混合斑的DNA鉴定的几种方法研究

在法医物证学上,对于混合斑检材,通常采用Chelex法提取DNA后扩增再查看相关位点。在实际运用中,该法存在很大不足。为了提高鉴定成功率,作者对现有混合斑DNA鉴定的几种方法进行综合比较研究,现总结如下。     

M48磁珠法提取脱落细胞DNA的改良方法

目的:对M48磁珠法提取脱落细胞DNA进行改良。方法:在常规M48磁珠法基础上省略MW1试剂及一次酒精的洗涤步骤,同时利用磁力架快速倾倒溶液法及吸瓶加液法减少提取时间。结果:采用两种方法提取DNA,在STR检验成功数及图谱上没有明显差异,但用改良的M48磁珠法提取时间少于常规的M48磁珠法。结论:采用改良的M48磁珠法提取纯化DNA,可以缩短提取时间,并能保证提取质量。     

光滑载体上人体脱落细胞的DNA检验

目的：对运用EZ1磁珠法和QIAquick@Spin Columns硅膜法提取光滑载体上人体脱落细胞DNA的检验效果进行比较,为优化提取方法提供参考.方法：选取案件受理检材33例,应用二步棉签擦拭法收集各类光滑载体上的微量脱落细胞DNA,采用EZ1磁珠法和QIAquick@Spin Columns硅膜法提取纯化后,进行常规STR检测.结果：光滑载体上人体脱落细胞DNA材采用2种方法提取DNA,所得结果有较大差异;采用QIAquick@Spin Columns硅膜法提取的效果明显优于EZ1磁珠法.结论：相对而言,QIAquick@Spin Columns硅膜法更具优势.     

直接扩增法提取脱落细胞DNA

随着社会的发展,法医DNA检验的检材除了常见的血痕、精斑、唾液斑外,越来越呈现出微量化的趋势,比如盗窃案件中常常遗留的汗潜指纹、工具、手套等。这些现场的生物学检材,大多需要进行纯化提取,提取过程耗时、繁琐并伴有DNA模板的损失,特别对于微量检材,往往得不到STR分型。该文采用直接扩增法来检验,并同时采用M48核酸纯化试剂盒进行平行对比提取,结果表明直接扩增法对于微量检材的提取具有很好的效果。     

适于cDNA-AFLP的黑木相思组培苗总RNA快速提取方法的建立

针对黑木相思富含多酚、多糖等次生代谢物质的特点,以其组培苗为试材,采用改良CTAB裂解法、硼砂-SDS裂解法、改良异硫氰酸胍裂解法、CTAB-异硫氰酸胍裂解法、改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法等5种不同的提取方法提取其总RNA.结果发现:改良CTAB-异硫氰酸胍裂解法能有效地控制多酚、多糖、蛋白质以及DNA等对所提取总RNA的污染,所得总RNA质量高、完整性好.紫外分光光度检测,A260/A280比值为1.96～2.00,A260/A230比值1.98～2.20,总RNA得率为118.4～213.6μg.g-1,电泳检测,28SrRNA亮度约为18SrRNA的2倍,所提RNA质量可以满足dscDNA合成和cDNA-AFLP等后续分子操作要求.     

利用DNA数据库串并系列抢劫强奸案

利用DNA数据库对系列抢劫强奸案进行串并。对4起抢劫强奸案所送检材经常规两步消化法提取精子DNA,利用公安部二所研制的DNATyper15试剂盒复合扩增,310DNA测序仪检测,均得到了精子完整的DNA分型并输入DNA数据库。经比对认定这4起案件的精斑DNA中14个STR位点基因型均相同,非父排除率为0.9999997,确定嫌疑人为同一人。DNA数据库建设是侦查破案水平发展的一个重要方向和应用手段,建立和完善全国DNA数据库势在必行。     

非损伤性取样的蚕类DNA提取及检测

对家蚕和蓖麻蚕的蚕蜕和蛾翅分别采用SDS裂解法和动物组织基因组试剂盒提取法提取DNS，并与常规方法以蚕蛹提取的DNA一起进行RAPD扩增图谱比较、分析，结果表明用非损伤性方法提取的DNA的RAPD图谱和常规方法提取的DNA的RAPD图谱基本一致。     

摇蚊基因组DNA的提取方法研究

采用动物基因组DNA快速抽提试剂盒法、SDS法、CTAB法、NaCl法4种方法提取摇蚊基因组DNA.通过紫外分光光度计分别检测所得样品DNA在波长为260nm和280nm的吸光值,根据A260/A280的比值检测其纯度和浓度.采用PCR技术获得摇蚊COI基因,用琼脂糖凝胶电泳检测PCR-COI.综合分光光度法与电泳结果筛选出最适合提取摇蚊基因组DNA的方法.结果表明:SDS法所得样品DNA纯度最高,试剂盒法所得DNA浓度最大.同时综合比较DNA纯度与浓度分析得出:试剂盒法SK8222(改良)提取摇蚊基因组DNA为最佳方法,其次为SDS法或CTAB法(改良).     

岩陀DNA提取方法研究

以岩陀植物嫩叶为材料,用不同方法对岩陀叶片DNA进行提取,比较提取的质量差异,寻找适合岩陀叶片总DNA的提取方法,以满足多基原民族药岩陀DNA条形码识别系统构建的研究需要。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、改良的CTAB法、十二烷基硫酸钠(SDS)法及碱裂解法提取岩陀叶片总DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及PCR扩增效果检查DNA提取的质量。结果显示四种方法均能从岩陀植物叶片中提取到基因组DNA,改良CTAB法提取的DNA纯度和完整性明显好于其他方法,且采用此法进行PCR扩增获得的目标条带明亮单一,扩增效率达到100%。改良的CTAB法是岩陀叶片总DNA的提取中最为合适的提取方法,能够满足后续DNA条形码的研究需要。     

不同细胞裂解方法提取活性污泥总DNA研究

采用直接提取法对活性污泥总DNA进行提取,以化学机械法为基础,在细胞裂解步骤中,分别设计了化学法与超声法、高温法、反复冻融法、珠磨法及液氮研磨法相结合等方法,并通过DNA样品的浓度、纯度、提取率以及肠杆菌基因间重复共有序列扩增片段多态性等4个指标对活性污泥总DNA提取的不同细胞裂解方法进行比较,确定了反复冻融法为提取效率高、DNA纯度好且适用于PCR扩增的最佳DNA提取方法.     

柴胡与4种伪品的DNA指纹研究

目的建立中药柴胡及其常见伪品数字指纹,并用于柴胡鉴别研究.方法采用改良CTAB法、SDS法和改良SDS法提取柴胡及其伪品基因组DNA,随机引物PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分离PCR扩增产物,对琼脂糖凝胶电泳结果进行数字处理.结果改良SDS法提取DNA纯度优于SDS法和改良CTAB法;琼脂糖凝胶图谱转化成数字指纹.结论运用改良SDS法能够提取到纯度较高的基因组DNA,数字指纹更直观、易懂.     

微量苔藓样品DNA提取实验方案改良

苔藓植物个体微小，为得到一种适于苔藓微量样品使用的DNA提取方案，首先对前人提取植物DNA的方法进行了筛选；其次对所选择的3种适于提取苔藓样品DNA的方法——CTAB法、尿素法和磁珠法进行了改良；最后通过使用上述3种改良方法对牛角藓Cratoneuron filicinum植物样品总DNA进行提取，并比较了提取效果、提取时间和费用.结果显示：3种改良方法均可从2 mg干燥牛角藓材料中提取总DNA并得到阳性PCR结果.其中，改良磁珠法提取的DNA浓度较高，提取过程时间短，但成本高于其他2种方法.改良CTAB法提取的DNA浓度低于磁珠法，且实验耗时长，但DNA纯度较高，且实验成本仅为磁珠法的5%.PCR实验显示改良磁珠法与改良CTAB法的扩增成功率均为100%,而改良尿素法的扩增成功率仅为75%.认为改良磁珠法与改良CTAB法均可作为微量苔藓样品DNA提取的优选方案.     

樟脑类化学品的检验与研究

目的:检验检材中的樟脑类化学品成分,研究樟脑类化学品定性分析方法。方法:采用乙酸乙酯溶液分别提取检材奶粉和井水中的樟脑类化学品,建立GC/MS分析方法检验其樟脑类化学品成分。结果:检材奶粉中检出樟脑成分,检材井水中检出龙脑成分。结论:采用乙酸乙酯溶液能提取检材中的樟脑类化学品,建立的GC/MS分析方法可有效对樟脑类化学品进行定性分析。通过报道此类案件,提醒技术人员注意生活常用低毒化学品及临床药物等作为。     

铁路栅栏上接触性DNA检验方法的比较

目的 比较铁路栅栏上接触性DNA检验方法,为快速有效地处理此类生物物证提供借鉴。方法 选取铁路线路上常见的3种铁路栅栏,分别采用模拟攀爬接触、棉签擦拭法和脱落细胞粘取器采集栅栏表面接触性DNA,分别使用Chelex-100法和Chelex-100联合Microcon-100法提取和纯化DNA并进行STR分型,比较评价STR分型效果。结果 使用脱落细胞粘取器时的等位基因检出率较高(29.7%);Chelex-100法等位基因检出率(28.2%)优于Chelex-100联合Microcon-100法(20.4%),但却存在明显的DNA混合现象;喷漆金属网上接触性DNA的分型效果优于铁质金属网及钢筋混凝土防护栅栏。结论 选用脱落细胞粘取器提取铁路栅栏接触性DNA的可获得较好的分型效果;针对DNA混合现象明显的此类检材,Chelex-100联合Microcon-100法可作为Chelex-100法的重要补充。     

红碱淖遗鸥血液基因组DNA提取方法的比较研究

采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法.结果显示：酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获得率较低,并且难以去除杂质;酚-氯仿法提取时,酶解16 h比酶解10 h的DNA提取效果好,说明在一定时间范围内,延长酶解时间可有效地提高DNA提取效果.上述结果提示,酚-氯仿法对遗鸥冷冻血液基因组DNA提取的效果优于改良Miller盐析法.     

提取桑天牛成虫肠道微生物基因组DNA的2种方法比较

比较了改良CTAB法和改良SDS法两种提取桑天牛成虫肠道微生物基因组DNA的方法,结果表明:改良SDS法提取的DNA杂质较多,并且有部分降解;改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于后续试验研究.     

一种直接用于PCR分析的风沙土微生物总DNA提取方法

以风沙土为材料,直接提取土壤微生物DNA.采用SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融法裂解细胞得到DNA粗提液,以PEG对其纯化.结果表明,SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融法裂解细胞可获得大片段的DNA,提高DNA产率.每克干土的DNA提取量为0.586～1.311μg.所提DNA片段在23Kb以上.PEG可有助于去除DNA中腐植酸,DNA不作回收纯化即可作为模板进行16SrDNAPCR扩增.SDS—溶菌酶—CTAB—蛋白酶K和液氮反复冻融裂解细胞、PEG纯化DNA的方法组合是一种简便的适合风沙土微生物总DNA的提取方法.     

紫菜叶状体DNA的提取方法

为得到适合不同试验的高纯度紫菜DNA,对紫菜叶状体DNA的3种提取方法进行了分析比较.结果显示:酶解法提取的DNA样品质量最高,但要求样品量较多;改良的CTAB法提取的DNA样品多糖含量少,完全可以满足通常的遗传操作的需要,且需要样品量较少;常规的CTAB法提取效果最差.     

青檀基因组DNA提取方法的优化

以青檀(Pteroceltis tatarinowii Maxim.)的叶片为材料,采用改良高盐低pH值法、改良SDS法、改良CTAB法和试剂盒法4种不同方法提取其基因组DNA,并进行电泳分析、质量检测及ISSR引物扩增检测.结果表明,改良CTAB法优于其它方法,提取的DNA质量较好,纯度较高,能满足进一步的实验要求.     

华山松不同部位DNA提取方法比较研究

获得高质量的DNA通常是开展分子水平研究的关键一步.采用经典CTAB法、改良CTAB法、简易CTAB法、SDS微量法及Zigenhagen法对华山松的茎、叶及胚乳的DNA进行提取,并进行琼脂糖凝胶电泳检测、紫外分光光度计分析和标准差及标准误分析,结果表明:对于华山松针叶DNA提取,改良CTAB法提取DNA浓度适中,标准差和标准误最小,方法稳定性好;对于华山松茎段DNA提取,Zigenhagen法提取DNA浓度高,纯度好,标准差和标准误最小,方法的稳定性最好;对于华山松胚乳DNA提取,简易CTAB法提取的DNA浓度最高,纯度最好,标准差和标准误最小,方法的稳定性最好.这也说明对于同一植物的不同部位DNA的提取要采用不同的方法,需要在实践中加以摸索,获得最大的提取效果.