海南产花鳗鲡细胞色素b基因的克隆及序列分析

线粒体细胞色素b基因是目前研究鱼类分子系统进化的重要分子标记.笔者以日本鳗鲡线粒体基因组序列为模板设计并合成引物进行PCR扩增,并将扩增产物经琼脂糖凝胶电泳和纯化后,克隆到pMD18-T载体、测序,成功得到全长为1 140 bp的海南产花鳗鲡细胞色素b(Cyt b)基因序列.将该基因全长序列递交到Genebank数据库,获得序列登录号为EF690363.用DNA分析软件MEGA2比较了海南产花鳗鲡与递交到GenBank中的8种分布在中国东南沿海、日本海域及南太平洋海域的鳗鲡属(Anguillia)细胞色素b基因的地理差异,并构建了系统进化树.结果显示:日本产和夏威夷产花鳗的地理差异小于海南产花鳗与它们之间的地理差异.     

花鳗鲡和日本鳗鲡肌肉生化成分的比较研究

对花鳗鲡肌肉生化成分进行定量分析,结果表明：（1）花鳗鲡鲜肉中蛋白质含量为11．44％,脂肪5．08％,水分77．94％,是一种高蛋白低脂肪的鱼类。（2）花鳗鲡鲜肉中含18种氨基酸,总量为49．95％,其中含有8种人体必需氨基酸,总量为19．32％;具鲜甜味的天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和甘氨酸分别占鲜肉氨基酸总量的9．89％、19．80％、6．07％和5．43％。可认为是一种氨基酸组份较齐全、味鲜美的珍贵食用鱼类。进一步与日本鳗鲡比较,表明：花鳗鲡的营养价值优于日本鳗鲡;花鳗鲡和日本鳗鲡肌肉中氨基酸组份和含量高低相似;日本鳗鲡的氨基酸总量高于花鳗鲡。本研究可为花鳗鲡的种质鉴定、资源保护开发和养殖饲料配制等提供科学依据。     

嗜水气单胞菌感染美洲鳗鲡的病理观察

用嗜水气单胞菌人工感染美洲鳗鲡(Anguilla rostrata),采集死亡或濒死鳗鲡的心脏、肝脏、肾脏和脾脏,通过病理组织切片染色观察其病理变化,从组织病理学角度研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对美洲鳗鲡的致病性.结果表明,美洲鳗鲡感染嗜水气单胞菌后注射部位出现溃疡,其组织病理变化主要见于肾脏,表现为肾小球毛细血管肿胀,肾小囊囊腔狭窄;肾间质出血,有较多的炎性细胞浸润;肾小管变性崩解,上皮细胞肿胀,颗粒或水泡变性,大部分上皮细胞脱落进入管腔,管腔内有蛋白管型和细胞碎片.肝脏弥散性出血,肝细胞水肿变圆,空泡变性,部分肝细胞溶解、消失;肝中央静脉扩张,充盈红细胞;肝血窦瘀血,肝组织间含铁血黄素沉着.脾淋巴细胞明显减少,白髓几乎消失;被膜结缔组织增厚、出血;脾炎性水肿,部分实质细胞坏死,出现许多网孔;脾间质小动脉管壁严重水肿增厚.心肌纤维出现不同程度的颗粒变性,变性纤维浑浊肿胀.本研究结果为美洲鳗鲡感染嗜水气单胞菌后的病理诊断及其免疫防治提供了参考依据.     

三种鳗鲡肌肉无机元素组成分析

采用电感耦合等离子体发射光谱仪对花鳗鲡,欧洲鳗鲡和日本鳗鲡肌肉无机元素组成进行测定。结果证明：花鳗鲡肌肉中Ｃａ含量最高,Ｐ含量次之,而欧洲鳗鲡和日本鳗鲡肌肉中Ｐ含量最高,Ｃａ含量次之,三种鳗鲡肌肉中Ｎａ,ｍｇ,Ｋ含量相近。     

花鳗鲡和欧洲鳗鲡耗氧率的研究

采用自制鱼类呼吸器测定了花鳗鲡和欧洲鳗鲡钰在饥饿2天,水温为28～29℃条件下的耗率及其昼夜变化规律。花鳗鲡的昼夜平均耗氧率为73．49mg／kg．hr;欧洲鳗鲡的昼夜平均耗氧率为48．75mg／kg．hr。两种鳗鲡的耗氧率均表现一定的昼夜变化。花鳗鲡耗氧率在白天的波动幅度比欧洲鳗鲡大,夜间两种鳗鲡耗氧率的波动幅度相似。一天24小时,花鳗鲡耗氧率有2次低峰期,即7：00和19：00为低峰期,15：00为高峰期,两次低峰期耗氧率分别为31．59mg／kg．hr和26．74mg／kg．hr,一次高峰期的耗氧率为135．77mg／kg．hr。欧洲鳗鲡耗氧率24：00时最高,为112．58mg／kg．hr,9：00时最低,为21．70mg．／kg．hr。     

基于16S rDNA序列和RFLP分析的病鳗分离菌株鉴定

结合16S rDNA基因序列和限制性片段长度多态性(RFLP)的分析方法,通过与GenBank库中已递交的细菌16S rDNA基因序列进行同源性比较,对分离自发病鳗鲡(欧洲鳗鲡,日本鳗鲡和美洲鳗鲡)的30株细菌进行初步鉴定和分类.结果表明,这些细菌可大致分为气单胞菌属(Aeromonas sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、邻单胞菌属(Plesiomonas sp.)、克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.)、不动杆菌属(Acinetobacter sp.)和肠杆菌属(Enterobacter sp.)等7个菌属.分析认为,部分分离菌株可能是引起鳗鲡病害的疑似致病性菌株.     

鳗鲡的生活史和人工育苗的探讨

鳗鲡（Ａｎｇｕｉｌａ）是逆河降海的洄游性鱼类,一个多世纪以来,其生活史问题一直是不解之谜。随着鳗鲡养殖业的发展,人们正努力探索鳗鲡的人工育苗技术。文中总结了鳗鲡的生活史、种类、分布、产卵地、人工育苗技术的研究情况,并分别进行了讨论。     

一株日本鳗鲡肠道乳酸菌SOD酶基因克隆表达与应用研究

为了解决日本鳗鲡抗生素滥用的问题,探究能够替代抗生素的微生态制剂,从日本鳗鲡肠道中筛选益生菌乳酸菌,克隆其SOD酶基因,并在大肠杆菌中进行表达,将SOD酶、益生乳酸菌同基础饲料配制成3组不同的饲料饲喂鳗鲡后进行血液生化指标分析.实验结果表明,益生菌、SOD酶以及乳酸菌和SOD酶制成的复合酶饲养的鳗鲡的血清总蛋白相对于对照组分别提高2%、8%、18%;葡萄糖相对于对照组分别提高64.8%、19.1%、79.7%;超氧化物歧化酶相对于对照组分别提高10.7%、25.4%、47.1%.各项指标提示添加乳酸菌、SOD酶蛋白有利于日本鳗鲡的生长,在一定程度上提高宿主的抗病能力和免疫性能.     

迟缓爱德华氏菌感染美洲鳗鲡后的组织与超微病理观察

用迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)人工感染美洲鳗鲡(Anguilla rostrata),采集死亡或濒死鳗鲡的脏器,从组织病理学角度研究其致病性。结果表明:感染迟缓爱德华氏菌的美洲鳗鲡可发生急慢性炎症。急性炎症时可见肝组织多发性坏死灶,周围可见巨噬细胞聚集,肝细胞变性、坏死;慢性感染时易见病鱼肝组织大面积高度纤维化,肝细胞坏死,细胞间质增宽,间质内充满胆汁和单核巨噬细胞,肝脏中央静脉血管壁扩张。急性感染时肾间质与肾小管局灶性坏死,肾小管上皮细胞空泡化,部分上皮细胞脱落入管腔,呈蛋白管形;慢性炎症反应时肾间质血窦内单核巨噬细胞大量增生并形成早期肉芽肿,肾小管管腔内出现大块异物,肾小球毛细血管肿胀,肾小囊内出现红染的纤维素性渗出液。染病鳗鲡脾脏红白髓正常结构消失,红髓内出现大量淋巴细胞,白髓区有崩解的红细胞;白脾区淋巴细胞坏死后纤维化形成增生性结节;心肌纤维出现局灶性坏死,肌纤维溶解、断裂呈索状或团块状。染病鳗鲡的超微病理变化表现为肾小球毛细血管扩张,血管内深染的内皮细胞增多;肾小管上皮细胞肿大,有些肾小管上皮细胞坏死溶解,细胞核消失,肾小管管腔内充满蛋白样物质和坏死细胞碎片;肾间质结缔组织溶解消失,有大量的吞噬细胞和感染菌菌体;部分肾小管上皮细胞胞质内线粒体数量减少,线粒体肿胀,嵴断裂,内质网断裂,核糖体从内质网上分离、散开;坏死的造血细胞核高度浓缩,电子密度极高。     

鳗鲡源创伤弧菌的间接ELISA快速检测

创伤弧菌(Vibrio vulnificus)血清2型对鳗鲡有专一的感染性,是鳗鲡出血性败血症、烂鳃病和烂尾病的重要病原菌。采用间接ELISA法对制备的兔抗创伤弧菌多克隆抗血清进行效价测定,结果表明其效价高达1∶512 000。从发病鳗鲡中分离出创伤弧菌和37株其他致病菌,将38株病原菌以较低浓度(1×106cfu/m L)包被后通过兔抗创伤弧菌血清进行交叉反应水平检测,结果表明,兔抗创伤弧菌血清稀释到1∶256 000或1∶128 000时,其与37株其他病原菌均未产生明显的ELISA交叉反应。该血清分别经1∶64 000和1∶32 000稀释后,采用ELISA方法检测了经创伤弧菌、鳗鲡爱德华氏菌(Edwardsiella anguillarum)和嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒感染死亡的美洲鳗鲡(Auguilla rostrata)脏器组织悬液(肝脏、肾脏和鳃),结果表明,兔抗创伤弧菌血清经1∶32 000稀释后可特异性检出鳗鲡鳃和肾脏组织中的创伤弧菌。     

澳洲鳗、日本鳗和欧洲鳗的RAPD初步比较分析

运用RAPD技术,以日本鳗Anguilla japonicus、欧洲鳗Anguilla anguilla和澳洲鳗Anguilla australia尾鳍DNA作为模板,在20种随机引物中筛选出4种随机引物进行扩增反应,得到这3种鳗鱼DNA的RAPD扩增片段,通过比较这3种鳗鱼的扩增条带的特异性、种间相似性指数(日本鳗和欧洲鳗之间的相似指数为0.556 5,日本鳗和澳洲鳗、欧洲鳗和澳洲鳗的相似指数分别为0.510 2和0.5278)和遗传距离,探讨这3种鳗鱼的遗传差异,为鳗鱼的种质鉴定奠定基础。     

欧鳗“狂游病”病毒的分离及观察

患“狂游病”欧鳗的主要脏器经电镜切片观察表明：该病毒主要存在于病鳗的脑、心脏和肌肉组织中,存在有一大小约为80－100nm的圆形病毒,成熟的病毒颗粒具有清晰可见的包膜结构,病鳗组织匀浆后,经蔗糖分步超速离心法,RNA酶及DNA酶消化去除组织内DNA、RNA后,获得纯化的病毒颗粒。又经蛋白酶K消化后得到病毒的核酸,以DNAaseI或RNAaseA分别消化,经1％的琼脂糖凝胶电泳证实该病毒为DNA病毒。     

Oceanic biology: spawning of eels near a seamount

Discoveries of the larvae of the European and American eels, Anguilla anguilla and A. rostrata, in the Sargasso Sea and of the Japanese eel, A. japonica, in the Philippine Sea indicate that these freshwater eels migrate thousands of kilometres into the open ocean to spawn. Here we pinpoint a spawning location for Japanese eels after genetically identifying newly hatched larvae that we collected from the site. The restricted size of this spawning area ensures that the eel larvae enter a particular current that transports them to the freshwater areas in east Asia where they mature, and it also prevents them from being carried southwards away from their species range by a different local current.     

三种常用药物对欧洲鳗拟指环虫的杀灭效果比较

比较三种常用药物在不同浓度下对欧洲鳗拟指环虫的杀灭效果。结果表明：药浴72h后,最适药物浓度和杀虫率,欧指清、指环特灭、指环杀星分别为：O．20mg·L^-1,67．14％;0．40mg·L^-1,57．05％;0．50mg·L^-1,48．73％。根据厂家建议用量,将欧指清：指环特灭=0．20mg·L^-1;0．20mg·L^-1。进行联合用药,其杀虫率为86．36％。因此,三种药物中欧指清的杀虫率最高,且它与指环特灭合用的效果更佳。     

Genetic evidence against panmixia in the European eel

The panmixia hypothesis--that all European eel (Anguilla anguilla) migrate to the Sargasso Sea for reproduction and comprise a single, randomly mating population--is widely accepted. If true, then this peculiar life history strategy would directly impact the population genetics of this species, and eels from European and north African rivers should belong to the same breeding population through the random dispersal of larvae. To date, the panmixia hypothesis has remained unchallenged: genetic studies realized on eel's mitochondrial DNA failed to detect any genetic structure; and a similar lack of structure was found using allozymes, with the exception of clinal variation imposed by selection. Here we have used highly polymorphic genetic markers that provide better resolution to investigate genetic structure in European eel. Analysis of seven microsatellite loci among 13 samples from the north Atlantic, the Baltic Sea and the Mediterranean Sea basins reveals that there is global genetic differentiation. Moreover, pairwise Cavalli-Sforza and Edwards chord distances correlate significantly with coastal geographical distance. This pattern of genetic structure implies non-random mating and restricted gene flow among eels from different sampled locations, which therefore refute the hypothesis of panmixia. Consequently, the reproductive biology of European eel must be reconsidered.     

9种中草药对鳗鲡病原菌体外抑菌活性的影响

对3株染病的日本鳗鲡肾脏中分离的致病菌进行活化,同时采用二倍稀释法以黄连、大黄、穿心莲、大青叶、黄岑、黄柏、鱼腥草、虎杖、苦参9种单味煎剂对3株分离菌和爱德华氏菌及嗜水气单胞菌的标准株进行最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定。结果显示大黄及虎杖体外抑菌活性最为理想。     

中华鳖白细胞发生的观察

通过对中华鳖骨髓、脾脏、肝脏、肾脏及外周血等几种组织涂片或印片的观察研究，发现骨髓是中华鳖粒细胞的主要发生器官，而脾脏是中华鳖淋巴细胞和单核细胞的主要发生器官，白细胞的发育过程大致经过3个阶段，即原始阶段、幼稚阶段、成熟阶段，着重描述了各个阶段细胞的形态特征．     

环颈雉红细胞的显微结构观察

应用常规血涂片Wright染色法对环颈雉(Phasianus colchicus)红细胞进行显微观察和形态参数测定.结果表明:环颈雉成熟的红细胞呈长椭圆形,长轴18.88 μm,短轴10.00 μm,表面光滑,有核,其发育经过幼稚红细胞、未成熟红细胞和成熟红细胞3个阶段,还观察到直接分裂的红细胞和分裂后产生的梨形红细胞...