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相似文献
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1.
除已被公认的两条补体激活途径,即经典途径和替代途径外,还存在着一条不依赖抗原──抗体复合物而激活补体的经典途径。用E.coliB、E.coliK12gal+的细胞壁加入到补体参与的溶血实验中发现有明显的溶血抑制作用,从而说明大肠杆菌的细胞壁对不依赖抗体而激活补体经典途径有密切关系。  相似文献   

2.
实验证实了E.coliB和E.colik12 gal^+的细胞壁可直接激活补本,去壁扣的细菌球形体或原生质体加入补体后可裂解,说明在不依赖特异抗体激活补体经典途径中,补体的激活部位是细胞壁,作用靶子似乎是细胞膜。  相似文献   

3.
补体对大肠杆菌的致死过程   总被引:2,自引:0,他引:2  
实验证明,在不依赖特异性机体的条件下,在E.coliB接触补体后的溶菌反应中,先释放碱性磷酸酶,后释放β-半乳糖苷酶,在一段时间内体外两种酶与溶菌率成正相关性,说明该情况下补体最初作用部位是细胞壁,但致死效应则涉及对细胞膜的损伤。  相似文献   

4.
我们将人尿激酶原基因(pro-UK)重组到含T_7基因10启动子的质粒(pET3c)中,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在大肠杆菌(E.coli)的BL21(DE3)菌株中进行表达。经纤维蛋白平板测活法测得表达产物存在于包含体中。经变性和复性处理后,表达量达每升培养液1600IU.用WesternBlot法鉴定表达产物为单一条带。分子量在43kDa左右,略低于天然54kDapro-UK。这可能与E.coli中缺乏糖基化酶有关。  相似文献   

5.
丝状蓝藻与大肠肝菌之间杂合质粒的构建与克隆   总被引:1,自引:3,他引:1  
丝状蓝藻Plectonema boryanum的pPb1经HpaⅡ酶酶切与AccI酶酶切的pUC13构成杂合质粒,杂合质粒克隆到E.coliJM109,频率为3.4%.转化进E.ColiJM109的杂合粒,用EcoRI和HpaI酶切后得到证实。杂合质粒转化到新制备的P。boryanum原生质球或丝状体后,再生的藻体表现高于原来两倍以上的AP抗性。利用AP每感的E.coli平板培养,证实了转化入藻体  相似文献   

6.
抗菌肽A—蜂毒素杂合肽基因在大肠杆菌中的克?…   总被引:2,自引:0,他引:2  
采用Eco RⅠ和BamH Ⅰ接头将化学合成的大小为5对碱基的CA(1-7)M(5-12)杂合肽基因克隆到E.coli分泌表达载体pIN-Ⅲ.OmpA2上的EcoRⅠBamHⅠ位点之间,并对其在Lpp启动子和Lac启动子/操纵调控下的分泌表达进行初步研究。  相似文献   

7.
按照E.coli和Yeast甚高表达基因中的同义密码子使用、碱基构成和密码子之间的碱基关联的EENS模式,对鱼抗冻蛋白基因AFPIIA7进行了改造,理论上使得AFPIIA7基因在E.coli和Yeast中的表达水平有了非常显著的提高.未改造的AFPIIA7基因在E.coli中表达,其表达水平为CAI=0.411,CEI=3.240是较低表达水平的基因,估计值在10~103mol/cell之间.经改造后,其表达水平变成甚高表达基因CAI=0.868,CEI=5.978,估计值在104~105mol/cell之间.在Yeast中表达,未改造的AFPIIA7基因的表达水平为CAI=0.359,CEI=5.880,也是较低表达基因.经改造后,此基因为Yeast的高表达基囚,CAI=0.703,CEI=11.668.本文的方法为异质基因获得高效表达提供了一种理论途径.  相似文献   

8.
介绍了超声转化蓝藻的方法,并用此方法获得了重组质粒pPRS-1转化Chroococcus sp.的转化藻落。从这些转化藻落中检测到重组质pPRS-1。此结果证明重组质粒pPRS-1是一种E.coli和Chroococcus sp.之间均可转化的穿梭质粒。  相似文献   

9.
介绍了超声转化蓝藻的方法,并用此方法获得了重组质粒pPRS-1转化Chroococcussp.的转化藻落。从这些转化藻落中检测到重组质pPRS-1.此结果证明重组质粒pPRS-1是一种E。coli和Chrooccussp.之间均可转化的穿梭质粒。  相似文献   

10.
重金属对大肠杆菌的毒性研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
本文用琼脂扩散法研究了重金属对E.coli的毒性影响,并将重金属浓度与抑菌圈直径进行相关回归分析,结果表明,重金属对E.coli的毒性顺序为Hg~(2+)>Cd~(2+)>pb~(2+)>Cu~(2+>>Zn~(2+),重金属浓度与抑菌圈的直径呈显著的正相关,各种金属受试物都有剂量-反应关系.  相似文献   

11.
含α—乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵   总被引:7,自引:0,他引:7  
利用E.coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体,将寻衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒醇母中,构建了重组质粒pYEA,实现了α-乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达。  相似文献   

12.
按照E.coli甚高表达基因中同义密码子使用,密码子内和密码之间碱基关联的EENS模式,对人干扰素α2b基因编码区中的同义密码子进行置换,理论上使得人干扰素α2b基因在E.coli中的表达水平有非常显的提高,在理论上,未改造的人干扰素α2b基因在E.coli中的表达水平为CAI=0.323,CDI=0.574,CEI=0.629,是较低表达水平的基因,估计实际表达水平在10~10^3mol/ce  相似文献   

13.
丝状蓝藻plectonemaboryanum的pPb1经HpaⅡ酶酶切与AccⅠ酶酶切的pUC13构成杂合质粒,杂合质粒克隆到E.coliJM109、频率为3.4%.转化进E.ColiJM109的杂合质粒,用EcoRⅠ和HpaⅠ酶切后得到证实.杂合质粒转化到新制备的P.boryanum原生质球或丝状体后,再生的藻体表现出高于原来两倍以上的Ap抗性.利用Ap敏感的E.coli平板培养,证实了转化入藻体的质粒对Ap具有高抗性.然而,获得的Ap高抗株在后续培养中不能继代维持.  相似文献   

14.
人血管生成抑制素基因在大肠杆菌中的融合表达   总被引:4,自引:1,他引:3  
将人血管生成抑制素基因定向插入表达载体pET-17b的BamHⅠ位点,构建重组质粒pETA2,转化E.coliBL21(DE3).在IPTG诱导下,血管生成抑制素基因在重组转化株E.coliBL21(DE3,pETA2)中获得高效表达.表达产物以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.2%.利用羊抗人纤溶酶原抗血清作为第一抗体,免疫印迹分析证明表达产物具有特异的免疫原性  相似文献   

15.
天蚕素A- 蜂毒素杂合肽基因的克隆*   总被引:4,自引:0,他引:4  
杂合肽天蚕素(1-7)蜂毒素(5-12)是一个只有15个氨基酸残基的短肽,是具有疏水性C-端和亲水性N-端的双性分子.它的分子大小只相当于天蚕素A的40%,而抗菌活性相当于完整天蚕素,或更高.本文根据其氨基酸顺序设计一个45bp的杂合肽基因,通过接头克隆到载体pVT102-U上,在酵母中表达,用比浊法初步测定表明表达产物具有抗E.coliD31活性.  相似文献   

16.
牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGR)cDNA在E.coli中表达,高压均质破碎菌体后,上清液以Heparin-SepharoseCL-6B亲和层析、C18反相HPLC分高纯化得到一分子量为2.25×10 ̄4的蛋白质,其等电点为9.34,并能与抗牛bFGFMcAb反应;其氨基酸组成与bFGF文献值一致;活性分析结果表明此蛋白质不仅能促进BALB/c3T3细胞增值,ED_(50)=0.85ng/ml,而且能促进鸡胚尿囊膜微血管增生,所得蛋白为具有生物活性的重组碱性成纤维细胞生长因子。  相似文献   

17.
提出了基因表达水平与碱基顺序关系的表达增强网络(EEN)模型,认为EEN与编码区中密码子的某些特定位点相关联,这些位点称为EENS.用统计分析的方法证实了EENS的存在,并对E.coli和Yeast找出了这些位点.发现表达水平不仅与同义密码子的使用、且与密码子第1第2位点(特别是1位点)有关,因此Ikemura的tRNA丰度说是不完全的。发现EEN在编码区中可能具有很大的尺度,而不局限于相邻密码子,因此tRNA-tRNA相互作用说是不完全的.  相似文献   

18.
野油菜黄单胞菌NK-01生物合成黄原胶的分子遗传学分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
本文采用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变野油菜黄单胞菌NK-01得到多糖合成缺陷的不产粘突变株。经SalI部分酶切得到NK-01染色体DNA片段,将其连接到广泛寄主载体pRK293上,在E.coliHB101中建立完整的NK-01基因文库。在协助质粒pRK2013存在下,不产多糖突变株分别与含基因文库的E.coli菌落群进行三亲接合转移,筛选具有卡那霉素抗性的产粘接合后体。对接合后体进行重组质粒的酶切分析表明,所克隆的DNA具有片段重叠。上述重组质粒对另外9株不产多糖突变株互补检测及遗传学分析表明,13.4kb的DNA片段含有合成黄原胶所必需的基因。  相似文献   

19.
人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)cDNA重组在表达质粒pDR720中。在E.coliC600中获得了表达,表达水平为2%。以醋酸锌显色PAGE凝胶回收t-PA表达条带,进行复性处理。复性产物经Benzamidine-Sepharose4B,Lysine-Sepharose4B亲和层析,纯化得到SDS-PAGE银染一条带纯度,比活为4,000mol/s·g的人t-PA。  相似文献   

20.
依据E.coli和Yeast基因表达水平与同义密码子使用,密码子内部碱基关联以及相邻密码子之间碱基关联的相关性,引入参数CDI和CEI分别代表密码子内部碱基关联与相邻密码子之间碱基关联对基因表达水平的影响,提出了一个通过CDI和CEI的极大化改造外源基因使之在E.coli和Yeast中高效表达的方案,并以鱼抗冻蛋白基因为例进行了具体计算。  相似文献   

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