双孢蘑菇耐温差异蛋白质组学研究

利用蛋白质组学和荧光定量PCR方法,研究双孢蘑菇(Agaricus bisporus Lange (Imbach))02菌株在常温与高温胁迫下的蛋白质表达差异,发现了6个差异蛋白质点,经NCBI数据库比对分析,表明6个差异蛋白质分别为HSP70家族的HSS1热激蛋白、异柠檬酸裂解酶、细胞色素P450单氧化酶及3个未知蛋白质.这些蛋白质在双孢蘑菇受热胁迫下具有保护自身稳定的功能.     

利用ISSR分析野生蘑菇与双孢蘑菇的遗传多样性

摘要：利用Inter- Simple Sequence Repeat ,简单序列重复区间扩增(ISSR )分子标记对一批野生蘑菇进行分子鉴别，在选用的60 个ISSR 引物中，从中筛选出11 个引物，能对供试的14个菌株基因组DNA 进行扩增，获得的指纹图谱清晰稳定、多态性强。结果表明，在获得的116个条带中，74.1％是多态性条带,相似系数从0.32到0.72.用NTSYS 软件进行聚类分析，野生蘑菇与双孢蘑菇的相似系数有较低，最高的仅在0.7的水平上。研究结果表明，该批野生蘑菇有明显的遗传多样性，可以作为蘑菇杂交育种的资源。     

利用ISSR分析野生蘑菇与双孢蘑菇的遗传多样性

利用ISSR分子标记对一批野生蘑菇进行分子鉴别，从选用的60 个ISSR 引物中，筛选出11 个引物，对供试的14个菌株基因组DNA 进行扩增，获得的指纹图谱清晰稳定、多态性强.结果表明，在获得的116个条带中，74.1％是多态性条带,相似系数从0.32到0.72.用NTSYS 软件进行聚类分析，野生蘑菇与双孢蘑菇的相似系数较低，最高的仅在0.7的水平上.研究结果表明，该批野生蘑菇有明显的遗传多样性，可以作为蘑菇杂交育种的资源.     

双孢蘑菇疣孢霉的分离鉴定及其杀菌剂的筛选

从四川崇州双孢蘑菇疣孢霉受灾严重地区分离到一株致病菌,通过其纯培养特征、微观形态特征及回复感染验证确定该致病菌为疣孢霉(Mycogone sp.).经过初筛、复筛从21种杀菌剂中筛选出对该株疣孢霉生长抑制效果较好的6种,测定两两复配对疣孢霉和双孢蘑菇菌丝生长的影响.结果表明杀菌剂复配使用比单一杀菌剂效果更好,实验确定了两个较好的复配组合:果鲜灵(100000倍稀释) 甲醛(40000倍稀释),施宝功(100000倍稀释) 洁霉精(20000倍稀释).它们对疣孢霉的生长抑制率均达到了100%,而对双孢蘑菇菌丝的生长几乎没有影响.     

双孢蘑菇保鲜技术的研究

本文研究了在不同条件下贮藏双孢蘑菇dd、7d、10d、12d后,其色泽、氨基酸含量的变化,分析了这种变化对蘑菇鲜度、风味、褐变程度的影响关系,最后本文提出了适宜的贮藏条件——低温自发气调贮藏即MA贮藏(10℃、高密度聚乙烯薄膜包装),结果表明:在该条件下贮存7d、其氨基酸含量未见下降;贮存12d菇体仍无褐变和异味产生、其氨基酸总量仍占贮存前氨基酸总量的59.2％、起到了良好的保鲜作用。     

酒糟和马粪质量对栽培双孢蘑菇的影响

研究了用酒糟栽培双孢蘑菇的可行性，当酒糟单独堆制发酵或与稻草一起发酵后都不能得到符合质量要求的培养料，证明酒糟不适合用来栽培双孢蘑菇．然而用酒糟作为主要饲料的马粪(简称2型马粪)则是一种效果很好的栽培原料．栽培实验结果表明：由2型马粪和稻草组成的培养料中的粪草比例(干重比)与双孢蘑菇产量之间呈极显著的负相关性(r=-0．9714)，而由1型马粪(即以秸秆作为主要饲料的马粪)和稻草组成的培养料中的的粪草比例与双孢蘑菇产量之间则呈极显著的正相关性(r=0．9438)，通过测定培养料中的菌丝胞外漆酶活性，证明马粪质量对双孢蘑菇产量的影响作用主要是靠影响菌丝生长实现的。     

双孢蘑菇原生质体融合子的特性与分子鉴定

采用原生质体技术, 以双孢蘑菇主推品种As2796和浙农1号为亲本, 获得性状优异的融合子Z 3和Z 7, 二者均可在34 ℃生长良好, 菌丝纤维素酶活性和漆酶活力均比As2796高,酯酶同工酶谱显示与亲本差异明显, ITS序列证实二者与As2796同源性分别为997%, 993%.栽培试验得出新菌株Z 3和Z 7的产量分别比As2796高125% 和51%.从其经济性状的综合指标看, 可考虑进一步的区域试验与示范推广栽培.     

双孢蘑菇原生质体制备条件的优化

采用L16(45)正交分析方法,对双孢蘑菇原生质体制备工艺进行了优化.试验结果表明,最佳制备条件是取菌龄7 d的液体菌丝体,以2.5%溶壁酶 7%蜗牛酶为组合,0.6 mol/L NaCl作为渗透压稳定剂,在30℃条件下,酶解3 h,原生质体产率为2.34×108个/mL.本研究可为双孢蘑菇原生质体的融合及转基因研究提供理论依据.     

磁化水对双孢蘑菇的生物学效应

将双孢蘑菇 176、2 796、82 11菌株分别培养在用普通水配制的马铃薯培养基 (PDA)和用磁化水配制的马铃薯培养基 (MPDA)上 .结果表明 ,在MPDA上培养的 3个菌株其菌丝体的生长速度分别提高了 39.31%、16 .16 %和 2 5.2 6 % .176菌株通过MPDA培养后的核酸含量、总蛋白含量、可溶性蛋白含量比在PDA上培养的分别提高了 4 1.18%、2 1.92 %和 35.0 4 % ;2 796菌株分别提高了 2 6 .88%、33.91%和 4 1.50 % ;82 11菌株也分别提高了 33.33%、35.6 9%和 51.39% .通过酯酶同工酶 (EST)电泳分析表明 ,用MPDA培养对双孢蘑菇 3个菌株菌丝体的EST影响是不同的 .     

双孢蘑菇 96.4菌株及其单孢菌株在生长 ,结实和杂交方面的变异(英文)

研究了野生双孢蘑菇菌株 96 .4(Agaricusbisporus)和它的 2 0个单孢菌株的形态特征 ,生长发育 ,结实能力和杂交表现等方面 .研究表明 ,在菌株 96 .4和它的单孢菌株之间以及在 2 0个单孢菌株之间在子实体的形态和菌丝、孢子显微形态方面没有明显的差异 .但是在菌丝生长速度和子实体产量等方面都存在着明显的变异 .研究还表明在不同基因型的异核体菌株之间可能出现体细胞杂交 ,也许正是这种体细胞杂交的基因重组使得自然居群的遗传结构表现出明显的多态性 ,并保证了这一特殊物种的自然居群内的遗传多样性 .     

一株野生双孢蘑菇的驯化栽培研究

对采自太原市小店区的一株野生双孢蘑菇G1菌株进行了初步的驯化栽培.结果表明:在所选培养基范围内,G1菌株最适宜的母种培养基是马粪培养基,最适宜的原种培养基是小米培养基.G1菌株在马粪稻草栽培料和玉米秸秆牛粪栽培料上均可出菇,在玉米秸秆牛粪栽培料上其产量和生物学效率最高,分别为42.48克/袋和30.33％.     

工厂化双孢蘑菇不同降温刺激后的转录组分析

为了探究双孢蘑菇降温结实的分子机制,本实验以双孢蘑菇W192为对象,在催蕾期利用高通量RNA测序技术对通过4 d、6 d、8 d把环境温度由21.5℃匀速降到17.5℃处理后的菌丝体进行基因表达分析.分析结果6 d有1481个差异表达基因,较8 d和4 d分别高出6.9%和34%.GO(Go Ontology)功能聚类分析表明,差异基因在细胞组分和生物学过程中分布较多,其中6 d除了在代谢、细胞过程中差异基因占优外,在胁迫响应、子实体分化和发育过程等条目下的差异基因明显并基本为上调表达,而4 d和8 d并没有出现这类差异基因,同时,6 d的差异表达基因参与的细胞内进行各种氨基酸和糖代谢更明显.KEGG通路(pathway)功能富集分析表明差异表达基因主要富集在氨基酸和抗生素生物合成通路上,其中6 d在糖酵解和核糖体生物合成通路富集,而4 d和8 d未出现.4 d、6 d降温刺激容易高产,但4 d出菇早,密度高,分层不明显等导致菇型受到影响,6 d更加稳产保质.本研究揭示了在不同降温刺激下的菌丝体的表达模式,可用于指导工厂化双孢蘑菇催蕾期环境调控.     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.     

双孢蘑菇菇柄中多糖、核酸等成分的提取利用

废弃的双孢蘑菇菇柄富含多糖、核酸等活性物质,应获得更好的开发利用。本文就改进食用菌多糖的提取纯化工艺和简化核酸类物质的提取纯化工艺,采用膜分离技术,获得较高纯度的多糖产品、核酸产品进行了探索。     

微波辅助提取双孢蘑菇柄中多糖的工艺研究

为提高双孢蘑菇柄中多糖的提取得率,采用微波辅助法提取双孢蘑菇柄中多糖.分别对微波功率、微波处理时间、液料比、提取次数4个因素进行单因素实验和正交试验,并通过极差、方差分析,对提取过程中显著影响提取率的因素进行了统计分析.结果表明:微波辅助提取多糖的较佳工艺条件为微波强度60%、辐射时间6min、液料比1:12、提取次数4次,该工艺条件下提取多糖提取率为1.64%.     

不同护色剂对冻藏双孢蘑菇片防褐效果的研究

研究了单一和复合护色剂对冻藏双孢蘑菇片防褐效果及品质的影响,结果表明,经不同护色剂浸渍后的冻藏双孢蘑菇片多酚氧化酶活性由低到高顺序为：L-半胱氨酸、Na2S2O5＋柠檬酸、Na2S2O5、Na2S2O5＋L-半胱氨酸、柠檬酸、对照,过氧化物酶活性由低到高顺序为：L-半胱氨酸、Na2S2O5＋L-半胱氨酸、Na2S2O5＋柠檬酸、柠檬酸、Na2S2O5、对照,即0.15%L-半胱氨酸处理对冻藏双孢蘑菇片的防褐变效果最好;此外,经过L-半胱氨酸处理的双孢蘑菇片可溶性固形物流失量最低,细菌总数最少,且不引起亚硫酸盐残留.     

真空充氮热处理对鲜切双孢蘑菇贮藏中褐变的影响

为延缓鲜切双孢蘑菇褐变的发生,研究了不同真空度(0,-20,-40,-60,-80,-98kPa)下充氮热处理对鲜切双孢蘑菇贮藏中的色泽以及过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶和总酚含量的影响。结果表明,在实验范围内,真空充氮热处理可以减缓鲜切双孢蘑菇L*值(亮度)的下降速率,抑制其颜色向红色和黄色方向加重,减缓了鲜切双孢蘑菇褐变的发生;与对照组(0kPa)和其他真空度充氮热处理相比,在40℃、热处理5min时,-40kPa和-80kPa真空充氮可使鲜切双孢蘑菇过氧化物酶和多酚氧化酶活性保持在较低水平,而保持较高的苯丙氨酸解氨酶活性和总酚含量,进而延缓鲜切双孢蘑菇的衰老并提高其抗性。     

大理市用牛粪种“双孢蘑菇”牵住新农村建设的“牛鼻子”

大理市的乳畜业在州委、州政府的高度重视下，通过近五年的努力，截止2006年底已发展到奶牛2．9万头，涉及10个乡镇1．4万户农户，2006年产奶量86135吨，奶农收入12058万元．与奶牛养殖一起发展起来的乳制品企业欧亚完成工业产值9410万元，来思尔完成工业产值7300万元，乳畜业的产业化已初具规模。     

成孢延迟蛋白基因对枯草芽孢杆菌生物量和发酵酶活力的影响

探讨同种相噬对枯草芽孢杆菌内源酶发酵活力的影响.应用同源重组敲除的方法,构建了枯草芽孢杆菌168菌株的编码成孢延迟蛋白毒素前体的基因sdp C的knock-in突变株,比较了突变株和出发菌株的生物量、芽孢数和α-淀粉酶发酵活力.与出发菌株相比,突变株的生物量、芽孢数和α-淀粉酶发酵活力均显著提高,产酶高峰期酶活力提高23%.本研究结果显示,sdp基因突变不仅能够提高枯草芽孢杆菌的生物量,还能够提高其内源酶的发酵活力.     

青枯雷尔氏菌龙胆酸1,2-双加氧酶基因的克隆、表达和酶性质的研究

本研究克隆、表达了青枯雷尔氏菌GMI1000菌株中编码龙胆酸1,2-双加氧酶的基因, 并通过亲和层析对该酶进行了纯化, SDS-PAGE结果表明该酶亚基约为38kDa.该酶的最适反应温度和最适pH分别为30℃和7.5.该酶的Km为56μmol/L,pI为4.6～4.8.纯化后的龙胆酸1,2-双加氧高度不稳定:4℃下放置72h即失去85%的酶活. 甘油和β-巯基乙醇可稳定该酶酶活,在添加10%(体积比)甘油至酶液(50mmol/L, pH 7.3的磷酸盐缓冲液保存)后,-20℃保藏2周后均能检出明显的酶活.0.1～1mmol/L Fe2 可以激活或者稳定该酶的酶活.Na ,K ,Mg2 和Ca2 (分别为1～2mmol/L)对该酶的酶活无明显的影响.Mn2 ,Zn2 和Fe3 的添加量超过2mmol/L时,酶活急剧下降.1mmol/L的Cu2 即使该酶失去酶活.