人尿胰蛋白酶抑制剂的分离纯化

人尿经吸附剂处理，硫酸铵沉淀后，得到胰蛋白酶抑制剂粗品。粗品经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０层析及ｔｒｙｐｓｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析，得到两种ＨＵＴＩ：ＨＵＴＩ１与ＨＵＴＩ２。ＨＵＴＩ１的比活为３５５６ｕｎｉｔｓ／ｍｇ，活性回收率为３５％，含分子量６７０００与２５０００两种组粉；ＨＵＴＩ２的比活为３３８５ｕｎｉｓ／ｍｓ，活性回收率为３１％，分子量为６７０００。经二步层析纯化，纯化因子达     

采用染料亲和层析的方法纯化卵泡刺激素

采用染料亲和层析、QAE离子交换层析等纯化步骤，从绝经期妇女尿促性腺激素(HMG)粗品中分离纯化获得高纯度卵泡刺激素(FSH)产品，其中FSH的生物活性达到268.1IU／mg，卵泡刺激素与黄体生长素(LH)的活性比值达到259，产品超过欧洲药典对高纯度卵泡刺激素的要求。此工艺FSH的活性回收率高达65％，而且分离纯化步骤少，简单易行，适合于大规模生产。     

重组绿豆胰蛋白酶抑制剂片段对肠癌细胞SW480迁移的影响

探讨重组胰蛋白酶抑制剂活性片段(LysGP33)的抗肠癌效应.大肠杆菌原核表达LysGP33活性片段,GST亲和层析柱对表达蛋白进行纯化.MTT比色和细胞划痕方法检测LysGP33活性片段对SW480细胞增殖和迁移的影响.结果表明:10 μmol/L LysGP33活性片段对SW480细胞的增殖活性无明显影响,但能够有效地抑制SW480细胞的迁移,并呈现时间依赖效应.绿豆胰蛋白酶抑制剂抑制了肠癌细胞的迁移,在抗肿瘤浸润和转移中具有一定的应用前景.     

酵母培养液中胰蛋白酶初探

利用鸡卵黏蛋白对于胰蛋白酶有天然抑制性的特点,从鸡蛋清中分离纯化了鸡卵黏蛋白,将其偶联至Sepharose 4B制作成亲和层析介质,用于从不同种类酵母,处于不同时间段的培养液中,分离纯化得到了具有胰蛋白酶活性的物质。由此初步证明了酵母培养液中确有可能存在胰蛋白酶。因此,利用酵母工程菌生产蛋白质的时候,若加入一定量的胰蛋白酶抑制剂,有可能提高目的蛋白的产率。     

菜豆豆荚发育过程中抗营养因子的动态变化

凝集素、皂苷、植酸和胰蛋白酶抑制剂是菜豆中主要的抗营养因子。以矮生和蔓生两种生长习性的菜豆豆荚为材料,测定了其6个发育时期抗营养因子的变化规律。结果表明:两个品种的豆荚发育期,植物凝集素含量及胰蛋白酶抑制剂活性均呈上升趋势,在21~28 d达到峰值。矮生及蔓生菜豆凝集素含量分别从0.35 mg/g和0.36 mg/g上升到0.92 mg/g和0.54 mg/g,胰蛋白酶抑制剂活性分别从0.18 TIU/g和0.50 TIU/g上升到5.02 TIU/g和4.68 TIU/g;而皂苷和植酸含量均呈下降趋势,矮生和蔓生菜豆皂苷含量分别从55.21 mg/g和43.33 mg/g下降到18.90 mg/g和11.79 mg/g;植酸含量分别从15.07 mg/g和14.57 mg/g下降到14.33 mg/g和12.19 mg/g。综合形态发育及抗营养因子的变化规律发现,花后14~21 d豆荚趋于成熟,抗营养因子含量较低,食用较佳;花后28 d籽粒发育饱满,抗营养因子含量较高,食用此时期豆荚及籽粒时应充分烹饪,降低抗营养因子的影响,提高营养价值。     

重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂的性质及抑制机理

利用大肠杆菌表达系统,成功表达并纯化获得了重组Bowman-Birk型大豆胰蛋白酶抑制剂(rBBTI).对比研究了天然Bowman-Birk型胰蛋白酶抑制剂(BBTI)和rBBTI的酶学性质和稳定性,以及分别抑制胰蛋白酶和糜蛋白酶的抑制动力学.结果表明:rBBTI和BBTI都有较好的热稳定性,pH对rBBTI的活性影响...     

地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶分离纯化研究

对产白地表茅孢杆菌(B.licheniformis)的碱性蛋白酶通过乙醇沉淀、盐析、DEAE阴离子交换层析,凝胶层析4步纯化.以酶比活力为指标,对碱性蛋白酶分离纯化条件进行了优化.结果发现:提纯酶的比活力达62098U/mg,纯化倍数为23.7,活性回收率为15.7%.     

重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的制备及活性鉴定

刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性,因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析.利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因,然后用NdeI/SacI酶切并插入载体pET25b ( )中构建重组表达质粒pET25b ( )/ETI .重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导使重组ETI(rETI)过量表达形成包涵体.包涵体经过洗涤、复性及CM离子交换柱纯化,每升培养液可获得14 mgrETI ,其纯度超过92 %.活性测定表明,rETI对凝血酶及尿激酶的活性没有抑制作用,但能显著抑制胰蛋白酶、瑞替普酶及纤溶酶的活性,抑制常数Ki分别为5 .14×10-9,9 .4×10-8和2 .08×10-8mol/L.     

重组大豆KUNITZ型胰蛋白酶抑制剂Tid的大肠杆菌表达及抑制活性研究

利用大肠杆菌高效表达系统表达大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂(SBTi—A2)Ti^d,并利用亲和层析的方法纯化得到有抑制胰蛋白酶活性的SBTi^d．对重组SBTi^d的pH稳定性和温度稳定性与天然SBTi^d进行了比较研究.结果表明重组SBTi^d在高pH下具有更好的稳定性,预示了SBTi^d作为生物农药或利用转基因方法提高作物抗虫性的应用前景．     

苦荞胰蛋白酶抑制剂提取方法的研究

分别用磷酸缓冲液、０．２ｍｏｌ／Ｌ硫酸、０．４ｍｏｌ／Ｌ三氯乙酸以及水提法从苦荞种子中提取胰蛋白酶抑制剂,对四种提取方法所得产物的抑制活性及柱层析纯化结果比较表明：以磷酸缓冲溶液为提取介质,经热变性、盐析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析分离后苦荞胰蛋白酶抑制剂的活性和得率较高,是较为理想的提取方法。     

重组人促红细胞生成素的基本特性研究

重组EPO细胞灌注法培养的收获液,用Q SepharoseXL,C4反相疏水和Superdex75层析柱纯化表达的EPO.经SDS PAGE、PAGE和HPLC分析纯度达98%以上,总回收率为17%.经SDS PAGE分析其表观分子量为32～40kD.用IEF方法测得pI为3.75～4.15.网织红细胞计数法测得体内比活大于1.5×105IU,用ELISA测得体外活性为1.5×106～1.6×106IU.纯化的EPO的氨基酸组成和其它一些性质也进行了研究.     

胰蛋白酶抑制剂的药用功能

胰蛋白酶抑制剂是具有抑制胰蛋白酶作用的一类物质.该类物质的来源不同,其活性和作用的酶也不同.基于对近几年国内外相关文献的分析,综述了其多种临床应用功能,说明胰蛋白酶抑制剂是人类重要的药物资源.     

鲁米诺-H2O2体系流动注射-化学发光增强法测定胰蛋白酶

在碱性条件下,胰蛋白酶对鲁米诺-过氧化氢体系的化学发光体系具有显著的增强作用,据此建立了流动注射-化学发光增强法测定胰蛋白酶的新方法.该法简单、快速、线性范围宽,在优化的实验条件下,测定胰蛋白酶在1.0～50.0mgL/的浓度范围内相对发光强度与其浓度呈良好的线性关系,检出限可达0.26mg/L,对浓度为10.0mg/L的胰蛋白酶进行平行测定其相对标准偏差(RSD)为0.7%(n=11),成功地用于合成样品中胰蛋白酶的测定,回收率在90.1%～104.1%,结果令人满意。     

章鱼内脏胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

通过热处理、硫酸铵盐析、膜超滤及SP-Sepharose 离子交换层析,从章鱼内脏中纯化得到一种胰蛋白酶抑制剂 (Octopus Trypsin Inhibitor ,OTI)．Tricine-SDS-PAGE 电泳结果显示,OTI的分子质量约为6500 u．性质分析结果表明:OTI在pH=1.0~11.0缓冲液中孵育30 min,抑制活性稳定;在100 ℃下加热1 h、2 h 后仍分别具有90% 和65% 的抑制活性,具有良好的pH值稳定性和热稳定性;OTI能够显著抑制胰蛋白酶的活性,对胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶几乎无抑制活性;OTI能够有效抑制蓝圆鲹肌肉中肌原纤维结合型丝氨酸蛋白酶 (MBSP) 引起的肌球蛋白降解．     

萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

本研究从萨尔瓦多型银合欢(Leucaena leucocephala cv.Salvador)种子中分离纯化出一种新的胰蛋白酶抑制剂,即萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白抑制剂(Trypsin Inhibitor from Leucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).成熟的种子经粉碎,生理盐水浸提之后,经CM-Sepharose阳离子交换层析得到LlsTI纯品.该胰蛋白抑制剂为19.8kDa的单体蛋白.其N末端测序结果为KGSYLRDVRG,而其内部则含有一段KTAPLVVGFLK的序列,与已知的蛋白酶抑制剂序列都不同,表明LlsTI为一种新的胰蛋白酶抑制剂,同时也含有一部分与已知Kunitz型抑制剂相保守的碱基.LlsTI对胰蛋白酶的摩尔抑制比近似为1∶1.其对于胰蛋白酶属竞争性抑制剂,其Ki值为2.77×10-10 M.LlsTI对胰蛋白酶的抑制活力表现出对高温和pH变化较高的耐受性.但其活性受100mM DTT影响.本研究对LlsTI对其它丝氨酸类蛋白酶的抑制作用也做了测定,其中只有胰蛋白酶的活性受到了抑制.根据圆二色谱的分析结果,LlsTI是一种αβ蛋白,其二级结构在室温下的水和缓冲液Tris-HCl(pH7.5)中组成相似.     

苦瓜籽中一种抗胰蛋白肽的分离及抗真菌作用观察

利用凝胶过滤层析Sephadex G-75、强阳离子交换色谱SP-650M,从苦瓜籽中分离纯化出一种活性多肽.该多肽在Tricine-SDS-PAGE上显示为单一的谱带,分子量约为6.8 kDa.在经还原剂二硫苏糖醇(DTT)处理后的电泳结果表明该多肽不含有分子间的二硫键.此多肽是一种胰蛋白酶抑制剂,同时具有抗植物致病菌活性,是一种具有双功能作用的多肽.     

大豆（G．max）胰蛋白酶抑制剂SBTi－A_2新类型Ti~x的纯化及其性质研究

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆（Ｇ．ｍａｘ）中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉａ的相对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为ＡｓＰ；亲和电泳分析显示Ｔｉｘ与Ｔｉａ均可与胰蛋白酶完全结合；ＢＡＥＥ法测定显示出Ｔｉｘ对胰蛋白酶活性的抑制略小于Ｔｉａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉｘ比Ｔｉａ多了两个碱性氨基酸，因而Ｔｉｘ带有更多的正电荷．研究结果初步证明Ｔｉｘ是Ｋｕｎｉｔｚ类型中一种新的胰蛋白酶抑制剂．     

分离回收废旧锂离子电池电极材料的浮选实验研究

采用柴油作捕收剂、甲基异丁基甲醇(MIBC)作起泡剂对锂离子电池电极材料进行浮选实验研究,考察捕收剂用量、起泡剂用量、分散剂和抑制剂种类及用量对正极材料钴酸锂回收率的影响。研究结果表明:当矿浆质量浓度为0.05 g/mL,pH为6.0时,以0.15 mg柴油为捕收剂,0.75 mg六偏磷酸钠为分散剂,0.75 mg聚丙烯酸钠作抑制剂,0.84 mg MIBC为起泡剂,正极材料钴酸锂的回收率达93%。     

中国野生大豆胰蛋白酶抑制剂的初步研究

采用分离提取,电泳回收,ＰＡＧＥ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,亲和电泳和抑制活性测定等方法,对我国一年生和多年生野生大豆种子蛋白中的胰蛋白酶抑制剂进行了初步研究。在４５°Ｎ来源一的上生野生大豆中得到纯化的胰蛋白酶抑制剂。通过电泳迁移率,分子质量,末端分析和抑制活性等测定,证明中ＳＢＴｉ－Ａ２的Ｔｉ＾ｂ型。     

纳豆激酶纯化及性质研究

以蒸煮后的大豆为原料通过纳豆菌发酵,生产纳豆激酶.改进纯化工艺以酸法提取和凝胶过滤纯化出比活性为160.8IU/mg的酶制品.该酶制品不仅对纤维蛋白有很好的溶纤作用,而且对大鼠血纤维（拟血栓）也有很好的溶纤活性,实验还证明该酶制品对大鼠新鲜血液有很好的抗凝性能,尤其是该酶制品在pH值为2.45和经胃蛋白酶作用后仍保持较高的活力.同时,该方法制备工艺简便,有0.6%的高回收率,故本方法提取的纳豆激酶制品有望开发成为新型口服溶栓、防栓制剂,以供医疗和保健应用.