限制性内切酶Bsp78I的化学修饰与动力学研究

从Ｂａｃｉｌｕｓｓｐｈａｅｒｉｃｕｓ７８菌中将Ｂｓｐ７８Ｉ纯化到均一程度。测得该酶对ｐＢＲ３２２ＤＮＡ的Ｋｍ值为２．６７×１０＾－８ｍｏｌ．Ｌ＾－１。用对氯汞苯甲酸、磷酸吡哆醛、２，３－丁二酮修饰该酶巯基、赖氨酸、精氨酸残基，结果表明这些基因均与该酶活性有关。     

猪肾胆绿素还原酶活性基因的修饰

报道采用专一性试剂ＤＴＮＢ、ＮＥＭ、磷酸吡哆醛以及２，３－丁二酮对胆素还原酶活性进行修饰，当这几种试剂分别与该反应后，酶活性性大幅度降低；而当预先加入ＮＡＤＰＨ或胆绿素、酶活性明显受到保护，这些结果表明，半胱氨酸、赖氨酸和精氨酸残基与该酶同ＮＡＤＰＨ和胆绿素结合、以及胆绿素还原成胆红素的反应有关，是该酶活性必需的基因。     

磷酸吡哆醛对培养的海马神经细胞形态学的影响

实验观察磷酸吡哆醛对培养的海马神经细胞开矿学的影响,选用妊娠１８dＷｉｓｔａｒ大 鼠胎鼠,采用酶消化法获得单个海马神经细胞,通过原代低密度细胞增减法观察磷酸吡哆醛（ＰＬＰ）对其形态学的影响。结果表明：在浓度为１．１０ｕｍ时,能明显地促进海马神经细胞轴突的伸展,但对树突总长度、每个轴突上的分叉数及胞体的突起数均无明显影响;Ｉｆｅｎｐｒｏｄｉｌ和Ｐｉｃｒｏｔｏｘｉｎ尽管能显著拮抗ＰＬＰ介导的神经细胞轴突     

刺槐幼苗中L-亮氨酸氨基转移酶的提纯和特性

<正>刺槐幼苗中的L-亮氨酸氨基转移酶(EC2.6.1.6,LAT)经热处理、硫酸铵沉淀、Sephadex G-100和DEAE-纤维素柱层析被提纯61倍,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一的带。这种酶的分子量为7×10~4,最适pH为9.0,最适温度为60℃,它对L-亮氨酸的km为2.5mM,对α-酮戊二酸的km为3.5mM;全酶的吸收光谱在230和280nm显示两个主峰,在320和425nm显示两个小峰,透析后320和425nm的小峰基本消失;这种脱辅基酶蛋白无活力,但与100μM磷酸吡哆醛保温1～4h便可恢复活力80～100％,这表示刺槐LAT的辅基是磷酸吡哆醛;一些羰基试剂和底物类似物(二羧酸)能抑制这种酶的活力,除Co~(2+)外,Mg~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)、Hg~(2+)、Fe~(3+)和Al~(3+)对酶活力都无抑制,1×10~(-4)MHg~(2+)和1×10~(-3)M金属螯合剂乙二胺四乙酸(EDTA)对酶无抑制作用暗示,刺槐LAT没有对活力所需要的硫氢基和金属离子。     

含5′-磷酸吡哆醛(辅因子)的酶的固定化

辅因子—5′-磷酸吡哆醛(Pyridoxal phosphate简称PLP)在酶促反应中具有重要的作用。Weetall和Ikeda等分别用PLP与琼脂糖联接进行固定化各种含PLP的酶和直接用琼脂糖来固定化含PLP的酶的研究。本文在前文的基础上,把固定化PLP用于谷氨酸脱羧酶及谷丙转氨酶的固定化,并对其结构功能的相互关系进行探讨。     

吡哆醛催化酮酸转氨化的研究

吡哆醛及其衍生物是酶催化转氨化的活性中心.在酶催化的转氨化过程中涉及到碱去质子化和酸质子化的过程,而酸或(和)碱的引入有可能降低转氨化反应的活化能.因此通过在吡哆醛上引入胺、酸或脲等基团可能得到更加有效的转氨化催化剂.设计合成了一系列的带有不同官能团的吡哆醛催化剂.这些吡哆醛在α-酮酸转氨化反应中展现出了较高的活性且能以较好的收率合成多种氨基酸.该反应条件温和,易于操作,是一种合成α-氨基酸的好方法.     

5′-磷酸吡哆醛高分子衍生物的辅酶功效

5′-磷酸吡哆醛(PLP)与经β-硫酸酯乙砜基苯胺活化的聚乙二醇(PEG)或右旋糖酐(Dx)共价结合,得可溶性5′-磷酸吡哆醛衍生物。用PLP-PEG和PLP-Dx衍生物代替PLP作为谷氨酸脱羧酶的辅酶,谷氨酸脱羧酶活力回复率达18%左右;用甘氨酸封闭的PLP-PEG代替PLP作为辅酶,谷氨酸脱羧酶活力回复率达44%。     

磷酸吡哆醛对H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶Ⅰ活性的影响

为建立DNA拓扑异构酶活性测定方法和探讨磷酸吡哆醛(PLP)抑制肿瘤细胞增殖的可能机制,本实验以DNA琼脂糖凝胶电泳EB荧光法测定了H22肝癌细胞DNA拓扑异构酶I(TOPOI)的活性。结果表明维生素B6的活性形式PLP能有效地抑制TOPOI松弛负超螺旋的作用,且抑制效应与PLP剂量呈正相关。从而证实PLP能明显抑制TOPOI的活性并在分子水平上调节细胞周期活动和肿瘤细胞增殖活动。     

拟南芥中一个与谷氨酰tRNA合成酶相互作用蛋白质的初步研究

利用酵母双杂交系统从拟南芥cDNA文库中筛选到一个与谷氨酰tRN合成酶有作用的假定的吡哆醛磷酸结合蛋白PPB.谷氨酰tRNA合成酶是ABA信号通路中正调节因子.在大肠杆菌中表达和纯化了与预测结果一致的PPB蛋白.构建其核正向表达载体和反向表达载体,转化拟南芥后筛选和鉴定出正向转基因植株.现就对其初步的研究做一个报道.     

禾黑芽枝霉诱变体果胶酶的化学修饰

用乙基碳化亚二胺（ＥＤＣ）、二乙基焦碳酸（ＤＥＰＣ）、磷酸吡哆醛（ＰＬＰ）、过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）、三硝基苯磺酸（ＴＮＢＳ）、对氯汞苯甲酸（ＰＣＭＢ）、Ｎ－经琥珀酰亚胺（ＮＢＳ）、碘乙酸（ＩＡＣ）和二硫基二硝基苯甲酸（ＤＴＮＢ）分别对禾黑 霉本的三种果胶裂解酶（ＰⅠ，ＰⅡ，ＰⅢ）进行了化学修饰，紫外可见光谱的实验结果证明，各种试剂都与果胶酶氨基酸特定残基共价结合，大多数氨基酸残基的化学修饰对果胶酶的     

对固定化大肠杆菌谷氨酸脱羧酶生产γ-氨基丁酸的研究

用海藻酸钠—戊二醛法固定产谷氨酸脱羧酶的大肠杆菌As 1.505细胞,在37℃0.2 MpH 4.0醋酸缓冲液中,能催化L-谷氨酸(glu)裂解为γ-氨基丁酸和二氧化碳(CO_2)。固定化细胞在催化反应过程中由于部分辅酶—磷酸吡哆醛(PLP)的脱落而导致酶活力的下降,因此影响了反复使用。本法将固定化细胞在37℃0.05mM PLP溶液中保温2小时,酶活力便获得100%的恢复。     

环三磷腈甘氨酸钠支化衍生化及性质研究

以六氯环三磷腈为原料,分别与甘氨酸钠等系列支化反应,得到了3种环三磷腈甘氨酸钠支化衍生物.利用红外光谱、核磁共振波谱对化合物的结构进行了表征,详细解析了光谱数据,证实为目标产物.利用紫外-可见光谱、SDS-AGE电泳技术分别考察了衍生物对信号分子激活剂-磷酸吡哆醛、Cu2+的识别性能及与小牛血清蛋白的相互作用关系.结果表明:支化衍生物对信号分子激活剂-磷酸吡哆醛及金属Cu2+均具有明显的识别功能;支化衍生物与人体内的蛋白质及生物大分子等有较强的结合能力.     

合成5’-磷酸吡哆醛的简便方法

一、前言5’-磷酸吡哆醛(PLP)的化学名为:2-甲基-3羟基-4-甲醛-5’羟甲基吡啶磷酸酯,其结构式如下:     

利用超分子体系模拟生物体G蛋白耦联受体型信号转导过程

以生物体G蛋白耦联受体型信号转导过程为模拟原型,利用自组装方法构建了具有分子间信号转导能力的超分子体系。带正电荷的肽脂质分子与人工受体共同形成脂质体,乳酸脱氢酶(LDH)(效应器)通过静电作用吸附到脂质体上,乳酸脱氢酶的竞争性抑制剂(Cu2+)抑制LDH活性(相对酶活性为11.6%),进而共同组成了一个酶活性处于关闭状态的超分子系统。向超分子体系中加入信号分子——磷酸吡哆醛(PLP)后,PLP通过静电作用吸附到带正电荷的脂质体表面,并与人工受体形成希夫碱;希夫碱与LDH竞争铜离子,解除铜离子对LDH活性的抑制,恢复LDH的催化活性,使相对酶活性达到83.0%。实验结果表明,超分子体系完成了从信号分子到效应器(酶)活性变化的信号转导过程,可以利用超分子体系构建调控酶催化活性的超分子器件。     

氨基酸系列希夫碱的生成与分解研究

合成了甘氨酸(Gly-Schiff base)、DL-丙氨酸(DL-Ala-Schiff base)、L-苯丙氨酸(L-Phe-Schiff base)、L-谷氨酸(L-Glu-Schiff base)、L-天冬氨酸(L-Asp-Schiff base)及L-色氨酸(L-Trp-Schiff base)等6种氨基酸水杨醛希夫碱及其金属铜配合物,研究了其紫外-可见电子吸收光谱.分别在酸碱条件下对氨基酸水杨醛铜配合物进行了分解实验,并选取DL-丙氨酸代替人工信号转导系统中的脂双层膜,与5’-磷酸吡哆醛进行络合形成类似天然磷脂和磷酸吡哆醛的复合体,为下一步构建细胞信号转导过程中的可逆的化学模型作了相关的基础性工作.     

三角帆蚌碱性磷酸酶的初步研究

从三角帆蚌外套膜中,部分提纯了一种碱性磷酸酶(AKP),并对AKP的某些性质进行了初步研究。该酶作用于底物磷酸苯二钠,测定其最适pH值为10.1,最适温度为40℃,Km值为1.82×10~(-3)mol/L。分别测定了某些化学试剂对该酶的作用:Mg~(2 ),Ca~(2 )离子对AKP有不同程度的激活,尤以Mg~(2 )的作用明显;KH_2PO_4,L-Phe,L-Cys,ME(巯基乙醇),DFP(二异丙基氟磷酸)和EDTA-Na均对AKP有不同程度的抑制作用,其中L-Cys和ME抑制作用最为强烈。KH_2PO_4对AKP的作用属于竞争性抑制,而DFP属于非竞争性抑制。     

产甘油假丝酵母中α-磷酸甘油酯酶的表达特征

α-磷酸甘油酯酶催化甘油生成的最后一步反应的酶，该酶具有高度的底物专一性。本文研究了甘油发酵动态过程中该酶的表达情况与甘油的产量和残糖之间的关系，发现在整个甘油发酵过程中，该酶在36h处出现峰值，随后就逐步下降。     

菠萝焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶的分离纯化及性质研究

应用硫酸铵分级分离、DEAE-纤维素、Sephadex G-200、磷酸纤维素柱层析分离纯化了菠萝叶片焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP).凝胶过滤和非变性聚丙烯酰胺梯度电泳测定酶的分子量为132kD和140kD,SDS-聚丙烯酰胺电泳分析得到一条分子量为66kD的蛋白主带,表明该酶可能是由同种亚基组成的二聚体.此外,还对该酶的部分酶学性质进行了初步研究.     

文昌鱼ALPase底物特异性及其效应物对酶活力的影响

研究了文昌鱼碱性磷酸酶的底物特异性,测定酶催化几种单核苷酸和磷酸酯化合物水解反应的Kcat/Km值,酶对单核苷酸的新和力大小依次为3’-AMP>3’-UMP>3’-CMP>3’-GMP=2’-AMP>ε-AMP>5’-CMP>5’-AMP,研究效应物对酶水解对-硝基苯磷酸的影响表明:无机磷酸盐、砷酸盐为竞争性抑制,L-?丙氨酸为反应竞争性抑制,L-半胱氨酸、二巯基苏糖醇为混合型抑制;并测定于它们的抑制常数。     

金属离子对棉铃虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶活力的影响

研究了金属离子对棉铃虫N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC3．2,1．52）活力的影响．结果表明：Na^＋、K^＋和Li^＋等金属离子对酶活力没有任何影响；在指定范围内，Mg^2＋和Ca^2＋对酶活力影响不显著；Zn^2＋、Cu^2＋和Al^3＋对该酶有不同程度的抑制作用．进一步研究Cu^2＋和Al^3＋的抑制作用动力学，结果表明：Cu^2＋对该酶的抑制作用是一种可逆过程，抑制机理表现为混合型，抑制常数Kt为0．23mmol／L，K1s为1．49mmol／L．Al^3＋对该酶的抑制作用是一种可逆过程，抑制机理表现为竞争性类型，抑制常数Kt为6．42mmol／L．