用PCR法检测人巨细胞病毒DNA

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）法检测患者尿液中人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡ．结果表明，自行设计合成的引物位于ＨＣＭＶ基因组早期蛋白基因区，经ＰＣＲ仪扩增一段长４３０ｂｐ的特异序列片段，对正常人基因组ＤＮＡ或其它疱疹病毒ＤＮＡ无交叉反应．此法可检测出少至１０－１６ｇ（０．１ｆｇ）的病毒ＤＮＡ．通过对３５份尿液标本的检测，比较ＰＣＲ法和组织培养法的检测结果完全一致     

用微量单管RT－PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒

介绍一种逆转录─聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质炎病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ，共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成。一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常规ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ（５０）／ｍＬ。该法需要的时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别ＰＶ的需要。     

应用聚合酶链式反应检测犬细小病毒

将具有犬细小病毒病典型症状的病犬肠溶物经ＳＤＳ－酚裂解法提取总ＤＮＡ,并以此ＤＮＡ为模板,通过人工合成的两条２０ｍｅｒ引物进行ＰＣＲ扩增,该对引物扩增的片段为犬细小病毒结构蛋白ＶＰ２基因中间１／３区段,ＰＣＲ产物经琼脂糖凝胶电泳,试验结果表明：用ＰＣＲ扩增检测犬细小病毒具有良好的特异性,应用该方法检测的２７份病犬肠溶物样品块获得了预计长度的ＤＮＡ片段（５３１ｂｐ）,而健康犬的肠溶物样品ＰＣＲ结果为     

三种不同方法检测鸡马立克氏病毒的效果比较

研究比较了核酸斑点杂交技术、多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增和病毒分离技术在检测ＭＤＶ中的效果和相关性，试验结果表明：以ＰＣＲ扩增Ｉ型ＭＤＶ１３２ｂｐ重复序列或以此序列标记的Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ探针进行Ｄｏｔ－ＤＮＡ分子杂交检测ＭＤＶ，均具有较好的效果，灵敏度比常规病毒分离高近万倍，其特异性较强，并能快速鉴别ＭＤＶⅠ型毒，使诊断时间缩短了许多。     

反义多聚TAR对人免疫缺陷病毒I型TAT蛋白…

以ＨＩＶ－１ＴＡＲ的ＰＣＲ引物为自身模板，用ＰＣＲ法直接扩增得到多拷贝的ＴＡＲＤＮＡ同向串连体；构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ片段为启动子，含有４．８和１５个拷贝的ＴＡＲＤＮＡ反主表达质粒；以荧光素酶基因为报告基因，检测了瞬时共转染体系中不同拷贝数的反义ＴＡＲＤＮＡ转录产和对Ｔａｔ反式激活作用的抑制作用，结果表明，反义多聚ＴＡＲＲＮＡ对Ｔａｔ自古以来生具有很强的抑制作用，其抑制程度与反义ＴＡＲ中联体的     

用微量单管RT-PCR快速检测及定型脊髓灰质炎病毒

介绍一种逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）的简单快速检测和定型脊髓灰质病毒（ＰＶ）的方法，无需提取ＰＶＲＮＡ共用一种缓冲系统，将ＲＴ和ＰＣＲ试剂混合在２０μＬ反应体系中，整个操作可置于一不间断温度循环程度程序中完成，一步法ＲＴ－ＰＣＲ与常ＲＴ－ＰＣＲ及中和抗体试验对ＰＶ的检测结果完全一致，它的检测敏感度可达５ＴＣＩＤ５０／ｍＬ，该法需要时间，费用和污染的都大大减少，而且特别适于临床常规诊断和鉴别     

PCR和原要交技术检测鼻咽癌石蜡组织中HHV—6DNA

目的：为了解人疱疹病毒６型（ＨＨＶ－６）与鼻咽癌（ＮＰＣ）的可能关系，检测了ＮＰＣ发生不同阶段的石蜡组织中ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。方法：采用ＰＣＲ、斑点杂交和原位杂交技术，共检测了４２例鼻咽癌石蜡组织、２１例鼻咽癌前病变石蜡组织和２７例正常鼻咽石蜡组织ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。结果：通过ＰＣＲ扩增，在４２全ＮＰＣ组织中检出１３例存在ＨＨＶ－６ＤＮＡ，占３１％；２１例鼻咽癌前病变组织中１例阳性     

通用引物PCR方法检测生殖道HPV

目的：通用引物ＰＣＲ技术检测生殖道人乳头瘤病毒。方法：根据国外献报道的基因序列选出一对寡核苷酸引物，其扩增片断为４５０ｂｐ。结果：在４５０ｂｐ处出现ＤＮＡ扩增带为阳性，用于临床标本的检测，其阳性率为３０％（２９／９６）。结论：通用引物ＰＣＲ技术检测生殖道ＨＰＶ－ＤＮＡ快速，敏感，可靠。     

马立克氏病病毒疫苗CV1988株囊膜糖蛋白gI基因的序列分析

根据马立克氏病病毒（ＭＤＶ）国际标准株ＧＡ株的基因序列设计合成了可扩增ｇＩ基因（１０６０ｂｐ）的引物，用ＰＣＲ技术，以ＣＶ１９８８基因组为模板，扩增得到了预期大小的ＰＣＲ产物，将此ＰＣＲ产物和ｐＵＣ１８经同样的限制性内切酶ＫｐｎＩ和ＢａｍＨＩ处理后，连接、转化、鉴定，得到了含有ｇＩ基因的质粒。将此质粒进行序列分析，比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性，用ＤＮＡａｓｔａｎ软件对其编码的氨基酸的疏水性     

PCR和原杂交技术检测鼻咽癌石蜡组织中HHV-6DNA

为了解人疱疹病毒６型（ＨＨＶ－６）与鼻咽癌（ＮＰＣ）的可能关系，检测了ＮＰＣ发生不同阶段的石蜡组织中ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。方法：采用ＰＣＲ、斑点杂交和原位杂交技术，共检测了４２例鼻咽癌石蜡组织、２１例鼻咽癌前病变石蜡组织和２７例正常鼻咽石蜡组织ＨＨＶ－６ＤＮＡ的存在情况。结果：通过ＰＣＲ扩增，在４２例ＮＰＣ组织中检出１３例存在ＨＨＶ－６ＤＮＡ，占３１％；２１例鼻咽癌前病变组织中１例阳性（４７％），而２７例正常鼻咽组织中无一例阳性。斑点杂交的结果表明ＰＣＲ扩增是ＨＨＶ－６特异的。原位杂交发现，在１３例ＰＣＲＨＨＶ－６阳性的ＮＰＣ组织中１１例ＨＨＶ－６ＤＮＡ阳性。ＨＨＶ－６ＤＮＡ主要分布于癌巢的肿瘤细胞核内，少数亦可见于癌旁的异型细胞，但在淋巴细胞及正常上皮细胞内未发现阳性信号。结论：本实验用分子生物学技术首次证明，在中国ＮＰＣ患者的鼻咽石蜡组织中存在ＨＨＶ－６。ＨＨＶ－６与ＮＰ相关，并有可能在ＮＰＣ的癌变过程中起一定的作用     

用原位PCR方法检测培养细胞中的单拷贝SRY基因

以原位ＰＣＲ方法在培养的ＨＩＣＭＡ细胞中进行了Ｙ染色体上单拷贝ＳＲＹ基因的原位扩谱，并使用ＰＣＲ方法制备的地高辛标记探针原位检测了所扩增的片段，比较研究表明，原位ＰＣＲ法较之直接的原位杂交法，其灵敏度提高５倍以上。     

用PCR扩增和克隆鸡贫血病毒衣壳蛋白VP2基因

接种鸡贫血病毒（ＣＡＶ）Ｃｕｘ－１毒株于ＭＤＣＣ－ＲＰ１细胞中,并用经狄高辛标记的ＣＡＶ衣壳蛋白ＶＰ１基因克隆ＤＮＡ作为探针在斑点杂交中检测和比较了各代细胞中ＣＡＶ ＤＮＡ水平。通过聚合酶链式反应（ＰＣＲ）,从ＣＡＶ ＤＮＡ水平较高的ＭＤＣＣ－ＲＰ１细胞基因组ＤＮＡ中扩增出ＣＡＶ衣壳蛋白ＶＰ２基因片段约６５０ｂｐ的编码序列,将该ＰＣＲ扩增的产物于ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎＩ位点克隆到ｐＵＣ１９质粒载体中,     

运用PCR技术检测育龄妇女宫颈分泌物中沙眼衣原体感染

运用ＰＣＲ技术检测育龄妇女宫颈分泌物中的沙眼衣原体。方法：根据国外报道的ＣＴ基因序列，利用计算机辅助设计选出一对寡核苷酸引物，扩增片段为５１０ｂｐ。结果：运用经改进完善后的ＰＣＲ技术检测育龄妇女宫颈分泌物中ＣＴ的阳性率为１４．８％，扩增的灵敏度为０．１ｆｇ／μｌ，划性为１００％。结论：ＰＣＲ技术检测ＣＴ感染快、简便、特异性强、灵敏度高。     

HSV1-tk基因的部分DNA序列分析

采用ＰＣＲ技术从商品质粒ｐＨＳＶ１０６扩增出ＨＳＶ１－ｔｋ基因（１１２８ｂｐ）,ＰＣＲ产物用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切后定向克隆至真核表达载体ｐｃＤＮＡ３,然后以重组质粒ｐｃＴＫ为模板ｔｋ基因的５端引物为ＤＮＡ测序引物进行部分ＤＮＡ序列分析,部分ＤＮＡ序列分析证明ＰＣＲ产物为ＨＳＶ１－ｔｋ基因正确无误,成功筛选到ＨＳＶ１－ｔｋ基因的真核表达载体ｐｃＴＫ,并为利用ｔｋ基因在实验动物体内进行自杀性基     

PCR技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素D基因

根据金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的序列,设计相应的引物,建立检测金黄色葡萄球菌肠毒素Ｄ基因的ＰＣＲ技术。利用该方法可从含有肠毒素Ｄ基因的金黄色葡萄球菌中扩增出ＰＣＲ产物。扩增产物具有特异性,长为３１６个碱基对。经限制性核酸内切酶ＨｈＩⅠ酶切证实扩增产物为ＳＥＤ基因片段。     

α—珠蛋白基因的PCR检测

用多对引物的复合ＰＣＲ技术，分别扩增α－珠蛋白基因族中α１和α２基因片段；参照β－珠蛋白基因ＰＣＲ扩增产物量，判断α１和α２基因是否正常，是否为缺失的纯合子或杂合子，对α－地中海贫血症先征者家系基因型进行ＰＣＲ分型诊断。     

日本脑炎病毒（JEV）内蒙古分离株M73—1E基因的5′端？…

根据国外报道的ＪＥＶ（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｅｎｃｅｐｈａｌｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ）基因组全序列,针对ＪＥＶ Ｅ基因５′端设计合成一对特异引物,以日本脑炎病毒内蒙古分离株Ｍ７３－１ＲＮＡ为模板,经ＲＴ－ＰＣＲ扩增,获得３６６ｂｐ的ＪＥＶ Ｅ基因ｃＤＮＡ片段。将此片段重组于质粒ｐＵＣ１９中,并转化大肠杆菌ＤＨ５α,经ＰＣＲ扩增,酶切及序列分析,结果表明ＪＥＶ Ｍ７３－１ ５′端１２６个核苷酸序列与ＪＥＶ日     

HIV感染及疾病进展,宿主遗传和免疫保护机制的细胞？…

宿主的免疫和遗传因素对接触ＨＩＶ后的结果和其后ＨＩＶ病的发展都起着重要的作用。ＨＩＶ主要是靠ｇｐ１２０与靶结构的ＣＤ４分子结合而进入细胞内的，而病毒与靶细胞膜的融合是通过ｇｐ１２０与共受体ＣＣＲ５（趋化因子受体）结合来完成的。现已证明，３２ｂｐ缺失的突变ＣＣＲ５基因（ＣＣＲ５－△３２）不但影响宿主对ＨＩＶ感染的第三性而且还影响ＨＩＶ感染个体的疾病进展。突变ＣＣＲ纯合子显示出对ＨＩＶ感染的完全性保护     

PCR法检测小鼠自身携带的细小病毒

小鼠是 2种细小病毒ＭＰＶ和ＭＶＭ的终宿生。它们均可感染淋巴细胞 ,抑制体内肿瘤形成 ,污染细胞培养。由于细小病毒感染会干扰研究结果 ,因此确定小鼠感染ＭＰＶ还是ＭＶＭ是很重要的。本研究的目的是建立检测排泄物中病毒的ＰＣＲ方法 ,在血清抗体产生之前能够活体检测出ＭＶＭ和ＭＰＶ。排泄物中ＤＮＡ的提取最好用商品化的过柱方法 ,通过增加洗涤步骤帮助去除排泄物中的抑制物。为了提高敏感性 ,比较了4 5个循环扩增排泄物ＰＣＲ和只有 35个循环的组织ＰＣＲ。通过检测 37只来自同一群自然感染ＭＶＭ和ＭＰＶ成年Ｓｅｎｃａｒ小鼠的粪…     

性病淋球菌PCR基因扩增检测方法及应用

本文介绍性病淋球菌ＰＣＲ基因检测方法的研究过程．笔者设计一对对淋球菌隐蔽性质粒ｃｐｐＢ基因有专一性的引物，应用该引物进行ＰＣＲ体外基因扩增．对淋病患者的泌尿生殖道标本可检出３８０ｂＰ特异片段应用该试剂盒检测１２５例性混乱患者与细菌培养法比较，前者检出率２５．６％（３２／１２５），后者仅６．４％（８／１２５）．