。因而,肝片吸虫感染可导致宿主的ｃＡＭＰ,ｃＧＭＰ和ｃＡＭＰ／ｃＧＭＰ紊乱。     

肝片形吸虫、布氏姜片吸虫和日本血吸虫毛蚴体表结构的比较观察

本文应用扫描电镜及相位差显微镜对下列三种吸虫毛蚴进行了比较观察。一、肝片形吸虫毛蚴:顶突呈厚壁圆环状,中央为顶腺开口,壁上有4个腺体的开口及6根短纤毛。纤毛上皮细胞共21个,排列顺序为6.9(6.3)、4.2;第2列由2个完整的亚列组成。在第1、2列上皮细胞间的细胞嵴上,有2个侧乳突和4个细胞间嵴小突。二、布氏姜片吸虫毛蚴:顶突由2个唇瓣样物构成,中央为顶腮开口,未见其它小孔及纤毛。纤毛上皮细胞数及排列顺序与肝片形吸虫的相似,但第2列只有一个半亚列组成。三、日本血吸虫毛蚴:顶突呈网格状,上有2个穿刺腺开口及4—6根短纤毛。纤毛上皮细胞共22个,排列顺序为6、9、4、3,第2列呈单行排列。在第1、2列细胞间,有2个侧小突和多个细胞间嵴小突。本文还对上述各种结构的功能进行了讨论。     

肝片吸虫抗原基因的克隆与筛选

提取肝片吸虫总RNA,经oligo(dT)-纤维素柱分离得到mRNA,反转录合成cDNA后,连接Eco RI人工合成接头,酶切后克隆到表达型质粒载体pGEX-1λT,转化大肠杆菌JM107菌株构建肝片吸虫cDNA文库(文库大小约为2.1×105)．用免疫印迹筛选出5个阳性克隆,分别命名为pFH2,pFH4,pFH16,pFH21和pFH29．其中pFH21印迹信号最强．Eco RI酶切pFH21显示插入片段大小约为1.0kb.重组子pFH21经SDS-PAGE电泳显示表达有一个重组蛋白,分子量约为48kD.     

抗肝片吸虫药物的合成及表征

合成了5个有机化合物，并且对他们进行了表征，由于他们的合成方法比较容易，原料也比较便宜，期望着这5个化合物都能作为抗肝片吸虫药物使用。     

三氯苯达唑治疗人肝片形吸虫的临床疗效观察

目的：探讨肝片形吸虫感染的有效治疗方法。方法：对我院住院治疗的7例肝片形吸虫感染患者进行临床资料分析,研究其使用三氯苯达唑与其它抗寄生虫药物治疗的对比。结果：7例患者均有相同的临床表现,阿苯达唑、吡喹酮等药物治疗无效,三氯达苯唑有效。结论：通过这次肝片形吸虫感染的治疗和临床分析,三氯苯达唑是一种具有良好抗肝片形吸虫药效的药物,对今后治疗肝片形虫病有一定指导作用。     

肝片吸虫DNA疫苗的构建及其免疫效应的初步研究

用ＥcorRI酶切含肝片吸虫保护性抗原基因ＦＨ３的重组质粒pUC18/FH3,回收ＦＨ３（－１．０Ｋb)片段克隆到真核表达载体pBlueCMV上,酶切筛选顺向插入重组子pBlueCMV-FH3,即得到一种肝片吸虫ＤＮＡ疫苗,制备纯化该疫苗并免疫小鼠,小鼠肌肉细胞中有一定的ＦＨ３抗原表达;用ＥＬＩＳＡ检测抗血清表明,注射疫苗的小鼠均伴随产生一定量的特异性抗体,用肝片吸早囊蚴攻击（２０囊蚴／鼠）小鼠,初步显示有一定的减虫率。     

肝片吸虫保护性抗原基因在卡介苗中的表达

用ECoR　I酶切合肝片吸虫保护性抗原基因FH3的重组质粒pUC18／FH3，回收FH3(约1．0kb)片段并测定其碱基序列．FH3片段以正确相位插入到E．coli—分枝杆菌穿梭表达质粒载体pMV261中，构建含有肝片吸虫保护性抗原基因的重组穿梭质粒．通过电转移法转化卡介苗，斑点杂交实验汪明，重组卡介苗中含有此抗原基因．热诱导FH3基因在卡介苗中的表达，并对基图表达产物进行别SDS—PAGE分析．结果显示，表达产物相对分子量为22kD．     

肝片吸虫抗原基因转基因苜蓿再生的研究

用直接转化法，将构建有肝片吸虫保护性抗原基因FH3的植物表达载体pBI121-FH3,导入感受态的根瘤农杆菌EHA105；以重组的根瘤农杆菌为介导，用叶盘法转化苜蓿外植体，筛选得到抗Kan转化外植体；抗性外植体通过诱导丛生芽和诱导生根，再生出完整植株，提出植株总DNA进行Southern blot，结果表明，FH3基因已经整合入苜蓿基因组中。     

绵羊肺炎支原体PCR检测方法的建立

为检测绵羊肺炎支原体感染,根据公开发表的绵羊肺炎支原体16SrRNA序列设计特异性引物。建立了PCR诊断方法。通过对绵羊肺炎支原体标准株、临床分离株、丝状支原体山羊亚种及临床病羊鼻拭子的检测。发现应用该检测方法能够对标准株、分离株和临床病羊鼻拭子扩增出特异性产物,而对丝状支原体山羊亚种则扩增小出。证实所建方法在绵羊支原体性肺炎的诊断上具有特异性、相对快速、简便等优点,值得在临床中推广应用。     

蛋白质组学用于疾病特殊蛋白质的鉴定

蛋白质组学是一门新的启动技术.它将便利越过一切生物学系统或疾病的蛋白质系统分析.在疾病特殊蛋白质的鉴别过程蛋白质组学高度补充基因组方法,且第一次提供科学家使蛋白质组信息,表达mRNA,它们各自的蛋白质和亚细胞定位一体化的能力.期望会导致对疾病机制新的重大认识.     

绵羊附红细胞体感染PCR检测方法的建立

为建立特异、敏感、快速的绵羊附红细胞体感染诊断方法,本试验根据已测得的绵羊附红细胞体16S rRNA基因序列（GeneBank：EU916726、FJ440328）,设计1对特异性引物,建立了绵羊附红细胞体的PCR诊断方法。特异性实验和敏感性实验结果表明,该方法与绵羊肺炎支原体、大肠杆菌、葡萄球菌、白色念珠菌、枯草杆菌均无交叉反应,能检测到绵羊附红细胞体最低DNA量为5．2pg/μL．在-80℃存放1年的皿样中也检测到阳性样品。通过临床血样检测,证明该方法可以用于本病的早期感染和隐性感染的检测。     

Study on the purification of OPV produced on vero cells with Q-Sepharose F. F.

Q-Sepharose Fast Flow (Q-Sepharose F. F.) was adopted to purify the suspensions of type I, II, III oral poliovaccine (OPV), which is prepared from Vero cells. After clarification and concentration by ultrafiltration, the recovery of virus infected titre may attain above 85%. Using column chromatography on Q-Sepharose F. F. to purify the concentrated virus suspensions, the purified viruses attain 100% recovery of virus infectivity. Dot membrane hybrization was used to detect DNA with the probe of Vero cell genome DNA which was labeled with α-P³² dATP, the contents of residual substrate DNA was less than 100 Pg/dose. The process of downstream had no significant influence on some biological characters of purified viruses, such as virus morphology, tumorigenicity, rct/40 character and capsid protein. This downstream reseach indicates that Q-Sepharose F. F. is an ideal chromatography material for purifying OPV prepared from Vero cells. Biography: LIAO Guo-yang (1962-), Ph D Candidate.     

菌落PCR方法的建立及其与常规PCR方法的比较

为建立一种快速、经济、敏感的PCR检测方法,以直接检测出环境、海产品等中的靶基因,通过PCR扩增已知携带tlh和tdh基因的副溶血弧菌标准菌株,并和常规PCR方法比较,初步建立了菌落PCR技术;再以副溶血弧菌标准菌株为阳性对照,以本实验室自海洋环境中分离得到的数株野生菌株为检测对象,采用新建立的菌落PCR以及常规PCR方法对它们进行扩增比较,进一步证明了菌落PCR技术检测携带相关基因菌株的可靠性．通过比较,发现菌落PCR和常规PCR的结果相当一致,两种方法均能扩增出阳性对照标准菌株中tlh和tdh基因．     

RB型硝胺发射药使用寿命实验研究

针对布鲁氏菌BCSP-31蛋白基因设计一对引物,优化反应条件,对布鲁氏菌属6个代表菌株以及与布鲁氏菌有交叉反应的对照菌株进行扩增,结果能够对布鲁氏菌属6个代表菌株进行很好扩增,扩增片段大小为223bp,而对照菌株不能扩增,使用该方法最低可以检测20个细菌.     

中药材羌活鱼引物特异性PCR鉴定

应用引物特异性PCR技术的原理和方法,根据已有Cyt b基因DNA序列的比对结果,设计可以特异扩增羌活鱼源动物包括山溪鲵属Batrachuperus的全部物种的PCR引物1对,SXNS1(上游引物)5′-GGGTCTGCTTAATCTCACAAATTAT-3′,SXNS2(下游引物)5′-CAATTA AAAATGGGAATAAGAAATG-3′.结果表明该对引物可以用于正品羌活鱼和混伪品的分子鉴定.