精子介导的报道基因在转基因泥鳅胚胎中的表达

以含ｌａｃＺ基因的质粒ｐＣＨ１１０为外源ＤＮＡ,采用外源ＤＮＡ和精子在保存液里混合保温处理,再进行精,卵的体外受精的方法,观测了精子介导的报道基因在转基因泥鳅胚胎中的表达,４次重复实验均获得了较稳定的实验结果。有９．６％的个体呈现了。ｌａｃＺ基因表达的阳性,对有关实验结果进行了分析和讨论。     

35S启动子组入蓝藻质粒载体pUC13－pbl

３５Ｓ启动子组入蓝藻质粒载体ｐＵＣ１３－ｐｂｌ楼士林，郭奕斌，吴巧娟（生物学系）近年来构建了一些含３５Ｓ启动子的质粒载体￣［１］，但未见含３５Ｓ启动子的蓝藻质粒载体．因此本研究拟把ＣａＭＶ的３５Ｓ启动子组入由孙立春等人构建的蓝藻质粒载体ｐＵＣ１３－ｐ...     

启动子对外源基因在转基因植物中表达的影响

将来自ｐＢＩ１２１质粒的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子片段插入到ｐＢＩ１２１的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子与ＧＵＳ基因之间，构建了串联的ＣａＭＶ３５Ｓ启动子载体ｐＬＢ３８．通过三亲交配，将ｐＢＩ１２１及ｐＬＢ３８分别转移到含ｐＧｖ３８５０的农杆菌中，成为适合本研究的双元载体。以叶圆盘转化法将外源基因转入烟草，获得了２种转基因植株。经ＤＮＡ分子杂交、ＮＰＴⅡ点分析、ＧＵＳ荧光定性及定量分析，证明外源基因已整合进烟草基因组并获得表达。ｐＬＢ３８的ＧＵＳ表达量为ｎＢｌ１２１的３～４倍，这表明启动子数目的不同会直接影响其启动基因的表达水平。     

克隆蓝藻Calothrix sp.PCC7601 cpcB2A2基因的初步研究

从蓝藻Ｃａｌｏｔｈｒｉｘｓｐ．ＰＣＣ７６０１染色体ＤＮＡ中分离出含藻蓝蛋白基因ｃｐｃＢ２Ａ２的略３．８ＫｂＤＮＡ片段，与质粒ｐＵＣ１８重组，构建成一种重组质粒，ｐＰＣ２１８－ＰＣＺ，转化Ｅ．ｃｏｄｉＪＭ１０９，获得了一系列克隆子，经斑点分子杂交和限制性内切核酸酶分析，筛选出了初步认为含有ｃｐｃＢ２Ａ２基因的克隆子。     

大肠杆菌基因启动子探针型载体的构建

利用ＰＣＲ技术将ｐＵＣ１８和ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中的多克隆位点区（ＭＣＳ）及旁侧序列分别进行扩增,然后将扩增产物插入到已除去ＬａｃＺα基因的ｐＵＣ１８中,获得三个中间载体ｐＳＵＧＶ１,ｐＳＧＶ２和ｐＳＵＧＶ３,最后将ｐＳＵＰＶ２中无表达活性的新霉素磷酸转移酶Ⅰ（ＮＰＴⅠ）基因分别插入到三个中间载体的ＭＣＳ中,构建成功大肠肝菌基因启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ４,ｐＳＵＰＶ５和ｐＳＵＰＶ６．     

丝状蓝藻与大肠杆菌之间杂合质粒的构建与克隆

丝状蓝藻ｐｌｅｃｔｏｎｅｍａｂｏｒｙａｎｕｍ的ｐＰｂ１经ＨｐａⅡ酶酶切与ＡｃｃⅠ酶酶切的ｐＵＣ１３构成杂合质粒，杂合质粒克隆到Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９、频率为３．４％．转化进Ｅ．ＣｏｌｉＪＭ１０９的杂合质粒，用ＥｃｏＲⅠ和ＨｐａⅠ酶切后得到证实．杂合质粒转化到新制备的Ｐ．ｂｏｒｙａｎｕｍ原生质球或丝状体后，再生的藻体表现出高于原来两倍以上的Ａｐ抗性．利用Ａｐ敏感的Ｅ．ｃｏｌｉ平板培养，证实了转化入藻体的质粒对Ａｐ具有高抗性．然而，获得的Ａｐ高抗株在后续培养中不能继代维持．     

小白菜苏云金牙孢杆菌CryIB基因的遗传转化

用限制ＳｐｈＩ和ＥｃｏＲＩ消化质粒ｐＢＹＴＥＳｐ１０１－１和ｐＢＱＸ,将ｐＢＱＸ上的经发行过的苏云金芽直菌杀虫晶体蛋白基因ＣｒｙＩＢ取代ｐＢＹＴＥＳｐ１０１－１上的ＧＵＳ基因,得到一个中间克隆ｐＢＩＷＩＱ－１。用限制酶ＨｉｎｄⅢ消化质粒ｐＢＩＷＩＱ－１,回收含ＣｒｙＩＢ基因的５．１ｋｂＤＮＡ乍段,插入质粒ｐＢＩＮ１９的Ｈｉｎｄ０２８３位点,构建成具卡那霉素抗性的植物表达载体ｐＢＩＷＩＱ－５．ＥＴ     

微弹射击将大麦黄矮病毒外壳蛋白基因转入小麦获可育植株

以小麦品种济南１７７、３８４、４７１的幼胚和济南１７７的胚性愈伤组织为材料，质粒为ｐＰＰＩ２［含大麦黄矮病毒外壳蛋白（ＣＰ）基因和ＧＵＳ（β－葡萄糖苷酸酶）基因］；ｐＰＰＩ５（含ＣＰ基因）＋ｐＥｍｕＧＮ（含ＧＵＳ基因），用高速基因枪轰击钨粉质粒进入幼胚和胚性愈伤组织细胞．ＧＵＳ基因的瞬间表达平均频率幼胚约为４２％，愈伤组织为１８．５％．转化处理后用ＰＣＲ扩增技术检测植株中ＣＰ基因是否存在并稳定遗传．检测结果表明，来源于幼胚的Ｔ０代转化频率为２～９％（１９９３～１９９４年），并获得Ｔ１、Ｔ２和Ｔ３代稳定表达的转化植株．用愈伤组织转化，其转化频率３月龄者为０．４％；２年龄者为零．潮霉素（Ｈｍ）用于对转化幼胚和愈伤组织的筛选，低浓度时不能抑制非转化细胞的生长，高浓度则使细胞受伤害，不能再生正常健壮的植株     

恶臭假单胞菌萘质粒ⅠNL基因的克隆及酶切图谱

恶臭假单胞菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕｔｉｄａＧ７）携带的质粒ＮＡＨ７，经限制性内切酶ＥｃｏＲＩ切割后，产生含有萘降解酶全部基因（２４，６ｋｂ）的片段，此片段插入到载体ｐＵＣ１１９的多克隆位点，构成了ｐＫＡＯ质粒，此质粒经ＨｐａＩ，ＥｃｏＲＩ酶切获得的５．１ｋｂ片段亚屯隆到ｐＵＣ１１９中，衍生出ｐＮＮ１质粒，绘制出内切酶图谱。从ｐＮＮＩ质粒上切下含目的基因ｎａｈＩ、ｎａｈＮ和ｎａｈＬ的ｋｐｎＩ－ｋｐｎＩ片段（２．３ｋｂ）．正向插入载体ＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ＋中获得重组质粒ｐＮＮ２，反向插入为ｐＮＮ３，将其转化到大肠杆菌ＸＬ１－Ｂｌｕｅ中，目的基因得以大量增殖。     

几种硫醚化合物的UPS及量子化学研究

本文报导了硫醚系列化合物ＤＭＳ（二甲基硫醚），ＤｐＣＰＳ（二对氯苯硫醚），ＤｐＴＳ（二对甲基苯硫醚）气相Ｈｅｌ紫外光电子能谱（ＵＰＳ）其中Ｄｐｃｐｓ，ＤｐＴＳ的ＵＰＳ谱为首次获得。对各体系利用ＭＮＤＯ方法进行了分子构型优化，对优化得到的优势构型实施了ＲＨＦ／６－３１Ｇ量子化学计算，并利用计算结果对各个分子体系的ＵＰＳ谱指认，计算结果分析显示；ａ）Ｓ原子的孤对电子在ＤｐＣＰＳ和ＤｐＴＳ中起到阴碍形成     

SL益生素对实验性高血脂症的防治效果

采用灌胃（ｉｇ）或腹腔注射（ｉｐ）胆固醇和蛋黄乳液法，使小鼠血清胆固醇（ＴＣ）含量明显升高，造成实验性高血脂症动物模型．对复制实验性高血脂症的或已成高血脂症造型的动物，用ＳＬ益生素（ＳＬＰ）１×１０９ＣＦＵ／只，连续给药７ｄ或３ｄ．结果表明ＳＬＰ既能显著抑制实验动物血清ＴＣ含量的升高（ｐ＜０．０２），使之基本维持正常水平，又能使高血脂症型动物的血清ＴＣ含量显著下降（ｐ＜０．０１）．结果表明ＳＬＰ对高血脂症型有治疗作用，对高血脂症的产生有预防作用．     

丝状蓝藻与大肠肝菌之间杂合质粒的构建与克隆

丝状蓝藻Ｐｌｅｃｔｏｎｅｍａ ｂｏｒｙａｎｕｍ的ｐＰｂ１经ＨｐａⅡ酶酶切与ＡｃｃＩ酶酶切的ｐＵＣ１３构成杂合质粒，杂合质粒克隆到Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９，频率为３．４％．转化进Ｅ．ＣｏｌｉＪＭ１０９的杂合粒，用ＥｃｏＲＩ和ＨｐａＩ酶切后得到证实。杂合质粒转化到新制备的Ｐ。ｂｏｒｙａｎｕｍ原生质球或丝状体后，再生的藻体表现高于原来两倍以上的ＡＰ抗性。利用ＡＰ每感的Ｅ．ｃｏｌｉ平板培养，证实了转化入藻体     

以精子载体法制备转基因小鼠的初步研究

将外源融合基因BaLA-HI与DOSPER脂质体等比较混合,加入获能精子悬液中,37度,5％CO2共培养0．5h,以这种处理精子作为转基因载体乾鼠的体外受精及胚胎移植,在获得的40只移植后代后,经PCR特异片段扩增和Southern杂交,共检测出2只呈相性的转基因小鼠,证明人胰 基因已在小鼠染色体上实现了整合,基因整合率为5％。     

卡介苗中具启动子活性片段克隆及分析

利用启动子探针型质粒ｐＫＫ２３２－８从卡介苗染色体ＤＡＮ的ＢａｍＨＩ酶切片段中克隆到４个具启动功能的ＤＮＡ片段,测定各重组子对氯霉素（Ｃｍ）的抗性,其中含３．３Ｋｂ外源片段的重组质粒ｐＢＣＧ２大肠杆菌转化子在ＬＭ培养基上对Ｃｍ抗性可达１７０×１０－６ｇ／ｍＬ,作了该片段的限制性酶切图谱．对ｐＢＣＧ２利用ＳａｌⅠ位点,亚克隆出４种部分重叠的具启动功能的ＤＮＡ片段,这４种重组质粒分别命名为ｐＢＣＧ２－１,ｐＢＣＧ２－２,ｐＢＣＧ２－６和ｐＢＣＧ２－８,并分析了其中插入片段的大小及其转化子对Ｃｍ的抗性．将ｐＢＣＧ２－２的ＳａｌⅠ外源片段插入到分枝杆菌启动子探针型穿梭质粒ｐＥＱ３,获得一个可在卡介苗中表达ｌａｃＺ基因的重组子ｐＥＢ２２．斑点杂交实验证明,具有启动功能的ＤＮＡ片段来源于卡介苗的染色体ＤＮＡ．结果表明克隆到一个对大肠杆菌和卡介苗均具启动子活性的ＤＮＡ片段     

SiC_p增强Al基复合材料浸润性的研究

利用半固态熔铸法制备ＳｉＣｐ／Ａｌ复合材料，探讨了在空气中将ＳｉＣｐ加入（纯Ａｌ＋添加剂）合金中时，ＳｉＣｐ的加入量、搅拌温度、浇注温度等因素对复合材料制备工艺的影响。结果表明，叶片在三层以上的搅拌器，以适当速度搅拌熔体时，可增加ＳｉＣｐ在熔体中的熔入量，且浸润性较好，分布均匀。     

人骨髓单核细胞表面分化抗原CD14基因的扩增、克隆和鉴定

根据人骨髓单核细胞表面分化抗原ＣＤ１４（ｈＣＤ１４）基因的核苷酸序列，设计ｈＣＤ１４基因５＇端和３＇端的两个引物．以人血中提取的基因组总ＤＮＡ为模板，利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术特异性扩增该基因１２４５加的编码序列．扩增产物经Ｘｂａｌ、ＫｐｎⅠ双酶切后，克隆到ｐＵＣ１８质粒ＸｂａＩ－ＫｐｎＩ位点间，随后转化大肠杆菌ＪＭ１０９．用ＰＣＲ方法筛选出重组菌落．经酶切和序列分析方法检测后，证明获得了含ｈＣＤ１４基因的重组克隆ｐＨＣＤ１４．巳测出的插入片段５＇端部分中包含着人ＣＤ１４基因４８８ｂｐ的序列，与巳报道的相应ＤＮＡ序列相比具有９９％的同源性．     

兔红细胞钠泵及大黄对其影响的研究

用８６Ｒｂ＋摄入红细胞方法研究了兔红细胞钠泵活性。分别制备了完整红细胞、制备了实验用大黄浸液，进行了保温时间、哇巴因浓度、红细胞体积，Ｒｂ２ＣＯ３浓度及８６Ｒｂ＋用量对兔红细胞钠泵活性影响的一系列实验，选择了最佳条件。测定了２７例兔活性为０．５４±０．０１ｍｍｏｌ／ＬＲＢＣ／ｈ。观察了体外大黄抑制兔红细胞钠泵活性的结果。毒毛ｋ可代替哇巴因，浓度为２．５μｇ／ｍＬ时抑制率达最大。研究提示，细胞产热的病理生理学变化可能与红细胞钠泵异常相关     

β—内酰胺酶基因在谷氨酸产生菌T6—13染色体上的…

以质粒ｐＵＣ１３编码的β－内酰胺酶基因为外源基因，通过随机连接谷氨酸产生菌Ｔ６－１３染色体ＤＮＡ片段后转化Ｔ６－１３原生质体，使其整合到染色体上，得以表达。在实验条件下，所测１９株转化子的抗性都有很高的稳定性，其中１０株能百分之百地保持抗性。经生物素标记的ｐＵＣ１３为探针的分子杂交实验证实抗性基因已整合到Ｔ６－１３菌染色体ＤＮＡ上。     

绵羊β-乳球蛋白基因调控序列的分离、克隆及序列分析

根据绵羊β－乳球蛋白基因调控区ＤＮＡ序列设计了两个引物，以绵羊基因组ＤＮＡ为模板，用ＰＣＲ技术扩增，得约９００ｈＰ的ＤＮＡ片段插入到ｐＵＣ１８质粒的ＸｂａＩ／ＫｐｎＩ位点之间．ＰＣＲ产物的克隆经双酶切、ＰＣＲ检测和序列分析证明是绵羊β－乳球蛋白基因的调控序列．序列分析结果表明该克隆片段与绵羊β－乳球蛋白基因相应ＤＮＡ序列相比有很高的一致性．研究结果为指导异源基因的表达和进一步利用乳腺特异表达的转基因动物生产医用蛋白提供了有效的调控序列．     

番茄氨基环丙羧酸合酶5′端的顺式调控元件分析

氨基环丙羧酸（ＡＣＣ）合酶基因的ＬＥ－ＡＣＣ２克隆具有成熟果实特异表达和乙类诱导表达的特点。完成了２．０ｋｂ区段的全序列测定，并用改进的ＤＮａｓｅⅠ法对该基因５′端２．０ｋｂ区段进行系列缺失。通过转基因植物和基因瞬间表达系统对ＡＣＣ合酶基因５′湍的结构和功能进行了分析。对含５种不同缺失自然的转基因番茄的果实、叶片、茎组织中的ＧＵＳ活性组织检测表明，５种片段均能特定地在成熟果实中激活下游基因的表达。