腈水合酶产生菌的分离、鉴定及部分酶学性质研究

从长期被腈化物污染的土壤中筛选到一株腈水合酶产生茵YL-1，经过对分离菌株形态特征及生理生化指标的鉴定，该菌株初步鉴定为Rhodococcus．在含有丙烯腈的培养基中，细胞的生长与产物腈水合酶的合成相关，酶学性质研究表明：酶反应最适温度为30℃，最适pH为7．0．该酶在50℃以下，pH为6．0至9．0范围内较稳定。     

一株腈水合酶产生菌的筛选、鉴定及培养条件研究

以葡萄糖为碳源,逐步增大培养基中丙烯腈浓度进行重复续代培养,从土样中筛选到一株腈水合酶活力较高的菌株.经形态观察和16S rDNA序列分析,该菌株鉴定为红球菌属(Rhodococcus)菌株,命名为Rhodococcus sp.TCCC 28001.对菌株TCCC 28001培养条件进行了初步研究,确定培养基为葡萄糖15 g/L,酵母粉5 g/L,尿素7g/L,Coz+10x10-5mol/L.28℃,180r/min培养72 h,腈水合酶活力达892 U/mL.     

生物法转化丙烯腈制取丙烯酰胺的研究

本文研究了一株腈水合酶产生菌ｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．Ｓ１１５生长，产酶的条件及其所产酶的反应条件。Ｓ１１５在选定的培养基中，于３０℃摇床培养７２ｈ，其生长较好，酶活也较高。在所研究所几种诱导物中，丙腈对产酶的诱导作用最好。本文还研究了培养过程中补腈对产酶的影响以及底物浓度，反应液ｐＨ对腈水合酶反应的影响。     

基于盐碱条件下产腈水合酶菌株的筛选与高酶活表达工艺的研究

利用含有一定比例丙烯腈和丙烯酰胺的特制培养基从新疆盐碱环境下筛选和分离产睛水合酶微生物,获得了具有在较高盐浓度和pH偏碱性条件下生长良好、菌苔为光滑、橙红、湿润的菌株。研究其细胞培养特性。通过对菌株的极端定向培育和产酶过程的研究,采用葡萄糖．诱导剂耦合补加工艺进行催化剂的制备,同时加入各种诱导剂进行产酶诱导。结果表明,pH=7．2,葡萄糖浓度维持在3-5g／L,发酵培养基中加入0．3％NH4a,0．6％丙烯腈,并在培养48h后加入0．3％丙烯腈,产生的脯水合酶酶活最高,可达8208．3U／mL。     

组成型漆酶高产菌株的筛选及其产酶条件研究

通过平板显色法及氧化带测定法初筛,愈创木酚法测定培养液漆酶酶活力复筛,从菌株中获得1株组成型漆酶高产红芝Ganoderma lucidum菌株.对红芝液体培养产酶条件的研究表明:以麦芽糖和硫酸铵为碳、氮源时,更有利于红芝漆酶的分泌,其酶活高于以其他物质作为碳、氮源;在250 mL三角瓶中装50 mL培养基有利于产酶;适宜初始培养基pH为6.0;适宜培养温度为30 ℃.     

产腈水合酶菌Nocardia sp.HD9611超高诱导及发酵工艺改进

研究了金属离子和诱导因子对Nocardia sp．HD9611产腈水合酶的促进作用．结果表明,培养基中加入Co^2 和脲将会对腈水合酶的诱导激活起关键作用,并且发现诱导剂A和B对腈水合酶的产生具有较强的诱导作用,当它们的质量分数分别为0．8％和0．2％时,酶活分别提高了49．4％和104．3％．新的发酵工艺采用诱导剂分批加入方式,不仅可以有效解除诱导剂对细胞生长抑制,并且酶活也有较大的提高。     

纤维素酶产生菌的筛选及产酶条件

以褐色高温单孢菌（Thermomonospora fusca)为出发菌株，通过60s和80s的紫外线交替诱变孢子悬液，采用透明圈法初筛和摇瓶培养复筛的方法，获得了一株高产纤维素酶的突变株PE－211。与原始菌株相比，该突变株的产酶活力提高了1倍多。文中还对PE－211的产酶条件进行了研究。     

脲酶高产菌的筛选和产酶条件的研究

从红壤稻田分离产胞外脲酶活性高的细菌、放线菌和真菌各20株.细菌、放线菌、真菌产脲酶活力的平均值分别为0.764,1.104,0.847μmol/min.产脲酶能力大小为:放线菌>真菌>细菌.我们研究了一株放线菌Dactylosprangiumaurantiacum产胞外脲酶的条件.结果表明:该菌产酶的最佳培养时间为42h;产酶的最佳培养温度为28℃;产酶的最佳起始pH为7;葡萄糖、鼠李糖和甘露糖等碳源对产酶有利;硝酸铵、氯化铵和硫酸铵对产酶有利;钙、镁等金属离子能促进产酶.     

腈水合酶产生菌Rhodococcuss p．HUST-1发酵条件的优化

Rhodococcus sp．HUST-1在Co^2＋的诱导下产腈水合酶,催化丙烯腈水合生成丙烯酰胺．对菌株HUST-1的产酶条件进行优化．研究表明,发酵过程中培养基中的碳氮源、诱导剂浓度以及培养条件影响腈水合酶的高效表达．在葡萄糖20g／L、酵母粉10g／L、Co^2＋0．08mmol／L、酪氨酸0．2g／L、pH7．0、培养温度28℃时,HUST-1所产腈水合酶总酶活达1012．7U,比优化前提高了47．1％．     

丙烯腈水合酶反应动力学与酶失活动力学研究

在以丙烯腈为原料,微生物转化生产丙烯酰胺的过程中,酶催化反应是过程的关键。为了了解酶催化的动力学,以自由细胞的酶为催化剂,进行了腈水合酶的反应动力学和失活动力学的研究。首先研究了菌体浓度、温度、pH值、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度等对腈水合酶催化反应速度的影响。结果表明,在这些因素中,温度和丙烯酰胺浓度是最主要的影响因素。经过对不同温度下的反应速度的研究,得到腈水合酶水合反应的活化能为昏60．87kJ／mol,酶失活反应的活化能为89．36kJ／mol。     

一株脂肪酶的筛选和产酶条件及其酶性质的研究

从东营油污样中分离获得一株产脂肪酶的菌株BYCM-1,经鉴定为根霉属.研究了该菌株的产酶条件及其酶性质.研究表明该酶最适的产酶条件为:培养基初始pH 6.5,温度40℃,培养时间72 h.酶作用的最适pH值为8.0,最适温度为40℃.Ca2 和K 对酶活性有一定的激活作用,而Mg2 ,Cu2 ,Fe2 对酶活性有不同程度的抑制作用.     

诺卡氏菌腈水合酶突变基因在重组大肠杆菌中的高活性表达

为了提高腈水合酶基因的重组表达水平,提出了3种基因策略:在重组大肠杆菌中共表达激活子序列、在重组毕赤酵母中表达以及对α亚基的起始密码子进行定点突变。结果表明:对α亚基的起始密码子进行定点突变的基因策略为最佳方案,突变后的腈水合酶基因在重组E.coli XL1-Blue(pUC18-NHBAM)中表达时,腈水合酶的比酶活(以干菌质量计)提高到51 U/mg。进一步以pET28a为载体,插入突变后的腈水合酶基因,构建重组菌株E.coli BL21(DE3)/pETNHM。对优选菌株进行培养条件和诱导条件的优化,腈水合酶的最高比酶活达到450 U/mg。     

富产海藻糖合成酶菌株的筛选

研究了从土壤中分离获得一种富产海藻糖合成酶菌株的全过程．通过平板初筛和摇瓶产酶转化试验及离子色谱仪(HPAEC)检测,确证该酶能转化聚合度大于3的麦芽寡糖合成海藻糖,转化率约为40％,通过形态、结构特征分析以及16SrDNA基因全序列与参比菌株的基因序列比较,菌株JNU-1与食尼古丁节杆菌16S rDNA序列同源性达95．12％,故将该菌株定名为食尼古丁节杆菌JNU-1(Arthrobacter nicotinovorus JNU-1)．     

一株异养硝化菌的筛选及其脱氮条件

从生活污水生物脱氮除磷装置中分离到一株脱氮效果较好的异养硝化菌株,脱氮过程中无亚硝酸盐氮积累质量,只有少量硝酸盐氮积累.在实验室条件下,初步探讨了不同温度、pH值、摇床转速、碳氮比、氨氮质量浓度对YY4菌株脱氮作用的影响.研究结果显示:温度为30℃、pH值为9.0、摇床转速150r/min、m(C)/m(N)为10、氨氮质量浓度为100mg/L时,YY4菌株具有最佳的脱氮效果.应用该菌株对宜兴生活污水和南京某化工厂废水氨氮脱除效果的结果显示,去除率分别为89.54%(9h)和95.79%(36h).     

粘质沙雷氏菌酶催化H2O2降解对苯二酚的产酶条件研究

文章介绍采用源于粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)菌株AB 90027的酶催化H2O2降解对苯二酚,研究了时间、温度、pH值及摇床转速等条件对产酶的影响,探讨了酶在细胞中的存在位置。研究结果表明,产酶的适宜条件为培养时间30 h、温度28℃初始pH10.0及摇床转速150 r/min。并且发现催化H2O2降解对苯二酚的酶主要存在于细胞外,属于胞外酶。对HPLC和UV-VIS监测结果的分析表明,对苯二酚的苯环被降解开环。     

产环氧化物水解酶菌种的筛选及发酵条件优化

以外消旋苯基环氧乙烷为唯一碳源,从土壤中筛选出编号为G7的菌株,能选择性水解外消旋苯基环氧乙烷而得到(S)-苯基环氧乙烷,对映体过量值(e.e)达到99.3%。经鉴定菌种G7属于枯草芽胞杆菌。对该菌株的发酵条件进行了优化,结果表明,当培养基成分为蔗糖10g/L,胰蛋白胨10g/L,Na₂HPO₄·12H₂O 2g/L,KH₂PO₄ 2g/L,MgSO₄ 0.2g/L,CaCl₂ 0.01g/L,pH 6.5,30℃培养25h,环氧化物水解酶活力达到最高值372.2U/mg。