核酸分子杂交检测黄瓜花叶病毒

为检测黄瓜花叶病毒的存在,应用Northernblot,将提取的黄瓜花叶病毒RNA样品,经甲醛变性凝胶电泳分离,使RNA解离成单链,然后用上行毛细管转移法,将凝胶上的单链RNA片段转移到尼龙膜上.经适当洗涤、干燥后,在烤箱中80℃保温2h,用于杂交.以带有黄瓜花叶病毒目的片段的细菌质粒制备DNA探针,用放射性同位素32P标记探针DNA,100℃变性处理用于杂交的探针,然后进行杂交.结果表明,在杂交膜上显示与特异性探针结合的阳性RNA条带,检测到了黄瓜花叶病毒的存在.     

生物素标记核酸探针杂交检测灵敏度的比较研究

用Biotin-11-dUTP进行缺口翻译缺备生物素标记的人β-珠蛋白基因探针并用该探针进行了斑点杂交，硝酸纤维素膜印迹杂交 及琼脂糖凝胶直接染交方法学比较，结果表明：经ABAP法显色后，上述三种杂交法中，DNA最低可检测量依次为5，10，50pg，以斑点杂交法最灵敏。     

在载玻片上制备高杂交效率的DNA芯片

目的 :改进玻璃基质上固定DNA的方法 ,提高固定DNA的杂交效率 .方法 :玻片用 β -(对、间氯甲基苯基 )三氯硅乙烷和 β -苯基三氯硅乙烷二组分混合硅烷化试剂处理 ,再用NaI丙酮溶液处理 ,在表面自组装形成带有苄碘功能基的二组分混合单层硅烷膜 .巯基修饰的DNA共价偶联到这一自组装的硅烷膜上 .结果 :放射性分析证实玻璃基质表面共价固定DNA的优化密度为9 3× 10 - 2 μmol/m2 ,目标DNA杂交密度为 8.6× 10 - 2 μmol/m2 ,固定DNA的杂交率为 93% .结论 :采用两步竞争性反应的方法能够较容易地控制DNA在芯片上的固定密度 ,固定的DNA在芯片分布较均匀 ,因此制得的DNA芯片具有较高杂交效率和杂交密度 ,可方便地用于核酸杂交和探测研究     

寡核苷酸芯片制备及其杂交条件的优化

探讨了2种不同硅烷化试剂3-氨基丙基三甲氧基硅烷、三甲氧基丙基二乙烯基三胺及其不同处理时间对寡核苷酸探针固定效率的影响.结果表明3％的3-氨基丙基三甲氧基硅烷的95％丙酮溶液处理2h,然后用5％戊二醛溶液处理1 h,可以获得很好的杂交信号.对比polyT15空间子,含有相同寡核苷酸序列的PEG6、PEG12空间子能使杂交信号增强6、8倍.在以pH值9-11的碳酸盐缓冲液为点样液时,杂交信号随着pH值的逐渐升高而略有下降.寡核苷酸探针的浓度和荧光标记样品的浓度影响杂交结果,当寡核苷酸探针的浓度为25μmol、所用长度为110bp的荧光标记的PCR产物为2μL,经杂交液6×SSEPT稀释至10μL时,可以获得很好的杂交信号.     

一种适用于空间的管道式PCR装置的设计与实现

空间微生物原位检测系统需要满足微型化、自动化和易于集成的空间使用要求,而商用PCR仪不能满足这些需求。为此,本文设计并实现了一种无芯片的PCR微型装置,采用蠕动泵实现系统的自动进样,采用半导体制冷器实现快速精确温控,反应管道采用硅胶管,制作简单、生物相容性好、便于清洗,满足微型化、高可靠性、易于系统集成的空间需求。该装置采用的方法为将PCR仪集成到自动化的检测仪器提供了思路。     

一种适用于空间的管道式聚合酶链式反应装置的设计与实现

空间微生物原位检测系统需要满足微型化、自动化和易于集成的空间使用要求,而商用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)仪不能满足这些需求。设计并实现了一种无芯片的PCR微型装置,采用蠕动泵实现系统的自动进样,采用半导体制冷器实现快速精确温控,反应管道采用硅胶管,制作简单、生物相容性好、便于清洗,满足微型化、高可靠性、易于系统集成的空间需求。该装置采用的方法为将PCR仪集成到自动化的检测仪器提供了思路。     

电极表面核酸杂交动力学模型研究

杂交是核酸研究中一项最基本的实验技术。我们导出了核酸在石英晶体微天平电极上的杂交反应动力学模型。并对模型进行了验证。     

定量微板核酸杂交检测乙型肝炎患者血清中HBVDNA及其临床意义

采用定量微板核酸杂交技术检测448例肝病患者血清中HBVDNA含量.结果显示:其阳性率和病毒含量HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)组>HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组>抗-HBs(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)组(P<0.05,P<0.01).血清HBVDNA含量与黄疸程度及转氨酶的高低无关.血清HBVDNA含量高低,阳性率大小与临床型的严重程度呈一定的相关性,从而指导临床诊断和治疗.     

空间相位调制表面等离子体共振检测蛋白质芯片

蛋白质组学研究需要无标记高通量的检测技术.将空间相位调制与表面等离子体共振传感结合,使生物分子相互作用引起的反射光的相位变化转换成干涉条纹的移动,通过计算条纹的位移可得到相位的变化量,解析出相关的蛋白质相互作用信息.实验结果表明: 系统的相位分辨率为 0.2°, 可检测出质量分数为0.02%的食盐溶液,相当于3×10-5 RIU(refractive index unit)的折射率分辨率.适当增加传感芯片上金膜的厚度,可将折射率分辨率提高到2×10-6 RIU.兔IgG与羊抗兔IgG相互作用实验又进一步表明: 该系统具有实时阵列检测蛋白质相互作用的能力,进一步提高精度并完善后可成为蛋白质组学研究的重要工具.     

微流控芯片检测技术的研究进展

本文简单总结了光学检测法、电化学检测法和质谱检测法三种微流控芯片检测技术,并介绍了近几年微流控芯片检测技术的研究进展。     

应用Digoxigenin标记的cDNA探针检测香蕉束顶病毒

用非放射性的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ，标记克隆的ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂｃＤＮＡ，制备成探针．通过核酸斑点杂交对粗提取的ＢＢＴＶ，ＢＢＴＶ－ＤＮＡ，感染ＢＢＴＶ的香蕉植物的拟茎，球茎处的组织，新生叶片以及成熟后的叶片进行了检测．结果表明：ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１ｃＤＮＡ探针特异性强，不与ＣＭＶ—ＲＮＡ、无毒香蕉组培苗提取的核酸发生杂交反应；仅与粗提ＢＢＴＶ、ＢＢＴＶ－ＤＮＡ、ＢＢＴＶ侵染的香蕉组织的核酸提取物发生杂交反应．此探针灵敏度高，可检出含有ＢＢＴＶｃＤＮＡ－１０．５ｋｂ的质粒ＤＮＡ的最小量为１０ｐｇ；测定感病香蕉植株的拟茎汁液的最高稀释度可达１∶１２８，相当于０．４ｍｇ病蕉组织中的病毒含量．测定同一病株不同部位的结果表明，ＢＢＴＶ在植物体内的分布不均匀，拟茎处组织中病毒含量最高，球茎处的组织以及新生叶片中的病毒含量次之，成熟后的叶片中的病毒含量最低     

用长臂光敏生物素标记的cDNA探针核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒

用长臂光敏生物素标记含有马铃薯纺锤块茎类病毒（Ｐｏｔａｔｏｓｐｉｎｄｌｅｔｕｂｅｒｖｉｒｏｉｄ，ＰＳＴＶｄ）双拷贝ｃＤＮＡ的重组质粒ｐＳＴ－Ｂ１４，制备成光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针，用核酸斑点杂交检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片和块茎提取物均出现较强的阳性杂交信号，而健康马铃薯为阴性．试验结果表明：光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片汁液最高稀释度为１１２８     

电泳在核酸纳米探针中的研究进展

近年来,核酸纳米探针的应用日益广泛,核酸纳米探针的分离表征手段的研究也得到了迅速发展,其中发展最快、应用最多的是电泳法,该方法已成为研究核酸纳米探针表面电荷和表面形态表征的主要手段之一。文章主要介绍了凝胶电泳法分离核酸纳米探针的原理,以及表面电荷对电泳分离过程的影响,评述了电泳方法在核酸纳米探针表征中的应用,并对前景进行了展望。     

鱼用核酸疫苗研究进展

核酸疫苗是20世纪90年代初发展起来的一种新型疫苗。虽然目前核酸疫苗的研究还处于试验阶段,却体现出巨大的优越性和应用前景。就核酸疫苗的作用机理、鱼用核酸疫苗的构建、接种的方法和途径、免疫效果以及安全性问题的研究作了概括。     

键联于核酸的激发态水溶铜卟啉共振拉曼光谱研究

本文测量了键联于核酸的激发态水溶铜卟啉共振拉曼光谱.结果表明,位于1550cm~(-1)和1346cm~(-1)附近的两条谱带归属于受激铜卟啉拉曼带,其强度与核酸和铜卟啉的种类、核酸所含的(AT)_n结构和受激铜卟啉沟槽键联于核酸的能力有关.文中对插入DNA中GC位置上的基态铜卟啉在受激状态下能沟槽键联于—ATAT一位置这一现象作了定性的解释.     

核酸染料的应用研究进展

核酸染色是核酸研究的重要组成部分,溴化乙锭(EB)是核酸研究中常用的染料,因其自身存在的缺点,目前研究者正不断推出新的核酸染料,以期能找到可完全取代EB用于常规核酸染色的新型染料.本文对EB及近年新推出的一些新型核酸染料的特点进行了总结,并比较了它们的优缺点,为研究中选用何种染料进行核酸染色提供参考.     

仙客来(Cyclaman persicum,Mill)脱分化过程中核酸含量动态研究

研究了仙客来叶柄和球茎脱分化过程中核酸的动态变化。结果表明，培养后2d，DNA和RNA含量增加迅速，出现峰值，培养过程中RNA含量波动式上升，变化幅度大于DNA，RNA/DNA增加，DNA代谢相对较稳定；总核酸含量表现为稳中有升的趋势，叶柄和球茎的核酸代谢特征无明显差异。     

基于等价空间算法的飞控系统故障诊断

采用全局滤波法对操纵舵面损伤故障进行检测,等价空间法提取故障信息,以二元假设检验为判决准则,采用传感器数据融合方法进行预警、校验和隔离,作出故障诊断。仿真结果表明,该方法能大大提高故障诊断的速度和精度。     

细胞太空无源搭载装置中的微载体技术初步研究

探讨基于微载体技术的改良细胞单克隆化方法,及直接研究微载体上细胞形态、细胞增殖、核酸提取的方法。利用快速染色法直接观察微载体上的细胞形态,并用MTT法直接分析细胞增殖,用Trizol试剂和吸附柱直接从微载体提取细胞核酸。对微载体上的细胞可直接进行染色,观察正常细胞和凋亡细胞的形态。MTT分析显示细胞数和OD值呈直线关系。从微载体上直接提取的RNA完整性好,可用于RT-PCR分析,提取的DNA含量较高。改良细胞单克隆化方法操作简便,细胞活性好;不消化细胞,可以直接研究微载体上的细胞形态、细胞增殖,提取核酸。