铜绿假单胞菌多重耐药性分子机制的研究

铜绿假单胞菌是重要的医院感染条件致病菌.由于各种抗生素的广泛使用,细菌耐药问题日趋严重,导致了铜绿假单胞菌产生了很强的耐药性而且多重耐药,铜绿假单胞菌通过多种途径产生耐药.而从分子水平对其耐药性机制进行研究具有重要意义.     

铜绿假单胞菌外膜亚蛋白质组图谱的建立

铜绿假单胞菌是人类重要的病原菌,容易造成免疫缺陷患者如烧伤、艾滋病、癌症或囊性纤维化感染,对该菌外膜蛋白的研究有助于了解该菌的致病机制,为进一步疫苗研制奠定基础.采用月桂酰基氨酸钠的方法提取了铜绿假单胞菌的外膜蛋白,首次建立了外膜亚蛋白质组学表达图谱,鉴定了23个外膜蛋白,占所鉴定蛋白的82.1%.然后对其中的一个外膜蛋白基因PA3988进行了克隆及原核表达与纯化,经免疫小鼠获得抗血清后对外膜蛋白进行双向Western blotting分析,验证了质谱的结果.这些研究结果对铜绿假单胞菌外膜蛋白的深入研究具有积极作用.     

烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌的分离及耐药性分析

目的 了解烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌耐药谱的变化,为防治烧伤病区患者感染铜绿假单胞菌提供合理用药依据.方法 常规方法收集同一时间烧伤病房9名感染患者的患部浓汁和血液标本,分离鉴定出9株铜绿假单胞菌,K-B法进行药敏试验及统计学分析.结果 9株铜绿假单胞菌对氨苄西林、哌拉西林、亚胺培南/西司他丁、头孢他啶、氨曲南、阿米卡星、复方磺胺等11种抗菌药物耐药率均为100%.结论 烧伤病房感染患者铜绿假单胞菌耐药现象严重,应注意铜绿假单胞菌耐药性的监测.     

铜绿假单胞茵主动外排系统与耐药性关系的研究

铜绿假单胞菌是一种重要的院内感染条件致病菌,常感染癌症患者、烧伤患者等机体免疫力低下的患者,它对多种不同理化性质的药物高度耐药,其主动外排系统在耐药性中起主要作用.主要研究了铜绿假单胞菌主动外排泵的类型、组成及对抗生素耐药性的影响.     

铜绿假单胞菌毒力相关小RNA的筛选与鉴定

小RNA在细菌的基因调控过程中具有重要的作用,然而目前在铜绿假单胞菌中仅发现了几种有功能的小RNA.铜绿假单胞菌中存在着许多短片段RNA(100-250 bp),然而这些短片段RNA的功能尚不清楚.为了筛选与铜绿假单胞菌毒力相关的小RNA,结合生物信息学手段和实验检测技术对这些短片段RNA进行了靶点基因预测及相关表型研究.结果显示:利用小RNA靶点预测软件,筛选到23个毒力相关小RNA;通过构建小RNA过表达质粒,对这些小RNA进行了高表达及相关的表型检测,发现Pant116对铜绿假单胞菌的3型分泌系统具有负调控作用.     

寡聚核糖核苷酸降解酶影响铜绿假单胞菌的能量代谢

铜绿假单胞菌是一种自然界中广泛存在的革兰氏阴性条件致病菌.在该菌的RNA代谢过程中,存在一种以NanoRNA(2-5nt的寡聚核糖核苷酸)为底物的寡聚核糖核苷酸降解酶(Oligoribonuclease, Orn).在本研究中,发现铜绿假单胞菌orn突变菌株的生长速度变慢,因此使用ATP,NADH检测试剂盒,利用酶标检测法和流式细胞分析研究Orn对细菌生理状态的影响.研究结果表明,铜绿假单胞菌orn基因的缺陷可以导致细菌胞内NADH和细菌细胞膜电位差的降低.这进一步导致细菌胞内ATP合成的降低,从而影响细菌的能量代谢.     

铜绿假单胞菌铁与群体感应系统的调节

目的分析总结铜绿假单胞菌铁调节机理及其与群体感应系统之间的调节关系。方法汇总实验室有关铁调节和群体感应系统的研究结果,并结合相关文献资料进行分析总结。结果铜绿假单胞菌可以通过多种途径吸收利用不同来源或状态的铁源,在各种铁吸收途径中以铁载体介导途径尤为重要。Fur蛋白作为调节中心,与小RNA和ECF sigma因子共同对铁平衡进行精巧调节,而铁调节和群体感应系统相互影响,共同调节着相关基因的表达。结论铜绿假单胞菌中铁和群体感应系统协同作用,形成一个复杂的全局性网络,调节菌体毒性因子的表达等多种生理过程,影响着细菌感染的进程。     

应用RAPD技术研究金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌DNA的多态性

本试验利用RAPD技术对临床上重要的致病菌金黄色葡萄球菌28株和铜绿假单胞菌2l株，用10bp引物进行扩增，结果铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌的DNA带谱均出现了多态性；根据带谱的不同可将铜绿假单胞菌分成8个型，金葡菌分成3个型；根据铜绿假单胞菌的带型计算各菌间的相似系数，依此系数绘制了系统树，从系统树中清晰可见各菌间的亲缘关系。     

应用正交实验研究铜绿假单胞菌原生质体制备与再生

通过对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生进行正交实验,探讨各因子对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生影响水平,得到铜绿假单胞菌原生质体制备与再生的最优条件:酶解时间 0. 5h,酶浓度 2mg/L,菌龄为 15h 此时原生质体形成率为 80. 5%,再生率为 20. 6%     

气管切开术后肺部铜绿假单胞菌感染的护理体会

铜绿假单胞菌 (又称绿脓杆菌 )是慢性呼吸道感染的重要致病菌之一 ,多见于院内感染 ,对于原有心肺疾病、年老体弱、长期使用抗生素以及免疫功能低下的病人均易致病 ,铜绿假单胞菌治疗相当困难 ,病死率为 31%～ 35 % ,铜绿假单胞菌败血症性肺炎则高达 80 %～ 90 % [1 ]。我科于 1999年 7月成功治愈 1例气管切开术 (以下简称气切术 )后合并肺部铜绿假单胞菌感染的病人 ,现浅淡护理体会。1　病例报告张×× ,男 ,80岁 ,住院号 :85 334。患者因乙状结肠癌并底位完全性肠梗阻行手术切除 ,既往有肺结核、慢性阻塞性肺气肿病史 ,术后第二天出现气管…     

铜绿假单胞菌的耐药现状及外膜孔蛋白分析

目的:总结分析我院2007年-2009年铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药状况,以指导临床合理选用抗生素,同时探讨外膜孔蛋白缺失介导的铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制.方法:采用PCR方法检测外膜孔蛋白OprD的编码基因,利用Whonet 5.4 软件对药敏资料进行统计分析.结果:3年中铜绿假单胞菌每年的分离数量分别为13...     

540株铜绿假单胞菌12年耐药情况分析

目的：分析导致临床感染的540株铜绿假单胞菌的临床特点及耐药情况,为临床预防感染及合理用药提供依据。方法：回顾性分析12年来540株铜绿假单胞菌的耐药情况。结果：住院患者铜绿假单胞菌检出率明显高于门诊患者,且以重症病房（ICU）尤为显著;下呼吸道感染是主要的临床感染来源;中老年人及慢性病患者,重症患者为易被侵袭人群;铜绿假单胞菌对多数抗生素有较高的耐药性及多重耐药性,且耐药性有逐年上升的趋势。结论：铜绿假单胞菌是临床常见条件致病菌,耐药性严重。治疗中应根据分离株耐药特点选择合理用药方案,避免多重耐药铜绿假单胞菌的出现。     

一株新铜绿假单胞菌噬菌体SRT6的分离以及全基因组序列分析

分离一株新铜绿假单胞菌噬菌体,进行生物学特征分析,全基因组测序和比较基因组学分析.了解该噬菌体与其他假单胞菌噬菌体之间的亲缘关系以及它的潜在应用价值.利用双层平板法分离纯化噬菌体,利用酚氯仿抽提基因组,利用Illumina Hiseq测序平台对基因组测序,利用生物信息学进行基因组和比较基因组学分析.分离到一株新的烈性铜绿假单胞菌噬菌体SRT6,其基因组全长91 364bp,G+C含量49.3%,存在182个蛋白质编码基因,其中的96个与已知功能的蛋白质具有相似性,无tRNA和tmRNA.比较基因组分析发现,噬菌体SRT6属于一个新物种.分离鉴定出一株烈性铜绿假单胞菌噬菌体SRT6,并发现它属于一个新种噬菌体,为未来利用噬菌体治疗耐药铜绿假单胞菌感染打下坚实的基础.     

110株铜绿假单胞菌的来源分布及耐药性分析

目的 :分析 110株铜绿假单胞菌的临床来源分布及耐药现状 ,为临床预防感染及合理用药提供依据。方法 :回顾性分析近 3年来从各类标本中分离到的铜绿假单胞菌 ,采用K -B法进行药敏试验。结果 :从痰、脓性分泌物、胸腹水、尿液、血液中均分离出铜绿假单胞菌 ,病人多为呼吸内科患者及术后感染者 ;对氟喹诺酮类 ,丁胺卡那、三代头孢及泰能耐药性低 ,对氯霉素、庆大霉素及青霉素类药物耐药性高。结论 :铜绿假单胞菌呈多分布及多重耐药 ,应加强消毒防御 ,控制其感染发生 ,并应在药敏试验结果指导下进行治疗     

铜绿假单胞菌耐药性与抗菌药物使用强度相关性分析

为了给临床合理使用抗菌药物提供科学依据,回顾性调查了医院2016年1月1日至2019年12月31日铜绿假单胞菌耐药率变化趋势及同一时间段抗菌药物年用量,计算使用频度,分析了抗菌药物使用强度与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)耐药率的相关性.分析结果显示:铜绿假单胞菌对哌拉西林/他唑巴坦、庆大霉...     

铜绿假单胞菌的分布及耐药分析

目的：分析江汉大学附属医院病人铜绿假单胞菌的耐药率,指导临床用药.方法：对2009年1月-2010年12月临床分离的138株铜绿假单胞菌进行回顾性分析,采用WHONET 5.4软件统计耐药率.结果：铜绿假单胞菌在呼吸道标本中的检出率最高,占86.9％;对阿米卡星(87.0％)、头孢哌酮/舒巴坦(83.8％)、头孢吡肟(...     

苦参与环丙沙星合用对铜绿假单胞菌生物膜的影响

采用体外复制铜绿假单胞菌生物膜模型,研究了苦参水煎液与环丙沙星联合应用对铜绿假单胞菌生物膜的影响及协同杀菌效果,结果显示,1/16、1/4最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration MIC)的苦参水煎液可显著增加1/41、/2 MIC的环丙沙星对铜绿假单胞菌生物膜的抑菌活性,两药合用具有明显的协同作用.     

铜绿假单胞菌医院感染流行病学分子研究及基因分型

目的建立随机扩增多态性DNA（RAPD）基因分型方法检测铜绿假单胞菌（PA）,调查铜绿假单胞菌医院感染流行病学的情况,为控制院内感染提供直接可靠的参考依据。方法对2008—2009年分离的180株铜绿假单胞菌进行统计分析其临床分布;通过抗生素敏感性试验进行抗菌谱分型;再采用PAPD基因分型方法进行分析。结果标本主要来自ICU、烧伤科、呼吸内科等。从痰液标本中分离的铜绿假单胞菌占58．9％,其次伤口分泌物标本占18．9％、中段尿16．7％,其它类型标本占5．5％。抗菌谱分型分为5型。180株铜绿假单胞菌用RAPD分型共得178株,分型率98．9％（178／180）,分为9种类型：Ⅰ～Ⅸ。结论RAPD分型技术对铜绿假单胞菌临床分离株分型率较高;同一抗菌谱型的基因型可能不同,同一基因型的抗菌谱也可能不同。     

标本中铜绿假单胞菌的临床分布及耐药情况

目的分析我院铜绿假单胞菌临床分布及耐药情况,为临床合理选用抗生素提供依据。方法采用K-B纸片扩散法对临床分离的铜绿假单胞菌进行抗生素敏感性测定,对检测结果进行对比统计分析。结果分离出的27株铜绿假单胞菌主要来源于痰,临床主要分布于脑外科与呼吸内科,对铜绿假单胞菌保持抗菌活性较强同时耐药率〈30%的抗生素有亚胺培南（IPM）,阿米卡星（AMK）,头孢他啶（CAZ）,左氧氟沙星等,但复方新诺明（SXT）耐药率为92.6%,头孢噻肟耐药率为60.6%,原来被认为抗铜绿假单胞菌较为有效的头孢呱酮耐药率也升至60.0%。结论铜绿假单胞菌对常用抗生素耐药率高,建议根据药敏结果,采用有效药物单一或联合疗法,以控制细菌耐药性的增长。     

铜绿假单胞菌SJTD-1的磷酸化蛋白质组学

制备了铜绿假单胞菌SJTD-1菌株的蛋白质组酶解产物,并利用二氧化钛磁珠从酶解产物中富集磷酸化肽.首次利用纳升液相色谱-质谱技术鉴定磷酸化肽的磷酸化位点,最终共鉴定获得13条磷酸化肽,分别来自12个磷酸化蛋白,其中有7个磷酸化蛋白在假单胞菌中是首次发现.分析鉴定到的磷酸化蛋白,发现大多与DNA复制、物质转运、能量代谢等密切相关.这是首次对铜绿假单胞菌SJTD-1菌株进行磷酸化蛋白质组学分析,为SJTD-1在DNA复制、物质和能量代谢以及细胞膜转运等方面的研究奠定基础.