紫贻贝多糖酶法制备工艺研究

用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶分别提取紫贻贝粗多糖,以及木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖,木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶复合酶提紫贻贝粗多糖。并分析研究加酶量、料液比、pH和温度对紫贻贝提取率的影响。结果显示:木瓜蛋白酶最佳加酶量1%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为60℃。提取率为6.65%。中性蛋白酶最佳为加酶量2%,料液比1:15 g/m L,pH为7,温度为50℃,提取率为5.52%。碱性蛋白酶最佳加酶量为2%,料液比1:15 g/m L,pH为10,温度为50℃,提取率为6.89%。木瓜蛋白酶与中性蛋白酶两步联合酶提取最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,pH为7,温度为50℃,此条件下提取率为6.86%。木瓜蛋白酶和碱性蛋白酶两步联合酶提最佳提取条件为加酶量1%,料液比1:20 g/m L,木瓜蛋白酶缓冲液pH为7,碱性蛋白酶缓冲液pH为10,温度为50℃,此条件下提取率为7.27%。     

舟山近海紫贻贝生物学性状初步研究

对274只紫贻贝的壳长、壳宽、壳高、体重、软组织湿重、软组织干重等进行了测量分析,结果表明:紫贻贝壳长与壳重关系为W=0.368 61L2.63529,壳长与软组织湿重的关系为WW=0.206 3L2.72 023,壳长与软组织干重的关系为DW=0.0363L2.69236,壳长与壳宽关系为SW=0.047 91 0.371 05L,壳长与壳高关系为H=0.378 37 0.454 44L,软组织含水率为WP=83.33034%±2.486 59%;雌雄群体在壳长、壳宽、壳高、体重等指标上无显著性差异。     

罗非鱼下脚料酶解产物中抗菌肽的初步研究

为了得到具有高活性的抗菌肽,开展罗非鱼下脚料的深加工利用,提高综合效益、减少环境污染。本研究以罗非鱼下脚料为原料,经过初步试验得出最佳酶解条件为:酶解温度为55℃,pH为9.0,底物浓度为10%,加酶量为4000Ug,酶解时间5h。酶解液在4℃下,以12000rpmin的速度离心20min,上清液经分子质量截留为1ku的超滤,获得分子质量小于1ku的粗肽组分。     

紫贻贝配子细胞表面糖基的定位研究

细胞表面糖蛋白中糖的特性对于细胞的相互识别起重要作用,配子细胞表面糖配基的差异恰恰体现不同物种间受精作用的特异性,本研究分别选用可以特异性结合半乳糖、葡萄糖、甘露糖、岩藻糖的FITC标记凝集素,对紫贻贝配子细胞中对应的糖进行研究。结果显示,4种糖在卵细胞边缘的标记特征不明显,仅半乳糖和葡萄糖在一些卵细胞边缘有区域性分布,但在细胞质区,这4种糖均有少量分布;半乳糖和岩藻糖在贻贝的精巢的精细胞和成熟精子区为较均匀的弱阳性标记,甘露糖仅在输精小管边缘有分布,葡萄糖的含量相对较多,但也只是在输精小管边缘以及成熟精子区有一定的标记。上述结果表明,紫贻贝配子细胞表面不同糖基的分布和含量存在一定的差异,造成配子间起到识别作用的糖蛋白组成和结构不同,决定了紫贻贝配子识别的特异性。     

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性.采用正交实验方法, 以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16(45)正 交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGCS0-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对 肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bel-2表达的影响.结果表明:当料液比为1:4、pH为8.5、加酶 量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1:4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温 度为40℃、酶解时间为2h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bc1-2的表达.紫贻贝酶解多肽具有 抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的.     

紫贻贝营养成分的分析及重金属的检测

目的：分析紫贻贝（Mytlus edulis linnaeus）的主要营养成分和重金属的含量。方法：按照国标的方法对紫紫贝中的水分、脂肪酸、氨基酸、总糖、灰分、微量元素和重金属进行了检测。结果：紫贻贝中有较高含量的牛磺酸（36mg/kg）、锌及不饱和脂肪酸;紫贻贝中的重金属含量铅、汞、无机砷都符合国家保健食品的有关限度的规定,这些结果为进一步研制紫贻贝保健食品提供了科学依据。     

鱿鱼及虾蟹加工下脚料发酵工艺研究

探讨了商业菌对鱿鱼及虾蟹下脚料发酵工艺的效果。以海产品中的鱿鱼内脏和虾蟹加工下脚料作为试验的主要原料,利用商业菌进行发酵试验。以可溶性蛋白作为测量指标,设计单因素及正交试验探寻最佳发酵条件。结果显示商业菌发酵鱿鱼内脏最佳条件为料水比1:7,接种量30%,温度35℃,发酵时间1 d,可溶性蛋白转化率可达20.33%;商业菌发酵虾下脚料最佳条件为料水比1:7,接种量30%,温度30℃,时间1 d,可溶性蛋白转化率可达13.18%;商业菌发酵蟹下脚料最佳条件为料水比1:7,接种量30%,温度35℃,发酵时间1 d,可溶性蛋白转化率可达12.76%。本研究探究了商业混合菌对海产品下脚料的生物转化作用,为生物蛋白产品生产研究提供一定参考依据,在减少资源浪费的同时增加了低值海产品加工副产物的经济效益。     

家蝇抗菌肽的分离纯化及性质研究

采用阳离子交换法,分别以pH5.1的乙酸铵和pH6.6的甲酸铵作缓冲液进行2次离子梯度洗脱,从家蝇成虫血淋巴中分离得到1种抗菌肽CM-Ⅲ.SDS-PAGE电泳显示为1条带,分子量约为10000μ,耐受高温的能力强,100℃处理10 min仍有活性.它对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、白葡萄球菌)和阴性菌(绿脓假单胞菌、大肠杆菌、肠炎沙门氏菌)都有抗性,其中对致病性金黄色葡萄球菌6538P抑菌活力最强.CM-Ⅲ对血细胞没有凝聚作用.其抗菌机理尚待进一步研究.     

抗菌肽Lc-NKlysin-1a的抗菌稳定性及其抗菌机理

Lc-NKlysin-1是从海洋鱼类——大黄鱼(Larimichthys crocea)中获得的抗菌肽,为进一步优化该抗菌肽和研究其结构与功能的关系,本文截取了其N末端的12个氨基酸残基,设计并合成了抗菌肽Lc-NKlysin-1a,同时,通过琼脂板打孔法,对其抗菌活性,不同温度、pH值、盐浓度等对其抗菌活性的影响,其溶血活性,最低抑菌质量浓度,其抗菌特征等进行了研究,并在扫描电镜下观察了其对细菌形态结构的影响.结果表明:抗菌肽LcNKlysin-1a对革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)和革兰氏阴性菌(大肠杆菌、副溶血弧菌、铜绿假单胞菌、抗链霉素大肠杆菌)均具有抗菌活性;但对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和抗链霉素大肠杆菌的抗菌活性最好,其最低抑菌质量浓度(MIC)在15.62531.25μg·mL~(-1)之间;相对于Lc-NKlysin-1,Lc-NKlysin-1a的抗菌活性明显增强;Lc-NKlysin-1a在15.62531.25μg·mL~(-1)时,其溶血率为3.80%7.37%,溶血活性较低;Lc-NKlysin-1a对温度、pH和盐等具有良好的耐受性,且稳定性高.此外,通过扫描电镜还观察到,抗菌肽Lc-NKlysin-1a作用于细菌后细菌的形态发生了明显改变,其细胞膜出现了褶皱和塌陷的现象,最终导致了内溶物外泻而死亡.改造后的抗菌肽其相对分子质量小,活性高,稳定性强,更易于被开发成抗菌肽类药物.     

鲶鱼下脚料中鱼油的提取及贮藏稳定性研究

以鲶鱼下脚料为原料,研究丙酮、正丁醇、正己烷–异丙醇等有机溶剂对鱼油的萃取效果,并研究鲶鱼鱼油的贮藏稳定性.结果表明:正己烷–异丙醇法从鲶鱼碎肉中提取鱼油效果最佳,正己烷–异丙醇的体积比为3∶2,提取时间20,min,反萃取时正己烷–异丙醇的体积比为7∶2时,提取率达到27.92%,且鱼油的感观质量较好;提取出的鱼油在0~4,℃冷藏或添加100,mg/kg VE后常温下贮存稳定性较高.经测定,鲶鱼鱼油的不饱和脂肪酸质量分数达到65.84%,必需脂肪酸的质量分数达19.96%,具有很高的营养价值.     

鲎素抗菌肽分子结构稳定性及生物活性的研究

鲎素是一种高效的、广谱的抗菌肽,已经成为研究热点.为了实现鲎素在生产实践中的应用,研究鲎素在体外分子结构、生物活性的稳定性.本文采用不同温度、pH值、体外蛋白酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶B )分别处理鲎素.通过检测鲎素最小抑菌浓度(MIC)的变化,来衡量鲎素生物活性稳定性;采用HPLC法检测鲎素残留量,通过HPLC图谱变化来评定鲎素分子结构稳定性情况.结果表明:在t < 120℃、pH < 10.0作用情况下,鲎素对大肠杆菌K88的MIC为1.25～2.5 mg/L,高效液相色谱检测鲎素残留量在65.5～70.2μg之间;鲎素对胃蛋白酶的作用表现出很高的稳定性,对胰蛋白酶、羧肽酶、弹性蛋白酶的作用稍微敏感.在胃蛋白酶浓度小于 320 U/mL,胰蛋白酶浓度小于40 U/mL,羧肽酶浓度小于20 U/mL,弹性蛋白酶浓度小于2.5 U/mL作用下鲎素仍具有活性.通过实验得出结论:鲎素抗菌肽具有较强的高温耐受性,在酸性条件下具有稳定性,同时鲎素具有一定的耐受蛋白酶降解的能力.     

温度胁迫对紫贻贝与翡翠贻贝生理活动的影响和Hsp27的响应

为了探究急性温度胁迫对温度适应性不同的贻贝的生理影响,以紫贻贝(Mytilus galloprovincialis)与翡翠贻贝(Perna viridis)为对象,分别用4,8,25,35℃对紫贻贝进行温度胁迫,用8,15,35,42℃对翡翠贻贝进行胁迫。通过对耗氧率与排氨率的检测,分析了贻贝的生理代谢;制作石蜡切片观察鳃组织结构的变化,用Western-blot对Hsp27在鳃组织中的表达变化进行研究。结果表明:两种贻贝的耗氧率和排氨率均随温度升高而升高,但当紫贻贝胁迫温度达到35℃,翡翠贻贝胁迫温度达到42℃时,则表现出急剧下降;急性温度胁迫破坏两种贻贝鳃组织结构,并且损伤在恢复24 h后不可逆转,同时造成贻贝鳃组织Hsp27表达量升高。说明在一定温度范围内,贻贝的代谢随温度上升而加快,但当温度超过机体耐受阈值,可能会抑制代谢;低温和高温胁迫均可以破坏贻贝的鳃组织结构,且24 h内无法恢复; Hsp27在紫贻贝应对低温胁迫可能更为积极,而在翡翠贻贝应对低温及高温胁迫均有应答。     

山城紫苕色素稳定性的初步研究

主要研究pH值、温度、光照、金属离子及其它食品添加剂和氧化剂对山城紫苕色素稳定性的影响．实验结果表明：紫苕色素在pH=3．0左右,降解缓慢；对光、热都较稳定；除Fe^3 、Sn^2 外，大多数离子影响较小；常用食品添加剂影响也很小；强氧化剂对其有破坏作用．     

油菜抗菌肽的分离及抑菌机制的初步研究

LwIP是一套用于嵌入式系统的开源、精简后的TCP/IP协议,具有移植性强、资源占用率低等特点.基于嵌入式系统的网络通信需要,论述了LwIP在uC/OS操作系统和S3C4510B处理器平台的实现方法,完成了LwIP的移植,为嵌入式系统与Internet网络互联提供了一种可行的解决方案.     

油菜抗菌肽的分离及抑菌机制的初步研究

通过Sephadex G-100凝胶柱层析和HPLC的方法,从油菜籽的水溶性物质中初步分离一种活性肽.采用抑菌圈法测定活性肽的抑菌活性,结果表明,这种活性肽对病原性真菌有明显的抑制作用,对细菌没有抑制效果.对活性肽的稳定性测定表明,活性肽加热到90℃未丧失活性,在pH7的时候抑菌效果最为明显.利用扫描电镜观察到这种活性肽能够很明显影响真菌孢子正常生理形态.     

甲基紫的薄层色谱分离

本工作利用以硅胶G为固定相的薄层色谱技术分离试剂甲基紫,以氯仿、醋酸和0.1N盐酸的混合溶液为流动相,当三者体积比为2:2:1时,分离得到六个斑点,并用紅外光谱分析证明其结构的不同。此方法可用于甲基紫混合物的分离和提纯。     

紫背天葵红色素稳定性的研究与应用

研究了影响紫背天葵红色素稳定性的几个因素,为其在食品工业中的应用提供理论依据。     

黑尾胡蜂毒液抗菌肽的分离纯化及功能研究

由于病原微生物对众多传统抗生素药物的耐药性问题日益突显,因此寻找新型的抗菌药物显得尤为紧迫,多肽类制剂因其具有广谱的抗菌活性,已成为克服病原微生物耐药性的潜在候选药物.从黑尾胡蜂毒液中分离并鉴定了一种具有抗菌活性的多肽,命名为VT-1.VT-1对临床致病菌均表现出广谱的抗菌活性.此外,VT-1对人红细胞显示出微弱的溶血活性.     

厚壳贻贝抗菌肽mytichitin-CB的固相化学合成、复性及功能

抗菌肽是贻贝免疫系统的重要组成部分,也是开发新型生物抗生素的先导分子。厚壳贻贝抗菌肽mytichitin-CB是厚壳贻贝几丁质酶的C端天然裂解产物,具有几丁质结合结构域及抑菌活性。Mytichitin-CB分子在厚壳贻贝血清中含量极低,妨碍了后续研究。为深入研究mytichitin-CB的结构与功能,采用固相化学合成手段,成功合成了mytichitin-CB肽段,采用反相高效液相色谱和质谱对合成后的mytichitin-CB进行了纯度和精确分子量验证。通过氧化复性策略对合成后mytichitin-CB进行了成功复性,复性后的mytichitin-CB开展了抑菌活性测试,热稳定性和几丁质结合活性分析。结果表明合成mytichitin-CB对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及真菌具有明显的抑制活性;经60℃温度处理后,其抑菌活性未见明显下降;合成mytichitin-CB与几丁质具有可逆结合作用。上述研究表明,合成mytichitin-CB具有与天然mytichitin-CB相似的结构与功能,可用于开展后续抗菌机制分析,同时,其较强的抑菌活性和较好的热稳定性为后续基于mytichitin-CB的生物抗生素研发奠定了基础。     

紫球藻及其多糖的研究

就近年来紫球藻生理活性物质中的硫酸酯多糖的研究进展作一综述．紫球藻多糖具有抗病毒、抑制病毒复制,对单疱疹病毒1型和2型(HSV1,2)及水痘一带状疱疹病毒(VZV)明显的抗性,并可抑制小鼠癌细胞的发展。