胎鼠DRG神经元细胞培养方法的建立

目的建立胎鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元原代培养的方法。方法无菌条件下取E16天的胎鼠DRG进行原代培养,观察神经元生长状态并用神经元特异性烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)免疫细胞化学染色鉴定细胞。结果培养的DRG神经元可存活1个月左右,并长出突起,形成密集的网络。NSE鉴定细胞阳性表达率高,神经元达到90%左右纯度。结论本文建立了DRG神经元细胞简洁、经济、高效的培养方法并成功鉴定了神经元。为对神经元的深入研究提供了实验模型。     

人血小板生成素在COS－7细胞中的暂时表达

利用反转录ＰＣＲ获得的全长人ＴＰＯｃＤＮＡ克隆入真核表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ的Ｎｈｅｌ位点，用ＤＥＡＥ-Ｄｅｘｔｒａｎ法将其导入ＣＯＳ-７细胞中．实验表明，所构建的表达质粒在ＣＯＳ-７细胞中有转录水平表达．ｈＴＰＯ在真核系统中的稳定表达正在研究中．     

重组人血小板生成素和重组人白介素-11对正常猕猴全血凝血功能和血小板的影响

为重组人血小板生成素 (rhTPO)和重组人白介素 11(rhIL 11)用于治疗血小板生成低下疾病的临床应用提供实验依据 ,观察给rhTPO和thIL 11后猕猴血小板数和二磷酸腺苷或凝血酶诱导的血小板聚集功能及全血凝固活性的改变。结果 :①连续给 2 μg/(kg·d)rhTPO 8d和 2 0d ,rhTPO组血小板数已明显增多 ,但其最大聚集率与对照值和给药差别并不显著 ;相同时间rhTPO组血栓弹力图 (TEG)r、k和r +k值均有不同程度的缩短。ma 值明显增大 ,提示全血凝固活性增强。② 12 0 μg/(kg·d)和 10 80 μg/(kg·d)rhIL 11连续注射 4 9d ,两剂量组血小板数均明显高于赋型剂对照组 ;凝血酶诱导两组血小板最大聚集率变化不显著 ,ADP诱导时 12 0 μg/(kg·d)组最大聚集率变化亦不明显 ,而 10 80 μg/(kg·d)组最大聚集率则明显低于对照和 12 0 μg/(kg·d)组。停药后 2 3d ,10 80 μg/(kg·d)组血小板数和其聚集功能仍未恢复正常。说明rhTPO和rhIL 11对血小板数量和功能方面的影响基本相似 ,而对血浆其它凝血因素的影响可能不完全相同     

乙酰胆碱酯酶与新型香豆素类二聚体抑制剂的作用研究

本文通过分子对接的方法研究了香豆素类二聚体作为AChE抑制剂在正常活性位点（Set203、Glu334和His447）和外周阴离子活性位点（His287、Tyr72、Tyr441和Glu292）的作用情况．研究结果表明，此类抑制剂有两个负电性中心：抑制剂母体的内酯区和6位或7位的苄基区．由于这两部分负电作用比较强极易与周围蛋白质发生静电作用，从而导致氢键的形成．研究发现香豆素二聚体类抑制剂更容易结合在AChE的外周阴离子活性区域．这类抑制剂在外周阴离子活性位点有相同的作用模式．这使得香豆素类二聚体有可能成为一种有更好应用前景的乙酰胆碱酯酶抑制剂．     

细胞的增殖与凋亡在胎肺支气管上皮细胞发育过程的观察

目的：观察不同发育阶段人胎肺支气管粘膜上皮细胞的凋亡,以及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达特征,并探讨细胞的凋亡与增殖在胎肺发育中的关系。方法：用原位核酸末端杂交,检测了１６～３２周人胎肺组织的凋亡细胞阳性表达率,用免疫细胞化学技术检测了同期人胎肺组织的ＰＣＮＡ阳性表达率。结果：人胎肺支气管粘膜上皮细胞在胎肺发育的早、中期（即假腺期和小管期）,细胞的凋亡与增殖均明显较晚期旺盛,而且两者均于胎肺发育的第２４周达到最高蜂,以后细胞的凋亡与增殖活动减弱;但凋亡与增殖细胞在不同发育时期定位有不同。结论：细胞的凋亡与增殖行为在胎肺支气管上皮细胞发育分化的整个过程中普遍存在,分工协作,对于胎肺的形态发生及功能完善共同起作用。     

用酵母双杂合系统筛选与人血小板生成素受体c-Mpl相互作用的蛋白质的初报

血小板生成素（ｔｈｒｏｍ ｂｏｐｏｉｅｔｉｎ, ＴＰＯ）是调节血小板生成最主要的细胞因子,其生物学效应由其受体ｃ－Ｍｐｌ介导．利用酵母双杂合系统（ｔｗ ｏ－ｈｙｂｒｉｄ ｓｙｓｔｅｍ ）筛选与ｃ－Ｍｐｌ相互作用的蛋白质因子,以Ｇａｌ４ ＢＤ融合ｃ－Ｍｐｌ膜内部分ｃＤＮＡ 的ｐＡＳＭＭ 为靶蛋白质粒,筛选了人胎盘ｃＤＮＡ 文库,分离到人波形纤维蛋白（ｖｉｍ ｅｎｔｉｎ）的部分编码序列,首次检测到波形纤维蛋白与ＴＰＯ 受体之间的相互作用,这提示细胞骨架蛋白可能在ＴＰＯ 的信号转导过程中起着重要的作用     

盘基网柄菌KAx-3中类免疫细胞的初步研究

以Ethidium bromide(EB)代替盘基网柄菌生长环境中所遇到的毒物,检测盘基网柄菌中是否存在能吞噬毒物的特定细胞.荧光显微镜下观察,细胞丘时期仅能看到EB加入后显现的暗红色轮廓;Hoechst33342定位细胞核,以确证EB被吞噬进细胞内;蛞蝓体时期少数细胞有明显的强荧光反应,随着蛞蝓体的爬行,含EB的细胞团被丢弃在遗弃的粘液鞘中.表明多细胞发育至蛞蝓体阶段存在一种能吞噬EB的细胞,最终将EB排出体外.流式细胞术检测发现,该类特殊的细胞主要来自于前柄细胞.结果显示,盘基网柄菌中存在简单的内在免疫细胞,为研究免疫系统在生物体的发生和发展提供了研究基础.     

荔枝（Litchi chinensis）细胞培养的初步研究

用荔枝无菌苗作为外植体，在添加了ＡｇＮＯ３呈蜂王浆的含１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ和１ｍｇ２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中诱导出愈伤组织，在同样培养基中继代培养，得到了的２细胞系，这种细胞在含１ｍｇ／Ｌ－６－ＢＡ＋２ｍｇ／Ｌ，２，４－Ｄ的ＭＳ培养基中悬浮培养，培养周期２５ｄ，结果表明，维生素Ｃ和ＮａＣｌ在悬浮２中有良好的防褐作用。     

人胎儿子宫肌层的平滑肌细胞超微结构研究

利用电镜研究胎儿子宫肌层的平滑肌细胞在不同胎龄阶段（6个月、7个月、8个月、足月）的超微结构。结果发现随着胎龄的增长，平滑肌细胞显示下列形态变化：（a)胞质的细胞器减少；（b)核表面的凹陷增加和加深；（c)糖元颗粒聚集，细胞表面的半桥粒状致密斑及带有电子致密体的5nm微丝束逐渐增多；（d)到足月妊娠时，其形态与育龄妇女的子宫肌层的平滑肌细胞极为相似，在任何胎龄到足月妊娠时，其形态与育龄妇女的子宫肌层的平滑肌细胞极为相似，在任何胎龄的子宫肌层里均可见到平滑肌细胞间有间质细胞和一些成熟较差的平滑肌细胞。由于样本取自肌层中间部位，及肌层内间质细胞随着胎龄的增长而减少，歌曲以认为平滑肌细胞增多，可能是由于肌层里间质细胞分化的结果，由于在雌激素作用下，核体大量出现及黄体酮促使糖元颗粒聚集成团，本研究结果提示胎儿子宫肌层平滑肌细胞的成熟可能与雌激素主黄体酮的作用有关。     

hSOD基因在大白鼠肺上皮细胞中的表达

本文以哺乳动物细胞表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ为运载体,构建了受控于ＣＭＶ启动子的ｈＳＯＤ基因的表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ＿ＳＯＤ,用脂质体转染法转染大白鼠肺上皮细胞Ｌ２细胞后,经抗生素Ｇ４１８选择性培养,获得与细胞染色体ＤＮＡ稳定整合的ｈＳＯＤｃＤＮＡ导入细胞,经ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔｓ和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｓ分析,结果表明,ｈＳＯＤ在细胞中得到稳定表达,同时测定细胞ＳＯＤ酶活性,ｈＳＯＤｃＤＮＡ导入细胞的ＳＯＤ酶活性是空载体导入细胞和父本细胞的约２倍,并且在选择细胞克隆之后的６０天内是持续的．     

液体闪烁计数器快速测定人肺腺癌细胞SPC-A-1的非预定DNA合成

液体闪烁计数器的测定结果表明,紫外线能诱导人肺腺癌细胞SPC-A-1的非预定DNA合成,而化学药物汉防己甲素对该细胞的非预定DNA合成及DNA复制合成有明显的抑制作用.本文还讨论了影响测定结果的一些主要因素.     

抗三尖杉酯碱的HL60细胞蛋白质磷酸化

研究了抗三尖杉酯碱的ＨＬ６０细胞蛋白质磷酸化的变化。经差速离心得到纯膜蛋白，抗性细胞有一高度磷酸化的１１０ｋｕ的蛋白质存在，免疫沉淀ｃ－ＫＡＦ－１蛋白激酶，抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，其活性被蛋白激酶Ｃ抑制剂ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ明显地抑制。结果表明：ＨＬ６０细胞对三尖杉酯碱的抗药性与蛋白质高度磷酸化有关；抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，可能与多药抗药性和抗细胞调亡有关。     

人输卯管组织与小鼠胚胎共培养的初步观察

为了检测人输卵管组织共培养系统对胚胎早期体外发育的影响,将超排得来的小鼠2细胞期胚胎与人输卵管组织共培养,或以人输卵管组织培养后的条件培养液进行培养。培养液为Ham's F10+10％FCS,并以其作为对照培养液。实验结果显示:无论是组织共培养或是条件培养液共培养,胚胎体外发育达囊胚率,胚胎逸出透明带率及胚胎的发育速度都较F10对照组高。其中输卵管壶腹部组织共培养及其条件培养液共培养对胚胎发育的促进作用较峡部大,而且其条件培养液共培养是以组织培养一周内所得的条件培养液效果最好。组织共培养和条件培养液共培养发育的胚胎正常分裂,没有差别,形态也均正常。实验提示人类输卵管上皮可能分泌某种因子能促进胚胎发育。     

人脐带静脉血管内皮细胞的体外培养及其凋亡的研究

本文从提取生长因子入手，建立人脐带静脉血管内皮细胞系，用电镜进行了细胞鉴定，然后用去除生长因子（FGF和胎牛血清）的方法诱导细胞凋亡，利用荧光显微技术、DNA凝胶电泳、电镜技术和流式细胞分光光度技术，研究了血管内皮细胞凋亡过程中超微结构和细胞周期的变化。发现去除生长因子3h后，在细胞发生明显的DNA片段化和形成凋亡小体的同时，细胞核与细胞质的超微结构发生了明显的变化，S期细胞显著减少，G1期无明显变化，G2细胞显著增多，说明用去除生长因子的方法诱导血管内皮细胞凋亡时，细胞从G2期脱离细胞周期进入凋亡程序，本文的人血管内皮细胞在体外的成功培养和对该细胞凋记的研究对深入研究其凋亡的分子调控机制具有重要的参考价值。     

聚ADP核糖基聚合酶的抑制剂苯甲酰胺在肺癌细胞PG凋亡中的作用

研究了聚ADP核糖基聚合酶（PARP）抑制剂苯甲酰胺（BA）在DNA损伤所造成的肺癌细胞（PG）凋亡过程中的作用,分别用MNNG（N－甲基－N－亚硝基氮亚硝基胍）和BA,以及同时用MNNG和BA处理PG细胞,然后用非放射性细胞增殖测定试剂盒和流式细胞仪测定PG细胞的增殖活性和细胞凋亡的变化,并用免疫组化法检测细胞中Bcl-2蛋白表达的变化,结果表明,在MNNG的作用下细胞的增殖活性受到明显抑制,细胞凋亡显著,Bcl-2蛋白低表达,单独用BA处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达与空白对照组相似,用BA和MNNG共同处理PG细胞时,细胞的增殖活性,细胞凋亡数及Bcl-2的表达,与对照细胞和BA单独处理的细胞相比均无明显差异,这说明PARP对诱导细胞凋亡起重要作用,而且这种作用可被PARP抑制剂BA所抑制。     

非小细胞肺癌CD44v6、VEGF与C-erbB-2和nm23基因蛋白的表达及其临床意义

应用链霉菌抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法染色技术测定 65例非小细胞肺癌(NSCLC)组织标本的CD4 4v6、VEGF、C erbB 2和nm2 3基因蛋白的表达水平 .显示CD4 4v6、VEGF、C erbB 2及nm2 3在NSCLC组织中表达的阳性率分别为 66.2 %、78.5%、63.1%及73.8% ,均显著高于癌旁组织 ;上述四项指标阳性率与NSCLC的病理类型无明显关系 ;区域性淋巴结转移组CD4 4V6及C erbB 2的阳性表达率均显著高于无淋巴结转移组 ;VEGF在肿瘤3.0≤Φ <5.0cm及Φ≥ 5.0cm组的阳性率均显著高于Φ <3.0cm组 (P <0 .0 5) ;提示检测CD4 4v6、VEGF和C erbB 2基因蛋白的表达 ,有可能为判断NSCLC淋巴结转移、病变的发展以及评估预后提供依据     

草木樨状黄芪和光棘豆细胞悬浮培养的最佳培养基

利用不同培养基进行草木樨状黄芪和光棘豆愈伤组织的细胞悬浮培养,筛选出适合这两种植物细胞悬浮培养的最佳培养基S_(12),该培养基能抑制褐化,维持细胞的胚性生长。