HPLC法测定重楼块根中4种重楼皂苷含量研究

建立HPLC测定重楼块根中4种重楼皂苷含量的方法。结果表明:重楼皂苷Ⅰ质量浓度在0.054~0.540 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 6 (n=5),回收率为99.12%,RSD为1.95%;重楼皂苷Ⅱ质量浓度在0.043 4~0.434 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.990 8 (n=5),回收率为99.10%,RSD为1.89%;重楼皂苷Ⅵ质量浓度在0.012 6~0.126 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.993 3 (n=5),回收率为99.46%,RSD为2.01%;重楼皂苷Ⅶ质量浓度在0.010 3~0.103 mg·mL^-1范围内线性关系良好,r=0.999 1 (n=5),回收率为96.52%,RSD为2.25%。HPLC法能够准确检测出重楼块根的主要皂苷成分及其含量,且操作简便,可为重楼中4种主要皂苷含量的检测提供科学方法。     

滇重楼皂苷提取及含量测定

采用小型浓缩提取设备提取重楼并制备重楼浸膏粉,用高效液相色谱法测定重楼皂苷的含量：色谱柱Lichrospher100RP-18e（5um,4．6mm×250mm）,以乙腈-水为流动相,流速1．0mL／min,检测波长203nm,柱温25℃．在此条件下测定重楼浸膏中皂苷含量为Ⅶ：90．86mg／g,PA：89．93mg／g,H：198．02mg／g,Ⅵ：302．57mg／g,Ⅰ：27．22mg／g,Ⅱ：137．18mg／g．此法制备重楼浸膏简单方便,能够简易快捷测定重楼浸膏中重楼皂苷的含量．     

重楼地上部分薯蓣皂苷含量的HPLC分析

为评价重楼地上部分薯蓣皂苷的药用价值,用超声法提取了地上部分的甾体皂苷,采用Venusil XBP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈和水梯度洗脱为流动相,在210 nm波长处检测了薯蓣皂苷含量.结果建立了有效的分离薯蓣皂苷色谱条件,果皮、外种皮、叶片、地上茎、种子提取物中仅叶片、果皮中含有薯蓣皂苷,分别约为8.610 mg/g和4.679 mg/g.说明重楼地上部分的果皮和叶片具有药用开发价值.     

系统药理学研究重楼皂苷Ⅰ对黑色素瘤增殖凋亡的作用及潜在机制

重楼皂苷Ⅰ治疗黑色素瘤的作用机制尚未完全阐明,仍需进一步研究.采用网络药理学联合细胞实验系统揭示重楼皂苷Ⅰ对黑色素瘤的作用及机制.结果显示重楼皂苷Ⅰ有104个治疗黑色素瘤的潜在作用靶点.PPI网络分析发现,TP53,AKT1,STAT3,MAPK8,MAPK14,JUN,MAPK3,MAPK1,CTNNB1,MYC,R...     

基于网络药理学研究重楼皂苷抗肿瘤的协同机制

为系统探究重楼皂苷抗肿瘤的协同机制,基于重楼皂苷的含量和活性筛选其抗肿瘤成分,利用靶点数据库获取入选皂苷成分的抗肿瘤靶点,并借助蛋白互作网络分析选出重楼皂苷抗肿瘤的主要作用靶点,对主要作用靶点进行GO(gene on-tology)生物过程富集、KEGG(kyoto encyclopedia of genes and ...     

气相色谱法测定重楼中薯蓣皂苷的水解产物

采用酸水解法提取了重楼的水解产物薯蓣皂苷元,对其进行气相色谱分析,获得了相应的定量数据.气相色谱条件:HP-5MS熔融石英毛细管色谱柱(30.0m×320 μm×0.25 μm);FID检测器;载气流速2.5 mL/min;进样口温度280 ℃;分流比10:1;检测器温度310℃;炉温270℃;进样量1.0 μL.在最佳色谱条件下,薯蓣皂苷元在8.0～4000 μg/mL范围内具有良好的线性关系,R2=0.999 1,测定方法平均回收率为89.0%,RSD为3.7%.GC测定结果和HPLC测定结果相近.     

人参皂苷Rg3抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞过度增殖、炎症反应和PTX3的表达

以肾小球系膜细胞增殖为特征的糖尿病肾病(DN)是糖尿病患者中最常见的并发症.为研究人参皂苷Rg3在DN中的作用及其体外作用机制,通过使用高糖(HG)刺激的系膜细胞增殖的体外模型,并用不同浓度梯度的人参皂苷Rg3进行干预,检测系膜细胞的增殖情况,并检测其对炎症因子MCP-1和长五聚体蛋白PTX3表达,以及NF-κB信号通路的影响.研究结果表明,人参皂苷Rg3可以一定程度地减轻HG诱导的系膜细胞增殖.在HG诱导的系膜细胞中,人参皂苷Rg3可以降低炎症因子MCP-1的表达水平.另外,人参皂苷Rg3还能显著抑制PTX3的产生,并抑制NF-κB p65的表达,增加IκBα的表达.此外,PDTC组也能显著抑制IκBα降解,降低NF-κB p65,MCP-1和PTX3的表达水平.结果表明,人参皂苷Rg3可减轻HG诱导的系膜细胞增殖,炎症反应和PTX3表达,该过程可能是通过抑制NF-κB信号通路所介导的.人参皂苷Rg3可以作为一种治疗或预防剂在DN中发挥一定的肾脏保护作用,可能与其抗炎作用和抑制PTX3的表达有关.     

重楼活性单体PP-26抑制结肠癌SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡

目的:探讨重楼活性单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用及其机制.方法:采用噻唑蓝(MTT)法和克隆形成抑制实验观察不同浓度的重楼单体PP-26对人结肠癌SW620细胞增殖抑制作用;PI单染及Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞周期变化及细胞凋亡水平;Western blotting检测PP-26对细胞周期、细胞凋亡相关蛋白以及Akt和ERK蛋白的表达.结果:与正常肝LO2细胞相比,重楼单体PP-26能显著抑制SW620细胞的生长,作用呈剂量-效应关系;随着PP-26浓度的增加,细胞克隆形成逐渐减少,与细胞对照组相比有显著差异;不同浓度PP-26作用后,细胞阻滞于G1期;PP-26作用细胞24 h后,CDK4、CDK6表达下降,P15、cyclin D1表达增加;不同浓度PP-26作用后,细胞晚期凋亡率增加,随浓度增加有上升趋势;PP-26作用细胞24 h后,线粒体相关凋亡信号通路蛋白Caspase-9、Caspase-3表达下降,PARP切割条带增加,细胞促凋亡蛋白Bax的表达增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-x L减少,p-Akt和p-ERK蛋白表达均下降.结论:重楼活性单体PP-26通过上调p15促进结肠癌SW620细胞阻滞于G1期,通过抑制P13K/Akt信号通路及ERK信号通路,活化线粒体凋亡通路,诱导细胞凋亡.     

异叶败酱中三萜化合物常春藤皂苷元对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用

利用倒置显微镜观察法、台盼蓝排染法、Hoechst33258荧光染色法、DNA ladder电泳以及流式细胞分析技术,检测了从甘肃产异叶败酱(Patrinia heterophylla Bunge.)中分离得到的三萜化合物常春藤皂苷元(HG)对人早幼粒白血病细胞HL-60的增殖抑制、周期阻滞及凋亡诱导作用.结果表明,常春藤皂苷元在较低浓度(10～40 μmol·L-1)条件下,时HL-60细胞增殖具有良好的抑制作用;在较高浓度(40～50μmol·L-1)条件下,对HL-60细胞具有致死作用;同时,常眷藤皂苷元对HL-60细胞的G1期阻滞和凋亡诱导作用极可能是其实现增殖抑制和致死作用的主要途径.     

七叶皂苷钠对宫颈癌瘤株体内外增殖的抑制作用

为了考察七叶皂苷钠的抗肿瘤活性并探讨其机制,研究了七叶皂苷钠对小鼠宫颈癌U_（14）的体内增殖抑制作用和对人宫颈癌Hela细胞的体外增殖抑制作用．建立昆明种小鼠的U_（14）宫颈癌模型,腹腔注射不同剂量七叶皂苷钠,观察瘤重及胸腺和脾脏指数．用MTT法检测不同浓度七叶皂苷钠对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响,AO／EB双染色和流式细胞术检测细胞凋亡,同时考察了七叶皂苷钠对Hela细胞的细胞周期调控作用．结果表明,2．8（mg／kg）·d的七叶皂苷钠可明显抑制小鼠宫颈癌U_（14）的体内增殖（P〈0．01）,七叶皂苷钠对Hela细胞体外生长的抑制率呈时间和浓度依赖关系,细胞周期发生G1／S期阻滞并出现细胞凋亡．七叶皂苷钠能够抑制宫颈癌瘤株的体内外增殖,其可能机制是改变细胞周期分布并诱导细胞凋亡．     

强化融合蛋白lhFⅦ-LDM对人肺腺癌细胞A549体内致瘤性的抑制

以人凝血因子Ⅶ(FⅦ)cDNA和编码力达霉素(LDM)辅基蛋白LDP的质粒(pETVH-LDP)为模板,通过PCR及搭桥PCR构建原核表达人凝血因子Ⅶ轻链(the light chain of FⅦ,lhFⅦ)和LDP融合蛋白lhFⅦ-LDP的重组质粒pET19b-lhFⅦ-LDP.重组质粒转化感受态表达菌株E.coli Rosetta-gami B(DE3)pLysS,诱导表达后亲和纯化,并以Western blot鉴定得到的融合蛋白lhFⅦ-LDP.将lhFⅦ-LDP与LDM的烯二炔发色团(AE)进行分子组装制备强化融合蛋白药物lhFⅦ-LDM.用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,co-IP)检测lhFⅦ-LDP与人肺腺癌细胞A549组织因子(TF)的结合特异性,并通过裸鼠移植瘤实验研究lhFVⅡ-LDM对A549细胞体内致瘤性的影响.结果显示,lhFⅦ-LDP能够与TF特异性结合,并且,强化融合蛋白lhFⅦ-LDM能够显著抑制A549细胞的体内致瘤性.     

重楼愈伤组织的抑菌作用研究

目的:探究重楼根茎诱导获得愈伤组织的抑菌作用,为中药资源的有效开发利用提供一条重要途径.方法:以宋内氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌为受试菌,头孢噻肟钠为对照药,采用试管稀释法和琼脂平板扩散法对重楼根茎愈伤组织提取物的抑菌作用进行研究,并比较它们的最小抑菌浓度.结果:重楼根茎愈伤组织提取物对宋内氏痢疾杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度分别为15.63 mg/m L、31.25 mg/m L、31.25 mg/m L.结论:重楼根茎愈伤组织提取物具有一定的抑菌作用,为其临床应用提供了实验依据.     

CCK-8法和MTT法检测人前列腺癌PC3细胞活性的最佳条件比较研究

以人前列腺癌PC3细胞作为研究对象,探讨了CCK-8法和MTT法的最佳实验条件。CCK-8的最佳检测波长为450nm,最佳检测时间为加入CCK-8试剂后4h,适宜细胞数量范围为8×10^2-1×10^5个。在检测抗肿瘤药物阿霉素（ADM）对PC3细胞的增殖影响实验中,发现CCK-8法测得数据的线性相关性优于MTT法,并且数据偏差较MTT法小。实验结果表明CCK-8法较MTT法检测的灵敏度高,准确性好,是一种优于MTT法的检测细胞增殖活性的方法。     

华重楼极其常见混伪品的多重PCR快速鉴定体系的建立和应用

目的：建立快速鉴定重楼属中药材华重楼极其常见混伪品的多重PCR方法。方法：收集华重楼,其常见混种栽培种的根茎,叶片及种子样品,对华重楼极其常见混伪品的rDNA-ITS片段进行对比分析;基于重楼属植物rDNA-ITS的SNP位点,针对华重楼,球药隔重楼,黑籽重楼设计3组共6条特异性引物,建立并优化多重PCR反应体系;应用已建立的多重PCR方法对华重楼,球药隔重楼,黑籽重楼及常见的其他重楼属混伪品进行鉴别,验证方法的准确性。通过观察电泳检测扩增产物条带的位置及数量实现快速检测的目的。结果：建立的多重PCR鉴定方法能准确地对华重楼极其常见重楼属混杂栽培种进行快速鉴别。结论：多重PCR方法特异性强,灵敏度高,高效快速,可用于多基源中药材及同属近缘种的快速鉴别,同时为中药材的种质资源鉴定提供可行的方法。     

贡嘎山东南坡重楼的土壤养分及栽培重楼的性状研究

通过对贡嘎山东南坡重楼资源实地考察,明确了贡嘎山东南坡野生重楼资源的土壤属冲积土壤和森林土壤,土壤中有机质含量和矿质元素丰富,保肥供肥能力强;对多叶重楼、毛重楼、滇重楼、禄劝重楼、花叶重楼、北重楼和卵叶重楼进行栽培,测定其鲜活地下块茎的径粗、径长、产量和新芽数量等指标,结果表明:多叶重楼地下块茎的径粗、产量和新芽数量最高,平均每株的径粗达5.30 cm,单株地下块茎重量达55.83 g,新芽数量达14.53个;栽培重楼时最适宜的重楼品种为多叶重楼,其次是滇重楼和毛重楼。     

SARS-CoV-2 Spike蛋白诱导人肾上皮细胞周期阻滞及细胞凋亡

目的:初步探讨慢病毒载体介导的SARS-CoV-2 Spike蛋白(简称S蛋白)过表达对人肾上皮细胞生长的影响及相关机制.方法:构建S蛋白慢病毒的表达载体pLV-CMV-S-IRES-eGFP,并将此载体包装成慢病毒颗粒(LV-S).利用重组的慢病毒LV-S感染人肾小管上皮细胞(HK-2)及HEK293T细胞(293T...     

激素和PEG对华重楼种子萌发的影响

为研究不同浓度的赤霉素(GA3)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)和不同浓度的PEG4000、PEG6000、PEG8000和PEG10000对华重楼种子萌发的影响,采用培养皿培养法,用不同浓度的2种激素和4种PEG浸种处理,观察记录了种子萌发率和萌发开始时间(胚根突破种皮所需的天数)、第120 d时胚根长3 cm的种子所占的比例,筛选了促进华重楼种子萌发的最适浸种试剂和浓度.结果表明:500 mg/L GA3,0.5 mg/L 2,4-D,25%(质量比)PEG4000和25%PEG8000浸种能有效打破华重楼种子休眠并促进种子萌发,其中500 mg/L GA3效果最佳.这是国内首次关于华重楼种子萌发条件的全面研究报道.     

四种华重楼内生细菌的初步研究

从华重楼（Paris polyphylla var Chinensis）的新鲜块茎中分离得到107株内生菌．对这107株菌进行了液体培养,经初步检测鉴定,有6株菌产生薯蓣皂甙或其类似物等甾体皂甙,对其中4株菌的形态学和理化特征进行了研究,确定这4株菌分别属于德克斯氏菌属（Derxia sp）、芽孢杆菌属（Bacillus sp）、动性球菌属（Planococcus sp）、肠杆菌属（Enterobacter sp）.     

重楼属植物愈伤组织的诱导和培养

以MS培养基为基本培养基,附加不同种类和浓度的生长调节物质,对不同器官,不同取材时期的重楼外植体进行愈伤组织的诱导培养研究．结果表明,BA和IAA有利于愈伤组织的诱导;生长期的幼芽组织是较适宜的培养器官,其愈伤组织的诱导频率达26．7％．该研究为进一步离体快繁完整植株打下了坚实的基础,     

多叶重楼的形态变异研究

采用SPSS11.5对多叶重楼14个居群的846个个体的形态学数据进行分析,以研究多叶重楼的形态分化规律.结果发现多叶重楼个体间形态变异较大,环境对繁殖器官和营养器官形态变化的影响大小相近;居群间形态变异与居群的地理分布有一定的关系,是环境因子和遗传因素综合作用的结果.性状的主成分分析表明,花丝长、药隔长、花瓣长、萼片及叶片形态特征对多叶重楼的形态影响较大,它们与药隔突出和花瓣宽一同作为多叶重楼种下分类的重要形态指标.