聚乙二醇介导细胞融合的优化条件探究

细胞融合技术是细胞工程中的一项核心基础技术,聚乙二醇(PEG)是最常用的促融剂,广泛地被应用于农业、医药、环保等多个领域。探讨更符合细胞工程要求的、融合后的细胞更大限度地保持生理活性的、快速、有效的细胞融合条件。以牛红细胞为实验材料,PEG作促融剂介导牛红细胞融合,研究不同的融合温度、PEG作用时间、PEG的相对分子质量和PEG的质量分数等因素对细胞融合率的影响。实验结果表明,选择融合温度为39℃,时间为15min,选用相对分子质量为2000、质量分数为45%的PEG,可以在细胞受毒害较小的同时得到最佳的融合效果,融合率能达到21.26%.     

离心力诱导细胞融合

贴壁生长的BHK-21细胞或IB-RS-2细胞分别用胰酶或胰酶与EDTA混合液消化成单细胞,用聚乙二醇(PEG)或适宜温度(30℃)下的离心力诱导BHK-21细胞或BHK-21与IB-RS-2细胞融合。从细胞形态与融合频率两方面显示出PEG与离心力都能引起细胞融合,几个离心力组的融合频率比PEG组低,但几个离心力组的细胞损伤比PEG组为轻。这说明了物理因子也能像生物、化学因子那样诱导细胞融合,并初步讨论了融合机理。     

细胞融合技术及其进展

自1958年Okada首次表明紫外灭活的仙台病毒可以诱导体外培养细胞融合形成多核体以来。细胞融合技术得到了迅速发展和应用。以聚乙二醇(PEG)为代表的化学融合方法在生物、遗传、医药学等研究领域取得了可喜的成绩。自1978年报道电脉冲诱导细胞融合成功以来．Zimmermann及其同事将细胞电介质电泳引入诱导细胞间接触,创立了物理的实用的Zimmermann电融合法。现在,电融合法已由非特异性的细胞电融合发展为特异性电融合法。激光诱导细胞融合技术成为目前的研究热点．但此项技术尚处于发展初期,有待于进一步完善。本综述了PEG化学融合法．电融合领域的新进展和激光诱导细胞融合技术。     

逆境胁迫对拟南芥细胞质、叶绿体和细胞外ATP水平的影响

利用荧光共振能量转移的ATeam蛋白作为ATP生物传感器,建立检测拟南芥细胞质、叶绿体和细胞外ATP的检测体系,研究植物在不同非生物胁迫(NaCl、 PEG 6000和低温)下细胞质、叶绿体和细胞外ATP水平的变化.结果表明,在较高强度的胁迫(200 mmol/L NaCl、 10%～20%w(PEG6000)和0～4℃)下,细胞质ATP水平下降.在各水平PEG 6000胁迫下,叶绿体中ATP水平保持稳定; 10℃低温处理导致叶绿体中ATP水平升高, 200 mmol/L NaCl处理导致叶绿体ATP水平下降,其他强度的NaCl以及低温处理未显著改变叶绿体ATP水平.在中等强度的NaCl和PEG 6000胁迫(100 mmol/L NaCl和5%～10%w(PEG 6000))下,细胞外ATP水平升高; 4～10℃低温胁迫处理导致细胞外ATP水平下降.     

PEG浸种对麻疯树种子萌发状况及脂类成分的影响

以低场核磁共振无损检测麻疯树种子的含油率,发现高含油率(40%～45%)种子的发芽率、发芽势及发芽指数均高于低含油率(30%～35%)种子;PEG浸种处理降低了种子的吸胀速率、发芽率、发芽势及发芽指数;干旱胁迫对低油种子的影响大于高油种子,说明麻疯树种子的脂类成分对种子的萌发表现及抗旱性有重要作用.麻疯树种子脂类成分~1H-NMR图谱的主成分分析PCA分析结果显示,PEG浸种处理提高了种子中不饱和脂肪酸的含量,降低了饱和脂肪酸的含量;不同含油率种子中脂类成分在PEG浸种处理后出现差异.     

化学聚集电融合法在新型酵母构建中的应用

在细胞融合过程中化学聚集电融合法,即用PEG作为聚合剂与电融合法连用,取得明显的效果。其条件是:电压11kV;脉冲宽度5μm;脉冲个数3;脉冲时间59s;温度4℃;PEG浓度35％;处理时间30min;处理温度30℃及pH6.从细胞体积,DNA含量,淀粉糖化能力及葡萄糖发酵能力等方面说明,所获得的新型酵母菌株是两亲本的融合株。     

聚乙二醇诱导细胞融合影响因素探究

以鸡红血细胞为材料,聚乙二醇(Mr=4 000)为诱导剂,研究不同的细胞密度、聚乙二醇体积分数、Ca2 浓度等因素对细胞融合率的影响,结果显示:细胞密度为(3.0~4.0)×104/mL,聚乙二醇的体积分数为50%,Ca2 浓度为50mmol/mL时融合效果最好,融合率高达29.76%.     

赖草PMC细胞融合现象的研究

文章报道了赖草(Leymus scaline)花粉母细胞(PMC)的细胞融合现象.结果表明,细胞融合主要发生在间期、终变期.间期发生细胞融合主要是细胞质转移,因此不会产生明显的遗传学效应.终变期细胞融合主要是染色体的迁移,其细胞遗传学效应主要是造成供体和受体细胞的染色体数目变化,从而产生了非整倍体配子.文章还对细胞融合产生的原因进行了讨论.     

渗透调节法处理花生种子对提高活力和核酸代谢的影响

应用20%PEG 6000(聚乙二醇)处理花生种子,可以促进萌发,增加幼苗生长量.种子经6小时PEG 处理,总~(32)P 吸收量和掺入RNA 的~(32)P 水平均有所增加,可见播前PEG 处理可促进与萌发有关的过程,“RNA 掺入~(32)P 量/总~(32)P 吸收量”比值以PEG 处理2天的为最高,3—5天处理的反而有所下降,从种子萌发效果看,PEG 处理2天是较适时间.     

果蝇胚胎细胞无血清培养

本文报告了以聚乙二醇(PEG)为添加物而进行的果蝇胚胎细胞无血清培养的研究,结果表明:PEG具有促进脂肪体细胞发育和细胞增殖的作用,并简单讨论了PEG的这种作用机理.     

聚乙二醇对羟基磷灰石作用的研究

为了解决沉淀法制备羟基磷灰石的团聚问题,本实验在胶体烘干前加入适量的分散剂聚乙二醇(PEG),通过TEM,XRD检测羟基磷灰石粉体,结果表明:当加入PEG为n(HAP):n(PEG)=10:2,PEG浓度为2%时羟基磷灰石经70℃烘干,600℃煅烧后粉末粒子为柱状,团聚体少,长约40nm,宽约20nm.     

聚乙二醇对血红蛋白离子交换层析行为的影响

研究作为共溶剂的聚乙二醇(PEG600和PEG4000)在离子交换层析法纯化血红蛋白过程中对血红蛋白层析行为的影响.预处理后的牛血红细胞破裂液用Q Sepharose Big Beads阴离子交换介质进行层析.层析过程中添加质量分数为0.5%～5.0% 的PEG600或PEG4000,血红蛋白回收率由76%提高到90%以上,血红蛋白纯度略有增加并且其生物活性得到较好地保持,PEG600对血红蛋白层析的保留时间影响不大,PEG4000使血红蛋白的层析保留时间增加,增加强度与PEG的浓度之间呈正相关,并用共溶剂理论对上述结果进行了讨论.     

PEG 6 000胁迫条件下华北八宝愈伤组织中抗氧化酶活性的变化

以华北八宝Hylotelephium tatarinowii(Maxim.)H. Ohba愈伤组织为材料,采用不同质量分数的聚乙二醇(PEG)6 000进行胁迫处理,分别测定愈伤组织中过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性变化,通过非变性聚丙烯凝胶电泳分析POD、SOD和酯酶(EST)的同工酶表达特征.研究结果表明,在PEG 6 000质量分数为0.5%~5.0%时,随着质量分数的增加和胁迫时间的延长,POD、SOD和CAT的活性逐渐增强,且愈伤组织生长良好;当PEG 6 000质量分数为8.0%时,随着胁迫时间的延长,POD、SOD和CAT酶活性急剧下降.     

PCC技术及其在辐射细胞学上的应用

用M期细胞同间期细胞融合以诱导间期核染色质提前浓集的技术叫做PCC技术.PCC技术可以诱导间期细胞出现各种不同时相的具有一定形态的PC染色体.PC染色体诱导成功的先决条件是细胞融合率高.提高细胞融合率决定于融合剂的选择、Ca离子浓度和pH值高低.我们过去的试验表明:选用PEG作融合剂并在培养液中加入0.2—0.4mg/ml氯化钙,pH调到8—8.2时有较高的PCC诱导率.PCC技术在辐射细胞学上的应用主要有三个方面:①作为一种较敏感的染色体损伤检测法,它能检测出M期无法察觉的或M期已经消失的间期染色体损伤.②、通过制作更精细的染色体谱带以正确定位染色体的断裂点和突变基因的座位.③.用以直接观察非S期修复合成的细胞学图象.     

不同电场强度和原生质体密度对马苓薯和薯蓣细胞融合效率的影响

体细胞电融俣技术因其融合效率高、对细胞无毒害作用而愈来愈普遍地用于细胞工程技术操作中。为了准确地确定实验参数，试验采用一个组的电融合仪和自制平行电极，以马苓薯和薯蓣为材料，研究了在不同原生质体密度和不同电场强度件下的细胞融合效率。试验结果显示，以交变电场频率1．0MHz、电压140Vpp.cm^-1处理原生质体20－40秒，尔后施加瞬时直流高压（120kv)脉冲1－2次，可以获得73．5％－76．7％的融合细胞，其中11．5－14．4％的融合细胞可发生正常分裂。在本试验设计范围内，电场强度对细胞融合频率的影响主要表现在融合细胞能否发生分裂，而初始融合频率在各处理间无显著差异。     

2种盐与PEG4000组成的双水相体系及其对BSA萃取的影响

通过对PEG4000-NaH2PO4和PEG4000-(NH4)2SO4双水相体系最佳条件的确定,研究双水相体系对BSA萃取的影响.考察NaH2PO4、(NH4)2SO4、PEG4000的质量分数,BSA的质量浓度对双水相形成以及牛血清白蛋白分配行为的影响.结果表明,PEG4000-NaH2PO4双水相系统中w(PEG4000)=10.50%,w(NaH2PO4)=20%,回收率最大为89.4%;PEG4000-(NH4)2SO4双水相系统中,w(PEG4000)=12%,w((NH4)2SO4)=17.50%,回收率最大为91.5%.PEG4000-(NH4)2SO4双水相体系比PEG4000-NaH2PO4更易分离纯化得到大量目标蛋白质.     

多花胡枝子对干旱胁迫的生理响应初步研究

实验采用聚乙二醇6000(PEG6000)在室内模拟干旱条件,研究不同程度干旱胁迫对多花胡枝子相对含水量、相对电导率、丙二醛(MDA)、叶绿素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力和脯氨酸含量的影响,旨在探求其在沙质条件下的生存能力.结果表明:随着干旱胁迫的加强,电导率和丙二醛(MDA)明显增加,而叶绿素含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和叶片相对含水量均呈显著下降趋势.以30%PEG6000处理对多花胡枝子的伤害最大.在胁迫处理12h,30%浓度处理的植株电导率高至(50.7%)比对照组高13.4%;SOD活性最低为100.4 U/g;在胁迫处理24h时,10%浓度处理的植株脯氨酸含量高达1 024 Ug/g,此后逐渐降低;在处理48h时,30%浓度处理的植株MDA含量为17.58 nmol/g,高于其他胁迫处理.在PEG6000处理过程中,处理0~12h为植株的抗性阶段,处理12~48h为植株的耗尽阶段.可见,在干旱胁迫下,多花胡枝子可以通过改变体内物质含量来提高抗性,渡过逆境.     

干旱、盐胁迫对济麦22生长及CKX4基因表达的影响

为探究逆境胁迫对小麦生长发育以及CKX4基因表达情况的影响,以济麦22为试验材料,测定不同浓度PEG干旱胁迫和NaCl盐胁迫下济麦22的生长量、叶绿素含量、根细胞活力、叶绿素荧光参数以及Ta CKX4基因表达量.结果表明:胁迫处理后的各生理指标与对照相比差异具有统计学意义,其中40％PEG胁迫下济麦22幼苗长势最差;济...     

程序性细胞死亡与艾滋病

1.引言 艾滋病(AIDS)是由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一种以细胞免疫功能缺陷为特征的复杂综合征,其发生机制极为复杂,主要包括:(1)HIV感染细胞与未感染细胞融合为合胞体;(2)HIV对T_H细胞的选择性感染和破坏;(3)HIV引起免疫病     

聚乙二醇(PEG)提高油菜种子活力的研究

在10-15℃,油菜种子经20%PEG6000渗透处理后,发芽率、发芽指数、幼苗根鲜重、干重及相应活力指数都有了显著的提高.以PEG处理24-96小时效果最好.PEG处理明显减缓了初始吸水速率,吸胀12小时的含水量与水中吸胀3小时的含水量相当.处理种子浸出液的电导率和紫外吸收值明显下降,其ATP含量都在40×10~(-10)发光强度/克干种子左右,约为对照的6倍.处理种子萌发12小时后,ATP含量约为对照的20倍.