草珊瑚细胞悬浮培养之研究

报道了草珊瑚（Ｓａｒｃａｎｄｒａｇｌａｂｒａ）细胞悬浮培养的某些特性。细胞悬浮培养的摇床转速对草珊瑚细胞生长至关重要、培养物在１００ｒ／ｍｉｎ速度下振荡培养几乎难以存活，最佳的摇床转速为４０ｒ／ｍｉｎ（２３．５ｈ／ｄ＋８０ｒ／ｍｉｎ（０．５ｈ／ｄ），其生长可增加５倍左右。细胞悬浮培养的接种量以２．０ｇＦＷ／瓶合适，其培养物的月产率１３．２２ｇＦＷ／瓶（或１８．７３ｇＤＷ／１）。细胞生长的时间进程是，接种０－５ｄ，细胞增殖十分缓慢，１０－２０ｄ迅速生长，２０ｄ后基本停止生长。培养基的ｐＨ迅速下降时是细胞增殖缓慢的时期，当培养基ｐＨ值开始升高时，细胞增殖也显著加快。黄酮苷类物质的合成在０－２０ｄ迅速增加，２０ｄ左右达到高峰。     

水稻悬浮细胞系的建立

 对包括广亲和材料、恢复系、花培后代在内的30个水稻不同基因型的品种(系)在MS培养基中的培养能力进行了调查.根据出愈率的高低和愈伤组织培养能力,把它们分成Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ3种类型.从Ⅰ类型中挑选CPSLO17和IR21820-154-3-2-2-8用N₆液体培养基进行液体培养,CPSLO17建立了悬浮细胞系,证实基因型的差异是决定建立良好悬浮细胞系的关键因素之一.此外还考察了低锌胁迫对水稻悬浮细胞系和幼胚愈伤分化率的影响.     

银杏细胞悬浮培养及黄酮的产生

本文研究了激素、培养基的成分组成及诱导子对银杏悬浮细胞生长及黄酮产生的影响，结果表明：在银杏细胞悬浮培养过程中，NAA和6-BA组合使用比NAA、6-BA单独使用更有利于细胞的生长，当培养基的蔗糖浓度达到35g．L^-1时，比较有利于细胞的生长；去掉培养基中的氮源，虽不利于细胞的生长，但有利于细胞中黄酮的累积，黄酮的含量可达2．16％，培养基中附加0．1g．L^-1琼脂糖诱导子可使细胞中黄酮含量提高到细胞干重的2．23％。     

培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究

对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定，发现其存在较大差异．梅核品种幼叶黄酮含量最高，为3．32％，大白果品种幼叶黄酮含量最低，为0.84％；梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高，达1．26％，岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低，为0.22％．选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养，研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响．结果表明，在150mL培养瓶中装有50mL培养液，接种量为鲜质量30—40g/L，对培养细胞给予3000—40001x的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成，以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长．HPLC检测结果显示，银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2．82％．     

机械刺激对烟草悬浮培养细胞耐盐和重金属胁迫的影响

机械刺激(mechanical stimulation,MS)是自然界中普遍存在但又易被忽视的一种非生物胁迫因子.用提高摇床转速的方式对烟草悬浮细胞施加机械刺激,发现机械刺激可提高烟草悬浮培养细胞在盐和重金属胁迫下的存活率和再生能力,缓解盐和重金属胁迫下的细胞活力丧失和丙二醛( malonaldehyde,MDA)含量的积累.这些结果表明机械刺激可诱导烟草悬浮细胞耐盐和重金属胁迫耐性的形成.     

银杏悬浮培养细胞中黄酮糖苷提取动力学研究

利用醇提法从人工悬浮培养银杏细胞中提取黄酮糖苷。以扩散传质定律为基础,根据质量平衡方程,建立提取过程的动力学模型,结合测得的数据计算出提取过程中的重要动力学参数。结果表明,乙醇法提取银杏细胞黄酮糖苷是从固相到液相的扩散传质过程,属一级反应。建立的动力学模型ρ_FG=ρ_eq｛1-exp［-1.023t·exp(-1469.55/T)］｝能描述银杏细胞黄酮的乙醇法提取过程,高效液相色谱(HPLC)分析表明,人工培养细胞中提取成分主要是以槲皮素、山萘素和异鼠李素与糖结合形成的糖苷。这既促进了生物技术在天然药物生产上的应用,又为黄酮糖苷提取的工艺设计和操作条件选择等方面提供了理论依据。     

几种物理因素对黄芩细胞悬浮系生长与黄芩苷含量变化的影响

为建立稳定的黄芩细胞悬浮系,采用悬浮细胞培养技术,研究了接种量、光照与否和pH值等3种物理因素对黄芩细胞悬浮系生长与黄芩苷含量变化的影响。结果表明,黄芩细胞悬浮系浊度随培养时间呈现"S"形变化曲线;采用MS基本培养基,添加0.2 mg·L-1 2,4-D、2.0 mg·L-1 6-BA和3%蔗糖,选取1.0 g·L-1的接种量、pH 5.8,并在25℃条件下进行暗培养,最有利于黄芩苷的积累,黄芩苷含量最高可达7.425μg·g-1FW。     

蔗糖对悬浮培养肉苁蓉细胞的生长及苯乙醇苷合成的影响

通过研究悬浮培养肉苁蓉细胞生长、蔗糖消耗的关系,结果表明蔗糖是限制细胞生长的主要因素.在不同的蔗糖浓度下,比较肉苁蓉细胞干重和主要活性成分苯乙醇苷的合成情况,在30g/L的蔗糖浓度下最有利于肉苁蓉细胞的生长,最大生物量达10.84 g/L,苯乙醇苷最高含量可达干重的16.32%,产量为1296.04mg/L.     

马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用

为探讨不同浓度的马钱子苷对小胶质细胞活化的抑制作用及其相关分子机制,分离培养了小鼠原代小胶质细胞,用不同浓度的马钱子苷（50、100、200 μmol/L）预处理后,利用脂多糖（lipopolysacharide,LPS）诱导其活化。观察马钱子苷对LPS诱导的小胶质细胞活化、炎症因子释放以及NF-κB信号通路的影响。结果显示:与对照组相比,LPS组小胶质细胞胞体膨大,分泌大量炎症细胞因子,且NF-κB核转移程度增加（P<0.05）,小胶质细胞呈明显的M1型活化状态;低、中、高浓度的马钱子苷干预后,小胶质细胞的细胞总面积和细胞核面积显著减少（P<0.05）;中、高浓度的马钱子苷能使TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表达水平降低（P<0.05）;中浓度的马钱子苷下调TNF-α和IL-1β的蛋白质水平（P<0.05）;此外低、中、高浓度的马钱子苷可以抑制小胶质细胞内iNOS表达和NF-κB信号通路激活。上述结果表明,马钱子苷可明显抑制小胶质细胞活化,减少炎症因子释放,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。这为马钱子苷应用于神经炎症的预防和治疗奠定了理论基础。     

玉米细胞悬浮系建立和单细胞培养影响因素的研究

以玉米幼胚为外植体进行离体培养,获取愈伤组织,建立悬浮细胞系.试验结果表明:基因型无论是对细胞悬浮系建立还是对单细胞培养都有很大影响;改良1/2B5培养基用于细胞悬浮培养能获得良好的细胞生长与分裂;继代培养时间以及大量元素减半都影响玉米悬浮细胞的生长.     

粘虫PuA7S细胞的悬浮培养病毒增殖及其细胞克隆

粘虫ＰｕＡ７Ｓ细胞能在ＴＮＭＦＨ培养基和Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４０５，Ｅｘ－Ｃｅｌｌ４００两种无血清培养基中实现高密度悬浮培养。在１００ｒ／ｍｉｎ搅拌条件下，ＰｕＡ７Ｓ细胞上述培养其中的最大生长密度分别为１．６５＊１０＾６细胞／ｍＬ，３．５０＊１０＾５细胞／ｍＬ和２．０２＊１０＾６细胞／ｍＬ，群体倍增时间分别为４８ｈ，４５ｈ和４２ｈ，ＡｃＭＶＰＶ能够在ＰｕＡ７Ｓ细胞悬浮系统高水平增殖，在３种培养基培养细胞