免疫电镜及感染菜豆黄色花叶病毒的寄主叶片细胞超微结构的研究

本文详述了用免疫电镜法鉴定苜蓿病毒分离物M—4及不同时期感染该病毒的不同寄主叶片细胞超微结构的研究。免疫电镜测定结果证明分离物M—4是菜豆黄色花叶病毒(BYMV)。该病毒可侵染苋色藜、三叶草,菜叶、蚕豆等寄主。这些寄主的超微结构特征。1、细胞内有风轮状、带状和环状三种形式的内含体。2、不同寄主细胞中三种内含体的数量不同。3、病毒粒子较少,分布在液泡膜附近。4、接种不同时期寄主叶片细胞中叶绿体及内含体数量有所变化,接种第30天时内含体数量最多,并能看到一些细胞质束丝。     

核酸分子杂交检测黄瓜花叶病毒

为检测黄瓜花叶病毒的存在,应用Northernblot,将提取的黄瓜花叶病毒RNA样品,经甲醛变性凝胶电泳分离,使RNA解离成单链,然后用上行毛细管转移法,将凝胶上的单链RNA片段转移到尼龙膜上.经适当洗涤、干燥后,在烤箱中80℃保温2h,用于杂交.以带有黄瓜花叶病毒目的片段的细菌质粒制备DNA探针,用放射性同位素32P标记探针DNA,100℃变性处理用于杂交的探针,然后进行杂交.结果表明,在杂交膜上显示与特异性探针结合的阳性RNA条带,检测到了黄瓜花叶病毒的存在.     

玉米矮花叶病毒原的生物学鉴定

对我国西北的玉米矮花叶病毒Ｂ株系（ｍａｉｚｅ ｄｗａｒｆ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ－Ｂ,ＭＤＭＶ－Ｂ）进行了系统的鉴定。ＭＤＭＶ－Ｂ侵染玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓ）、高粱（Ｓｏｒｇｈｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ）和狗尾草（Ｓｅｔａｒｉａ ｖｉｒｉｄｉｓ）等禾 本科杂草,但不侵染普通烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）、心叶烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｇｌｕｔｉｎｏｓ）、苋色藜（Ｃｈｅｎｏｐｏｄｉｕｍ ａｍａｒ     

烟草花叶病毒快速检测方法的建立及应用

应用单克隆抗体技术获得抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)单克隆抗体,并通过胶体金标记技术,免疫层析快速检测技术和SQUID磁学定量测定技术建立起烟草花叶病毒的快速检测方法,并开发出用于定性检测的TMV胶体金快速检测试纸及用于定量检测的TMV纳米磁珠快速检测试纸,其检测灵敏度分别为1 ng/mL和0.1 ng/mL.所建立的方法操作简单,快速,灵敏度高,特异性好,是作为烟草育苗中各种TMV无症和有症烟株现场筛查的有效手段.     

磷的有效性对菜豆生理生态特征的影响

研究了生长在３种不同磷水平下６种不同基因型菜豆的多项生理生态指标．结果表明：①Ｐ水平显著影响菜豆的光合、蒸腾、气孔导度、叶磷浓度、光能和水分利用率、磷利用率及生物量等;②在同一磷水平下,不同基因型菜豆的光合、气孔导度、光能和水分利用率显著不同;③在各基因型中,Ｇ２４２４的耐低磷性最强     

菜豆鲜荚中菜豆凝集素的提取与分离纯化工艺研究

以Bean Saint esprit a oeil rouge菜豆鲜荚为试验材料,优化了菜豆凝集素的提取和分离纯化工艺,研究了提取剂、料液比、p H值和提取时间对菜豆凝集素活性的影响,建立了硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析的组合方法用于分离纯化菜豆凝集素。研究结果表明:以磷酸盐缓冲溶液为提取剂,料液比1∶25,p H值6~8,浸提时间8 h,菜豆植物凝集素的提取效果适宜。菜豆凝集素浸提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-52阴离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析,冷冻干燥后可获得纯度较高的菜豆凝集素。纯化的样品经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测为单一条带,血凝法检测有血凝活性。     

121份菜豆品种资源的植物凝集素含量分析

菜豆鲜荚中含有多种抗营养因子,其中菜豆凝集素为最主要的毒性因子,摄入不当会导致食物中毒。以121个菜豆品种商品荚为试验材料,测定其植物凝集素含量,分析评价其遗传变异,扩大极低和极高菜豆凝集素水平的筛查范围。结果表明:121个菜豆品种的凝集素含量水平差异极显著(P<0.01),变异系数为98.34%。121个菜豆品种植物凝集素含量变幅为0.005~1.330 mg/g,均值为0.412 mg/g,品种频率分布曲线主峰明显,呈近似正态分布,但是两尾偏长,说明有极低和极高菜豆凝集素含量的品种分布。筛选出低菜豆植物凝集素的品种3份,为低毒菜豆遗传改良和合理利用提供技术支持。     

芋花叶病毒检测试剂盒的研制

用IPTG诱导融合表达芋花叶病毒(Dasheen mosaic virus,DMV)CP基因的菌株,通过12%SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE二次制备电泳获得纯化的CP免疫家兔,获得经过Western blot分析为特异的抗CP血清.硫酸铵沉淀初步提取IgG,然后用Protein A-Red Sepharose亲和层析进一步纯化IgG,IgG与甘油1∶1混合获得效价1∶3 100的一抗,将一抗、羊抗兔二抗和4-硝基苯基磷酸二钠组成DMV检测试剂盒.用研制的检测试剂盒对芋、魔芋和马蹄莲叶片样品的间接ELISA检测表明,DMV在田间普遍发生,并确定研制的试剂盒完全可用于DMV检测.     

白草花叶病毒原的生物学鉴定

从甘肃省农业科学院植物研究所（甘谷）培养的表现花叶症状的白草上分离出一种线状病毒,经鉴别寄主,蚜传,酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,免疫电镜（ＩＳＥＭ）和组织病理学等方面的研究,初步认为此分离物是高粱花叶病毒ＳＣＨ株系。     

烟草花叶病毒单克隆抗体的制备和鉴定

经工程菌表达与纯化,得到了纯度95%以上的TMV-CP-F重组蛋白,配合提取的TMV天然病毒颗粒作为免疫原.通过杂交瘤技术获得了14株能分泌特异针对TMV外壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株.经鉴定14株细胞所分泌的抗体亚类为IgG1型,抗体轻链均为κ型.经ProteinA一步法亲和层析纯化所得抗体经鉴定相对分子质量在149.36～157.23 ku之间,抗体纯度在80%以上.经间接ELISA测定,14株抗体均与TMV-CP重组蛋白和TMV病毒有良好特异性反应.所制备的抗TMV抗体的特异性高,可用于与其相关的免疫检测研究和应用.     

Coat protein gene and 3′ non-coding region of tobacco mosaic virus and tomato mosaic virus are associated with viral pathogenesis in Nicotiana tabacum

The camellia isolate of tomato mosaic virus (ToMV-TL) can induce local necrotic lesions on the inoculated leaves in Nicotiana tabacum, whereas the broad bean isolate of tobacco mosaic virus (TMV-B) produces the mosaic symptom on systemic leaves. To examine viral determinant for differential infection phenotype in N. tabacum, the coat protein gene and the 3′ non-coding region of TMV was replaced with that of ToMV, the chimeric virus induced similar local necrotic lesions to that induced by ToMV. The results indicate that the coat protein gene and the 3′ non-coding region of TMV and ToMV influence the virus-induced pathogenesis in N. tabacum.     

竹花叶病毒的研究进展及其作为表达载体的应用

竹花叶病毒（ bamboo mosaic virus，BaMV）是马铃薯X病毒属（ Potexvirus）的重要成员之一，距今为止在竹子上被报道过的唯一一种病毒，可造成竹叶片花叶，竹笋和竹杆内部呈褐色条纹病变等症状，严重影响竹材的经济价值，尤其对中国台湾的竹类栽培区造成了严重的经济损失。目前，对该病毒及其卫星核酸的基因结构和功能已经有了很深入的研究，并且在与寄主植物互作和作为表达载体的应用上有很大的突破。本文围绕BaMV的研究进展以及在中国大陆的可能性应用前景做出综合性的阐述。     

用二种ELISA法进行烟草花叶病快速诊断试剂盒的研究

以改良的间接ELISA和Dot-ELISA为基础,研制了烟草花叶病毒（TMV）快速诊断试剂盒,其中抗体最佳工作浓度为1：5000,通过模拟田间试验条件进行检测,并与电子显微技术相互印证,经过对云南省峨山,江川等县样品的测定,结果表明试剂盒具有敏感,特异,快捷3个特点,准确率分别为100％（间接ELISA）和98．7％（Dot-ELISA)。     

Molecular markers linked to Rsa resistant to soybean mosaic virus

Soybean mosaic virus (SMV) is a severe disease in worldwide soybean production. A cross was made between Kefeng No. 1 with broad spectrum resistance to SMV and Nannong 1138–2, a susceptible cultivar. The inheritance of resistance to SMV strain Sa prevailing in southern China was analyzed. Results of x² test from inoculation experiment on parents F1, F2 and F3 lines showed that the resistance to strain Sa was controlled by a single dominant gene Rsa. BSA method was adopted and 900 random 10-mer primers were used to amplify total DNA from resistant pool and susceptible pool in order to obtain polymorphic bands in two bulks. 16 primers could generate polymorphic bands, of which OPW-05 and OPAS-06 could generate the most stable RAPD patterns. RAPD markers OPW-05₆₆₀ and OPAS-06₁₈₀₀ were found to be linked to Rsa. Their order and genetic distance were OPAS-06₁₈₀₀22.2cM Rsa10.1 cM OPW-05₆₆₀. Southern blotting showed that both OPAS-06₁₈₀₀ and 0PW-05₆₆₀ were low copy DNA in genomic DNA. 0PW-05₆₆₀ has been converted into an RFLP marker successfully. Additionally, pK644H, an RFLP marker, has been identified to be linked to 0PW-05₆₆₀, and their genetic distance was 37.4 cM.     

禽流感病毒H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,研究建立H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H5亚型禽流感病毒.优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.同时使用该方法对野外样品进行检测.结果表明:该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒.     

禽流感病毒H9亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法的研究

 采用禽流感病毒多克隆抗体及H9亚型特异性单克隆抗体,研究建立H9亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法,用于检测H9亚型禽流感病毒.优化了反应条件,确定了包被抗体、检测抗体及酶结合物的最佳工作浓度,对该方法的敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与RT-PCR方法比较.通过使用该方法对野外样品进行检测.结果表明该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H9亚型禽流感病毒.