根癌农杆菌介导的绿色荧光蛋白基因在水稻植株中的表达

将改良的绿色荧光蛋白（EGFP）基因插入到植物表达载体中,构建了ubi启动子驱动下的植物表达载体p13UEGFP．通过根癌农杆菌介导转化水稻的胚性愈伤组织,经潮霉素筛选,获得抗性愈伤组织和再生植株．对T2代植株进行PCR分析、激光共聚焦显微镜检测和RT—PCR分析,结果表明,绿色荧光蛋白基因已经在转基因植株中稳定表达．     

用基因枪法转化水稻获得转基因植株

从水稻成熟胚诱导的愈伤组织经继代培养后可以产生大量胚性愈伤组织．将分别含有苏云金杆菌δ－内毒素基因［ＣｒｙⅠＡ（ｂ）］、潮霉素磷酸转移酶基因（ｈｐｔ）的质粒混合包裹在金粉上轰击上述胚性愈伤组织．经过筛选和再生培养，得到９２个系的潮霉素抗性再生植株．点杂交结果表明９７．８％的抗性植株含有ｈｐｔ基因，７３．９％的植株同时含有ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因和ｈｐｔ基因．Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析进一步证实外源ＣｒｙⅠＡ（ｂ）基因已经整合到水稻基因组中．     

原球茎为转化受体的农杆菌介导石斛遗传转化

以携带双元载体pCAMBIA1305.1的农杆菌菌株EHA105转化石斛种子萌发形成的原球茎,通过GUS瞬时表达检测对受体状态、农杆菌活化条件、共培养时间等转化影响因子进行了优化;共培养4 d的原球茎接种到含有30 mg/L潮霉素(Hyg)和500 mg/L头孢噻肟钠的愈伤组织诱导与增殖培养基上以获得潮霉素抗性的愈伤组织,抗性愈伤组织在含Hyg 50 mg/L的再生培养基上再生植株,抗性株经GUS组织化学、PCR和PCR-southem blot检测证明为转化株。     

转抗虫融合基因(cry1Ac3-cpti)玉米(Zea mays L.)植株的获得及其抗虫性分析

将苏云金杆菌家族中的cry1Ac3基因与豇豆胰蛋白酶抑制剂基因（cpti)融合成融合基因，构建cry1Ac3-cpti融合基因植物表达载体，表达Bt-CpTI抗虫融合蛋白。用基因枪转化技术将cry1Ac3-cpti融合基因分别导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中，轰击后的愈伤组织经筛选剂3次筛选，获得可育的再生植株。经PCR及Southern blot分子检测，证实所获得的再生植株为转基因植株。抗虫性分析结果表明，部分转基因玉米植株对玉米螟衣较强的抗性。     

水稻磷转运蛋白基因OsPht1;6启动子表达载体转化系统的建立

通过PCR从粳稻（Oryza sativa L.cv.ssp.Japonica）的总DNA中扩增出一个磷转运蛋白基因（Phosphates transporter1;6;OsPht1;6,accession no AF536966）的启动子序列.以此为基础与二元表达载体PS1aG-3构建含Pht1;6启动子的植物表达载体,并通过根癌农杆菌介导转化了水稻武运粳7号品种.同时,对其愈伤组织高效再生体系和影响报告基因GUS瞬时表达的各种因素也做了比较研究.结果表明：①诱导水稻武运粳7号品种愈伤形成,3 mg/L 2,4-D的生长素浓度最适宜;②GUS基因高瞬时表达频率的条件为：工程菌液的浓度OD600值为0.7-0.8,浸染时间30 min,共培养时间3 d.利用这些再生转化条件,以EHA105为菌株转化浸染愈伤组织,获得了较高频率的Pht1;6启动子驱动的GUS基因瞬时表达.这些方法都有效地提高了抗性愈伤组织的形成率,该实验获得了转基因植株,经PCR检测,证实已将目的基因整合到水稻的基因组中.     

笋玉米原生质体培养及遗传转化的研究

以自花受粉的笋玉米幼胚为外植体建立了胚性细胞悬浮系,酶解游离原生质体通过液体浅层培养得到了再生植株;通过PEG法和电激法对原生质体进行了遗传转化,转化用外源基因是潮霉素抗性基因和BT基因,原生质体再生愈伤组织经潮霉素筛选后,PEG法和电激法获得抗性愈伤组织的频率分别为9 3%和8.9%,Southem-blotting证明外源基因已整合到玉米抗性愈伤组织细胞基因组中,转基因工程植株的分化工作在正在进行中.     

转基因水稻纯系对褐飞虱的抗性研究

利用基因枪法将含潮霉素抗性基因、ＧＵＳ报告基因和雪花莲凝集基因的２个质粒ｐＷＲＧ１５１５和ｐＲＳＳＧＡ１共同转化粳稻品种鄂宜１０５的成熟胚诱导的愈伤组织,从轰击的１５２块愈伤组织中共再生出２６株独立转基因植株,ＰＣＲ／Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹法分析发现,７３％的转基因植株含有所有３个外源基因,遗传分析证实外泊基因在转基因植株后代中以孟德尔方式遗传,从其Ｒ１代亲本为孟德尔３：１方式遗传的Ｒ２代中,鉴定出     

农杆菌介导的DREB1A基因转化多花黑麦草及其转化体系的优化

采用携带卡那霉素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pBI121／DREB1A的根癌农杆菌AGL1, 对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化,并优化了各种影响因素。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50mg／L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,待抗性愈伤组织在IB分化培养基上分化成苗后用25mg／L卡那霉素进一步筛选再生植株, 获得了部分抗性植株。抗性植株的总DNA用DREB1A基因的特异引物进行PCR检测,转化频率为2.14％,PCR-Southern blot进一步验证了转化植株基因组中含有该外源基因。各种影响转化效率因素的优化实验表明,当转化时菌液浓度的OD600为2.0、侵染时间为1h、共培养时间为2d、共培养温度为21℃及在共培养期间使用乙酰丁香酮等,均可明显提高转化频率。     

褐飞虱喂养试验显示表达GNA的转基因水稻纯系抗褐飞虱

利用基因枪法将含有3个不同基因（hpt,gus和gna）的质粒pWRG1515和pRSSGNA1共同转化粳稻品种鄂晚5号成熟胚诱导的愈伤组织。共再生出35株独立转基因植株。PCR／Southern印迹法分析发现,83％的转基因植株含有所有3个外源基因。Western印迹法分析发现79％的含gna基因的转基因植株以不同水平表达GNA。遗传分析证实外源基因在转基因植株后代中以孟德尔方式遗传。从其R1代亲本为孟德尔3：1方式遗传的R2代中,鉴定出2个含有所有3个外源基因的独立转基因植株纯系。这些纯系具有相似的外源基因表达量。褐飞虱喂养试验表明,这些纯系对褐飞虱具有显著的抑制作用。这些褐飞虱抗性提高的转基因纯系将应用于水稻抗虫育种中。实验证明,通过遗传转化和筛选可获得含在农业上有应用价值基因的转基因水稻纯系。     

转抗虫融合基因(cry1Ac3-cpti)玉米(Zeamays L.)植株的获得及其抗虫性分析

将苏云金杆菌家族中的cry1Ac3基因与豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)融合成融合基因，构建cry1Ac3-cpti融合基因植物表达载体，表达Bt-CpTI抗虫融合蛋白．用基因枪转化技术将cry1Ac3-cpti融合基因分别导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中，轰击后的愈伤组织经筛选剂3次筛选，获得可育的再生植株．经PCR及Southernblot分子检测，证实所获得的再生植株为转基因植株．抗虫性分析结果表明，部分转基因玉米植株对玉米螟虫有较强的抗性．将苏云金杆菌家族中的cry1Ac3基因与豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)融合成融合基因，构建cry1Ac3-cpti融合基因植物表达载体，表达Bt-CpTI抗虫融合蛋白．用基因枪转化技术将cry1Ac3-cpti融合基因分别导入玉米优良自交系E28及340的胚性愈伤组织中，轰击后的愈伤组织经筛选剂3次筛选，获得可育的再生植株．经PCR及Southernblot分子检测，证实所获得的再生植株为转基因植株．抗虫性分析结果表明，部分转基因玉米植株对玉米螟虫有较强的抗性．     

Transformation of the salt-tolerant gene of<Emphasis Type="Italic">Avicennia marina</Emphasis> into tobacco plants and cultivation of salt-tolerant lines

Salt-tolerant gene, CSRG1, which was isolated from a kind of salt-tolerant mangroves, Avicennia marina, constructed the transgenic plasmid, pGAM189/CSRG1. CSRG1, GUS, Kmr and Hyg^r could be transferred into tobacco genome by the ameliorated leaf discs method of agro-bacterium-mediate transformation. Thirteen stable resistant lines were obtained when fifty transgenic explants were selected through 50 mg/L hygromycin and 150 mg/L kanamycin. Assessments of PCR amplification, Southern blot analysis and GUS histochemical staining showed that CSRG1 has been integrated into the genome of the eleven transgenic lines (frequency of transformation was 22%). Northern bolt analysis revealed that CSRG1 had expressed in transgenic lines. The assessments of salt-tolerant ability and photosyn-thetic rates indicated that the survival rate of the transgenic lines is 80%—90% and the transgenic lines could increase by 30%—40% in plant height, even when they were cultivated in MS medium containing 2% NaCl and the total seawater (salinity 24). It is supposed that the special physiologic metabolic pathway formed by the products of CSRG1 can really endow the tobacco plants with the high salt-tolerant ability, not only to Na^ stress, but also to the comprehensive stress of various ions.     

Introduction of rice chitinase gene into wheat via low energy Ar+ beam implantation

A chitinase gene (RCH8) in plasmid vector pCAMBIA1308 was delivered into 3 wheat cultivars (Yangmai 158, Wan 9210, Wanmai 32) by low energy Ar⁺ beam-mediated method. Preliminary calli from treated mature embryos were first selected on hygromycin (Hm, 20 or 30 mg/L) containing medium. After the resistant calli formed, they were transferred to the regeneration medium with 10 or 20 mg/L Hm. All the three wheat varieties obtained transgenic plants. PCR and PCR-Southern assays showed that most plants regenerated from the resistant calli were positive transgenic plants. Southern blot of the positive green plants confirmed stable integration of alien DNA into wheat genome. The plant transformation frequencies varied with the variety and ion dose implanted. Wanmai 32 possessed the highest transformation frequency, reaching 3.8% at a suitable implantation dose. The transformation frequency of Yangmai 158 and Wan 9210 varied from 0.5% to 2.5% and from 0.5% to 1.4%, respectively. Progeny test for resistance to wheat scab showed that the leaf extract of R₁ generation inhibited the growth of wheat scab strain R₀ and F₁₅.     

沙枣微繁的初步研究

沙枣茎段在MS+NAA(0.2mg/L,单位下同)+ZEA(1)培养基上首先诱导形成愈伤组织,然后转接到MS+ZEA(0.2)+BA(2)培养基上经4次继代产生大量不定芽。沙枣的茎段也可以扦插在MS+BA(0.5)或MS+NAA(0.1)+BA(0.5)培养基上直接获得大量不定芽。以上两种途径获得的不定芽均可以在MS_0培养基上生根而培育成小苗,而通过后一种途径获得的不定芽具有很好的遗传稳定性。为进一步做遗传转化及耐盐筛选工作提供材料。     

高粱(Sorghum bicolor (L.) Moench)未成熟胚乳培养的研究

高粱未成熟胚乳在含有 BA或 2 .4-D与 KT组合的培养基上诱导启动 .诱导形成愈伤组织的适宜激素是 :2 .4-D4mg/L,BA1m g/L,NAA0 .2 mg/L 的组合或 2 .4-D2 mg/L,KT1m g/L 的组合 .适宜的分化激素组合是 (1)2 .4-D0 .5 mg/L,NAA0 .2 mg/L,BA0 .7mg/L,KT4mg/L;(2 ) NAA0 .5 mg/L,ZT1mg/L;(3 ) 2 .4-D0 .5 m g/L,KT1m g/L.脱分化后的胚乳细胞 ,部分细胞进入分裂期形成愈伤组织 ,胚乳愈伤组织有较强的分化能力 .植株形成方式为器官发生 .     

山苦菜无性系建立的研究

以山苦菜无芽嫩茎为外植体诱导愈伤组织,经过继代培养后,以生长状态良好的愈伤组织进行分化培养,继续进行分化苗的生根培养,建立起山苦菜的无性系.结果表明:MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.1mg/L)+蔗糖(30g/L)是愈伤组织诱导和继代培养的最佳培养基;愈伤组织分化的最佳培养基为1/2MS+蔗糖(15g/L);诱导不定芽生根的最佳培养基是1/4MS+IAA(0.2mg/L)+蔗糖(20g/L);山苦菜试管苗移栽的最佳基质为1/2园土+1/2河沙.     

莜麦组织培养及再生植株

以莜麦（Ａｖｅｎａｎｕｄａ）成熟种子为材料，研究了培养基成分对愈伤组织的诱导、分化和继代保持的影响。通过对ＭＳ为基本培养基附加２，４－Ｄ、６－ＢＡ、ＫＴ、ＺＴ等成分的各种培养基上诱导产生的愈伤组织观察比较，发现在２，４－Ｄ浓度为２ｍｇ／Ｌ时，诱导产生的愈伤组织量最多，随着２，４－Ｄ浓度降低，愈伤组织形成的量也减少；在２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ、ＫＴ０．２５ｍｇ／Ｌ的培养基中愈伤组织能分化出芽，产生大量苗，进而再生植株。实验结果表明，在继代培养基中加入一定量的ＡＢＡ和ＺＴ，能有效地促使褐化的愈伤组织恢复正常，使之保持良好的生长状态和分化能力。     

镉对匍匐翦股颖成熟胚愈伤组织诱导及再生的影响

研究了不同浓度的镉离子对匍匐翦股颖愈伤组织形成、生长和植株再生的影响. 结果表明: 当培养基中镉离子浓度在2.50 mg/L 以下时, 愈伤组织的诱导频率高于对照, 并在浓度为2.50 mg/L 时高达83.3%, 说明低浓度镉离子对匍匐翦股颖愈伤组织的形成可能具有刺激效应; 随着镉离子浓度的进一步增加,  愈伤组织的诱导频率明显下降, 并在浓度大于50.00 mg/L 时完全抑制了愈伤组织的形成; 在愈伤组织生长初期(0~30 d), 镉离子浓度为12.50 mg/L 时, 愈伤组织生长形态最大, 随着愈伤组织继续生长(30~45 d), 低浓度(2.50 mg/L)的镉离子对愈伤组织生长的刺激效应强于更高浓度. 在植株再生过程中, 当镉离子浓度为1.25 mg/L 时的效果最佳, 再生苗生长最好.     

植物激素对新疆雪莲愈伤组织诱导和分化的影响

研究了不同植物激素对新疆雪莲叶片愈伤组织诱导和分化的影响.结果表明:植物激素对新疆雪莲愈伤组织的诱导和分化影响显著,以MS为基本培养基附加浓度1.OO mg·L~(-1)的6-BA和2.OO mg·L~(-1)的NAA组合为最佳诱导培养基,诱导率达100%;以MS为基本培养基附加浓度1.00 mg·L~(-1)的6-BA和O.20 mg·L~(-1)的NAA组合为最值出芽培养基,出芽率达78%;以1/2MS为基本培养基附加浓度O.30 mg·L~(-1)的NAA和浓度O.03 mg·L~(-1)的KT为最佳生根培养基,生根率达54%.     

葶苈子植物愈伤组织诱导及植株再生的研究

对葶苈子植物 :葶苈 (Drabanemorosa)、印度菜 (Rorippaindica)及北美独行菜(Lepidiumvirginicum)愈伤组织的诱导、分化、再生苗的生根进行了研究。结果表明 :(1)在基本培养基为MS ,附加 6 -BA 0 .5mg/L +NAA0 .5mg/L的培养基上三种植物均能产生愈伤组织 ,其出愈率达 10 0 % ,而且 2 0 %的外植体具有一次成苗的能力 ;(2 )在愈伤组织的分化中 ,6 -BA1mg/L +NAA 1mg/L的激素组合是最佳的 ,其分化率为 10 0 % ;(3)无根苗生根的培养基为MS + 0 .5mg/LNAA ,生根率为 90 %