高效回收琼脂糖凝胶中质粒DNA的方法

多年来,在基因工程操作中所采用的几种从琼脂糖凝胶中回收DNA的方法不同程度地存在着各种问题。从琼脂糖凝胶中分离和提取DNA的方法具有简便快捷、成本低和效率高等优点,可直接用于各种分子克隆操作,是一种切实可行的方法。     

一种从琼脂糖凝胶中回收高温链霉菌DNA的有效方法

采用低速离心法结合亚精胺特异沉淀DNA的方法，从琼脂糖凝胶中回收到浓度较高的高温链霉菌Sau3AI部分酶切总DNA，回收率大小于30％，节省了使用酶量，提高了DNA的纯度，且易操作，有广泛的适用性。     

绵羊全血中DNA的微量提纯

介绍一种快速，简便地从绵羊冰冻全血中提取高纯度，大分子量ＤＮＡ，并适合边远地区实际室操作的ＤＮＡ提取方法。     

液氮速冻法快速回收小分子DNA片段

介绍一种高效回收小分子DNA片段的方法,只需两个离心管及一块玻璃棉纸,凝胶速冻后简单离心即可回收DNA.实验证明这种回收DNA的方法具有简便快捷、成本低和效率高等优点,是一种切实可行的方法.     

乙醇沉淀法回收微量DNA效率的研究

本文研究了浓度、温度、时间和携带DNA等因素对乙醇沉淀法回收微量DNA效率的影响。结果表明:1.回收效率与DNA浓度呈正相关。2.添加携带DNA能提高低浓度DNA的回收效率,浓度越低,增加比例越大.3.超低温(-70℃)、长时间(12h)冷冻处理,对回收效率无明显影响,在室温(+20℃)或低温(-20℃)下放置2～30min同样可获得较高的回收率。     

从微量血中快速制备线粒体DNA片段

目的　建立并鉴定用于从微量血中快速制备线粒体DNA片段的技术 .方法　采用微量血样品 ,改进提取线粒体DNA的方法 ;以不同的方法提取的血DNA为模板 ,同时扩增nDNA上的基因片段和mtDNA上的基因片段 ,PCR相对定量分析比较各种方法提取的mtDNA片段的纯度 ;结果　用华美公司生产的ReadyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统和作者的方法都得到了mtDNA ,而用作者的方法获得的mtDNA的纯度较高 ;结论　由于线粒体DNA与核DNA存在有同源片段 ,ReadyPCR(tm)微量全血DNA纯化系统和常规酶解法提取DNA不适合用于对mtDNA的鉴定 ,作者的方法简便快捷地排除了核DNA的污染 ,非常适合于对mtDNA进行PCR分析 .     

纳米银颗粒增强聚合酶链式反应长片段DNA反复扩增的特异性

基因操作者经常需要把数量稀少的DNA样品进行反复扩增以供进一步研究之用.在反复扩增过程中,上一次扩增产物当作下一次扩增的模板使用.对于较短的DNA片段(几百个碱基),一般反复扩增不会遇到特别的困难;但是较长DNA片段(几千到几万个碱基)的反复扩增一般会极大地降低聚合酶链式反应(PCR)的特异性.实验中发现,当扩增较长片段基因时,在常规PCR热循环体系中添加粒径平均为70 nm的银颗粒,使反应体系纳米银颗粒浓度达到0.1～1.2μg/μL,可以在一定程度上保持PCR反复扩增反应的特异性.其机理之一可能是常规PCR反应体系在添加了纳米银颗粒后改善了溶液的导热性能.     

限制性酶切DNA片段的计算机辅助测量

文中对几种测量限制性内切酶解DNA片段大小方法的测量精度进行了比较。在所讨论的方法中有手工半对数作图法、线性回归、组合线性回归、拉格朗日插值法、Southern法及改进的分段函数法和其计算机计算程序。用以上方法检验了λDNA/HindⅢ+EcoRⅠ酶切片段的测量精度,并测量了pSaA基因限制性内切片段大小。结果表明改进的分段函数法给出最小标准方差(Sd)及最优测量一致性。     

一种从聚丙烯酰胺凝胶上回收DNA片段的简易方法

从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段是分子生物学中的常用技术，本文在对目前几种常用回收方法作深入细致分析的基础上通过设计对比实验找到一个既简单又经济、实用而有效的回收方法。     

琼脂凝胶中氯化铵结晶生长的形态转化

为了在同一系统中通过改变外部条件得到目前所报道的一些典型的远离平衡态下的几种凝聚形态，研究了NH4Cl在琼脂凝胶中的枝晶生长，实现了在其生长过程中通过改变条件得到不同的形态变化．结果表明，NH4Cl起始质量分数对其结晶形态产生明显的影响，随着起始NH4Cl质量分数的减少，晶体生长形态的不规则程度增加，逐渐由枝晶过渡到密枝；在一定条件下，普通枝晶生长完成以后其生长形态转变为近来人们很感兴趣的曲折(zigzag)结构．产生这种形态转化的原因是琼脂中的NH4Cl结晶有分层生长的现象，随着琼脂凝胶水分的不断蒸发和琼脂表层的干燥和收缩，NH4Cl先在琼脂表层形成枝晶，然后过渡到在琼脂下面结晶成zigzag结构，在不同的结晶层面，生长的结晶体形态不一样．     

Comparative Studies on Preparation of Large Plant DNA Fragments by Pulse Field Gel Electrophoresis

The preparation of large plant DNA fragments is extremely important to the construction of large insert DNA libraries (YAC, BAC, PAC and TAC). Although several techniques have been developed in each step of large plant DNA fragments preparation, the whole processing remains complicated and difficult. Based on authors‘ research experience and the recent worldwide development in this field, the following aspects are discussed in this paper: techniques of plant high molecular weight (HMW) DNA purification by pre-electrophoresis, the optimal conditions for the partial digestion of the HMW DNA by HindⅢ, the isolation effects of of large plant DNA fragments (100-400 kb) with different parameters of pulse field gel electrophoresis (PFGE), and the recovery of large DNA fragments. Through comparative studies, the advantages and disadvantages of each technique are discussed and some recommendations are proposed for preparing high quality large plant DNA fragments. The suggested techniques have been used in preparing the large DNA fragments of maize, rice, moss, laver, sea tangle and peach, and similar resuits are obtained among all the materials. This paper only reports the results using maize as material.     

Matlab在凝胶图像分析中的应用

凝胶电泳是当今分子生物学的一项最基本的试验技术,它的原理十分简单,但是通常只能通过目测marker的位置或是计算电泳率来得到样品的分子量,这样得到的结果是十分粗糙的.利用Matlab软件进行编程,提供从图像处理到数据拟合的一系列方法.采用公式f(x)=a×exp(b×x) c×cxp(d×x)进行数据拟合,可以通过拟合出的曲线精确测定样品的分子量大小,且所有实验数据都在误差范围内.     

从土壤中快速提取纯化DNA方法的建立

比较了从土壤中提取及纯化DNA的不同方法,确立了TENS-乙酸铵提取方法和PVPP柱层析的纯化方法.结果显示:TENS-乙酸铵提取方法对不同土壤均有较好的提取效果,DNA片段长度在23.1 kb以上,且无明显降解;PVPP柱层析的纯化方法比胶回收纯化方法的DNA回收效率高、质量好,可用于PCR扩增.     

一种简便有效的PCR扩增片段直接回收克隆方法

作者提供一种简便快速的克隆方法,即直接对琼脂糖凝胶电泳分离的PCR产物进行克隆,可获得较高的阳性克隆率.结果显示,300～700 bp大小的片段阳性克隆率为70.72%,300 bp以下和大于700 bp的片段阳性克隆率分别达到60.38%和45.33%.该方法适用于含有大量不同大小DNA片段的PCR产物并需要同时对其进行回收和克隆的样品,不仅可以大大简化实验过程,也可以降低假阳性出现的机会.     

从蔷薇科果树硅胶干燥叶片中制备DNA

以6种蔷薇科主要树种特别是杏属植物为试材，从DNA提取、模板DNA电泳分析、RAPD扩增和S-基因型特异PCR4个方面对硅胶干燥的样品与传统液氮冷冻的样品进行了综合对比研究，结果表明：硅胶保存的样品完全可以与传统液氮冷冻的样品得到同样的PCR扩增结果，甚至在减小褐变影响方面优于后者，且干制样品的DNA纯度均比液氮速冻样品高。研究表明，用硅胶干燥法保存的植物样品可以满足后期有关RAPD等分子生物学研究的需要，且能保证野外考察时植物样品的DNA在运输过程中不被降解。