蔗果低聚糖的功能生产及研究进展

介绍蔗果低聚糖的性质、功能、生产和研究进展。侧重介绍了国外对β－呋喃果糖苷酶和果糖苷转移酶的研究及采用葡萄糖氧化酶构成混合酶系生产高纯度蔗果低聚糖的研究状况。     

黑曲霉A.niger 6640生物转化制备蔗果低聚糖

优化了黑曲霉A.niger 6640发酵制备蔗果低聚糖的发酵条件,研究了A.niger6640中β-呋喃果糖苷转移酶(β-Ffase)的性质,用阴离子柱DEAE Sepharose CL-6B对β-Ffase进行了分离纯化,用SDS-PAGE电泳初步分析了β-Ffase的分子质量.结果表明:A.niger 6640发酵制备FOS的最佳p H值为7.6、最佳发酵时间为40 h、最佳发酵温度为33℃、最佳蔗糖质量分数为40%;在磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液中,采用真空干燥工艺从A.niger 6640中制得的β-Ffase的催化反应的最佳p H值为6.5、最佳反应时间为16 h、最适酶用量为0.19 g;分离纯化得到的β-Ffase的分子质量约为75 ku.     

产M-海因降解酶系菌株的筛选及鉴定

从川西北高原温泉水样中分离得到一株具有M-海因水解酶系统的菌株MR1229,通过形态和生理生化特性研究,以及16S rDNA序列的测定和同源性比较分析,菌株MR1229初步被鉴定为Bacillus licheniformis.研究还表明菌株MR1229还具有与普通地衣芽孢杆菌不一般的生理生化特性:利用甘油产生二羟基丙酮;产糊精结晶;10%的NaCl条件下旺盛生长;12%的NaCl条件下微弱生长;61.5 ℃温度中微弱生长;pH5.0条件下微弱生长.     

产漆酶菌株的筛选及产酶条件的优化

以愈创木酚培养基为底物,利用平板筛选法从土壤朽木中筛选能够产漆酶的菌株,通过测定漆酶活力进行复筛,筛选出一株产漆酶活力较高的白腐茵菌株。以漆酶活性为参考指标,确定葵花粉发酵产漆酶条件：发酵培养基中硫酸铵0．025％,初始pH值5．5,接种量8％,装液量50mL,愈创木酚0．10％,培养时间7d。     

1,6—二磷酸果糖制备研究：Ⅰ.菌种的筛选及培养条件

介绍了１,６－二磷酸果糖产生菌的筛选和最佳培养条件的确定,在所筛选的菌种中９５１８、９５１９号菌株均具较高的产１,６－二磷酸果糖酶系活力。其最佳培养条件为：培养温度２８℃,ｐＨ６．５。     

脂肪酶高产菌株的筛选及酶学特性研究

从富油土壤中分离筛选到40株脂肪酶产生茵,其中060805茵株产脂肪酶的能力较强,根据其形态特征、生理生化鉴定及16s rDNA鉴定,初步鉴定为短波单胞茵.060805茵株发酵产酶需油脂的诱导,同时也依赖Mg2 ,培养基中不添加Mg2 时产酶量很少,微量的Mg2 就能激活茵体产酶.蔗糖等糖类物质不利于060805菌株产脂肪酶.该酶的最适作用温度为35℃,最适pH为6.0;而且在60℃保温60 min酶活基本不损失,在pH 5.0～8.0范围内稳定.     

黑曲霉β-葡萄糖苷酶菌株的筛选

采用牛津杯平板透明圈法对研究室保藏的17株黑曲霉菌株进行了β-葡萄糖苷酶产生菌初筛,得到5株透明圈相对明显的菌株,经固态发酵产酶复筛及相关纤维素酶活力的检测,选出一株β-葡萄糖苷酶酶活力高、且纤维素酶活力也较高的菌株niger-2,其β-葡萄糖苷酶酶活力为78.75 U/g、纤维素酶(CMC)活力为312.15 U/g...     

β-葡萄糖苷酶高产菌株的筛选及产酶条件优化

利用栀子苷培养基快速筛选β-葡萄糖苷酶产生菌,其中草酸青霉产酶水平较高.通过单因素实验、均匀设计及回归分析优化了发酵培养基配比和摇瓶产酶最佳条件:麸皮4%,牛肉膏0.2%,NaCl 0.1%,CuSO40.08%,EDTA 0.2%,KH2PO4 0.2%,初始pH 7.0,装液量20 mL/250 mL,温度30℃.发酵液上清中的酶活由最初的16.80 U/mL提高到52.18 U/mL.     

盐藻磷酸果糖激酶DsPFK基因的原核表达及酶活测定

利用原核表达载体pET-32a构建盐藻磷酸果糖激酶DsPFK基因的表达载体pET-32a-DsPFK.转化大肠杆菌BL21(DE3),通过不同温度及不同浓度IPTG诱导后获得以包涵体形式表达的DsPFK重组蛋白,经亲和层析获得大小44.4kDa的纯化蛋白,通过柱上复性的方法测定重组DsPFK蛋白的酶活为950U.     

产β—1，3—葡聚糖酶链霉菌菌株的筛选及其酶特性研究

从大白菜植株根际土壤中取样，通过茯苓粉琼脂培养基的透明圈试验，分离筛选到4株产β—1，3—葡聚糖酶的链霉菌菌株R8，R15，R31和AS。经比较发现，链霉菌菌株R15最早产生较明显的透明圈，且透明圈最大，澄清度最高，从R15菌株提取酶液，测定其分解β—1，3—葡聚糖的酶活力。结果表明，该酶作用的最适温度为55℃，最适pH为5．0；低于55℃，pH7．5以下，该酶较稳定；Fe^3 ，K^ ,Cu^2 ，Hg^2 对酶有抑制作用，而Ca^2 ,Fe^2 ，Ba^2 ，Mn^2 ，Al^3 及Zn^2 对酶有激活作用，抑菌圈试验表明，该酶对小麦纹枯病菌具有很强的抑制作用，抑菌圈宽度达15mm。盆栽防病试验结果表明，小麦种子经酶液处理后，病根率为34．51％，防病效果为64．28％。     

地衣芽孢杆菌NK-27菌株β-甘露糖苷酶的产酶条件及粗酶性质

地衣芽孢杆菌NK－27菌株可以产生胞外β－甘露聚糖酶和胞内β－甘露糖苷酶。β－甘露糖苷酶活力主要集中于细胞匀浆液中。以2．0％魔芋粉、1．0％（NH4）2SO4为碳、氮源地衣芽孢杆菌NK－27菌株经30℃振荡培养20－24h产生β－甘露糖苷酶酶活力最高。该酶于30－40℃、pH6.0时酶活力最高，在30－40℃、pH5．4－7．0酶稳定性较好。     

诺卡氏菌株82β－淀粉酶的部分纯化及其性质研究

诺卡氏菌株８２（Ｎｏｃａｒｄｉａｓｐ．８２）可产生一种β一淀粉酶，经５０％硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ一纤维素离子交换层析，将其纯化２１倍。该酶在６０℃，ｐＨ７．０条件下酶活最高；１００℃处理３０ｍｉｎ仍具有４０％的最初酶活力。     

产肌酐水解酶菌株的分离、鉴定及产酶条件研究

研究分离到几株产肌酐水解酶的菌株,对所产酶的特性分析表明,菌株 42 1 表现较高的产酶性能且所产的酶具有高的热稳定性.对菌株42 1产酶发酵条件的研究表明,菌株 42 1 以酵母膏和玉米浆为氮源时表现较高的产酶性能,葡萄糖等容易利用的碳源的存在对酶的产生没有抑制作用.诱导物肌酐、肌酸、肌氨酸、氯化胆碱和尿素可以诱导酶的产生,Mn2+、Co2+对酶的产生有促进作用.     

丝状真菌产生β－葡聚糖酶的研究 Ⅰ．GCN平板的建立及产酶菌株的选育

本文报道适用于筛选丝状真菌产生β－葡聚糖酶的平板初筛法。即：β－葡聚糖─刚果红营养平板法（ＧＣＮ平板法）．运用此法从分离源中初筛到产酶菌黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）Ａ２１，经ＵＶ和ＮＴＧ多次诱变，获得产酶能力高于亲株１．４６倍变异株Ａ２１４８．在初始ｐＨ６．８、温度２９℃和以大麦为主碳源培养基中，变株Ａ２１４８经８６ｈ培养产生β－葡聚糖酶［ＥＣ，３．２．１．７３］１２８ｕ／ｍｌ，并伴有少量糖化酶、中性蛋白酶及α－淀粉酶的产生。实验室规模提取实验表明：发酵液过滤除菌后，经硫胺、丙酮沉淀可得２１０６ｕ／ｇ左右的粉状酶制剂，酶提取总收率达６０％。     

产普鲁兰降解酶菌株的分离筛选及酶学特性的研究

普鲁兰降解酶(pullulan degrading enzymes)能够专一水解普鲁兰多糖α-1,6-糖苷键以及特定位置的α-1,4-糖苷键,在工业、食品业、医疗保健等行业中具有重要的应用意义.本研究采用唯一碳源法从稻田土样中培养筛选到21株产普鲁兰降解酶的菌株.对菌株A1的鉴定及其产生的普鲁兰降解酶的分析表明,该菌株为气单胞菌属,其产生的酶属于Ⅰ型普鲁兰酶(Type I pullulanase,EC 3.2.1.41),专一水解普鲁兰多糖α-1,6-糖苷键.该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为6.0,具有良好的温度稳定性和适应性;同时在pH为4.0时仍然保留50%的酶活.进一步对A1菌株产酶的发酵条件(pH、温度、时间)进行了优化,摇瓶中A1分泌表达Ⅰ型普鲁兰酶的水平达到21.2 U/mL.根据已报道的气单胞菌属普鲁兰酶基因的保守序列设计引物,克隆获得了4 053 bp的A1普鲁兰酶基因pluA1全长序列,编码1351个氨基酸.本研究结果为该酶的开发应用奠定了基础.     

一株聚β—羟基丁酸高产菌株的分离与研究：Ⅱ.出发菌株的筛选？…

从城市生活污水中分离筛选到一菌株,具如下主要特征：杆菌,（０．８５－１．２）＊２．０－５．０）μｍ;革兰氏染色阴性;具衣鞘,细胞包在鞘里,丝状体很长,但无分枝;亚端生鞭毛;胞内具ＰＨＢ颗粒和异染颗粒;液化明胶微弱;菌落为光滑型和丝状两种。经鉴定该菌株为浮液球衣细菌。     

发酵法生产京尼平菌株的筛选与培养

从土壤中筛选到一株产β-葡萄糖苷酶的菌株FYS-9,其发酵可将京尼平苷转化为京尼平。通过菌落形态特征、孢子和菌丝显微观察及18S rDNA基因序列分析,初步鉴定该菌株为泡盛曲霉（Aspergillus awamori）。以FYS-9为出发菌株,通过紫外线、原生质体诱变,选育得到一株高产β-葡萄糖苷酶的突变株70C-3,该突变株发酵产酶平均酶活力达到36.15IU/mL,比FYS-9提高39.4%。对突变株70C-3发酵转化京尼平苷条件的优化结果表明,在京尼平苷添加量1.5%,30℃、150r/min转化24h的条件下,京尼平苷的转化率达到97.7%,京尼平的产量可达8.5g/L。     

产纤维素酶新菌株的筛选及其产酶特性研究

【目的】筛选分离新的纤维素酶产酶菌株,并对其生长特性和产酶特性进行研究。【方法】从堆肥样品中分离得到一株产纤维素酶菌株,定名为CP1,利用16SrRNA序列对比和Biolog微生物鉴定系统进行鉴定。通过测定菌株生长速率确定其最适生长条件。采用CMC发酵培养基进行纤维素酶的研究,确定其产酶曲线。测定粗酶液最适作用温度和pH值,热稳定性和金属离子对其影响。【结果】经鉴定该菌株为梭形芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis),其最适生长温度为30℃,最适生长pH值为6。在含CMC-Na的培养基培养,该菌株的生长与产酶同步进行,培养48h菌株生长量达到最大,培养液的CMC酶活力同时达到最大值,为0.46U/mL。该菌株所产的纤维素酶既有酸性CMC酶活力,又有碱性CMC酶活力,并以碱性CMC酶为主,酸性CMC酶的活力只有碱性CMC酶的71.4%。其酸性CMC酶的最适作用pH值为6.0,碱性CMC酶的最适作用pH值为8.0。另外,该菌株所产碱性CMC酶活的最适作用温度为40~50℃,而且0.5%的Cu2+使其酶活降低45%。【结论】菌株CP1为首次报道的梭形芽孢杆菌产纤维素酶新菌株,具有独特的酸碱性环境下的纤维素酶活力。     

菲降解菌株的筛选及特性研究

目的 以菲为模型,分离能够以菲作为惟一碳源和能源进行生长繁殖的微生物,研究菲的降解特性,为多环芳烃的生物降解机制和工业应用的研究奠定基础.方法 从焦化污水池附近的土壤中,通过选择性富集培养,筛选、分离具有菲降解能力的茵株,通过16s rDNA序列分析鉴定其种属,并在不同的温度和pH条件下,测定菌株的生长及对菲的降解性能.结果 得到两株较好的菲降解茵,初步鉴定其分别属于不动杆菌属和假单胞茵属.其最适生长温度均为37℃,最适降解温度分别为34℃和37℃,最适生长pH分别为7.0和6.5～7.0,最适降解pH为7.0和6.5,两天内菲的最大降解率分别达到80.4%和86.6%.结论 分离得到的两株茵对菲都具有较好的降解能力,且假单胞茵略微优于不动杆菌,降解机制及降解策略、工程应用研究正在进行中.     

水稻土壤宏基因组中的β-葡萄糖苷酶基因克隆、表达及酶活的研究

β-葡萄糖苷酶(Ec3.2.1.21)属于糖苷水解酶家族3,它能够水解非还原性末端的β-D葡萄糖苷键,释放出游离的葡萄糖及相应的配基。β-葡萄糖苷酶是纤维素降解中的关键酶,对于可再生资源纤维素的利用具有十分重要的意义。本研究从水稻土壤中分离得到β-葡萄糖苷酶基因pds5,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,转化BL21大肠杆菌中,并诱导表达该基因。重组BL21大肠杆菌用IPTG诱导后,所提取的酶蛋白具有β-葡萄糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其相对分子质量为83 kD。通过控制pH和温度的方法,测得该酶酶活最适pH为7.0,最适温度为37.5℃。