酶联免疫双抗夹心测定Ⅳ型胶原蛋白

目的：建立血清Ⅳ型胶原蛋白（COLW）浓度测定的酶联免疫试验（ELISA）方法,辅助诊断肝硬化。方法：制备过氧化物酶（HRP）-免抗人COLⅣ多抗结合物,作为标记抗体;用棋盘滴定试验确定包被抗体和标记抗体浓度,进行检出限、精密度、回收率、特异性、灵敏度测定和标准曲线的制备;初步用于79例正常人和34例肝纤维化患者。结果：COLⅣ浓度在40~I000μg／L之间时,该法工作曲线最佳,最低检出限为40μg／L,批内异变系数（CV）6．098％,批间CV4．30％,高、低浓度回收率分别为95％和98％。该法测定正常人COLⅣ浓度平均为67.6±24.6μg／L,而肝纤维化患者平均水平为215.96％±96μg／L,可见辅助诊断肝纤维化具有很高特异性和灵敏度。结论：ELISA方法检测定血清COLⅣ简便、特异、准确、价格低廉,可用于肝纤维化辅助诊断并在国内推广应用。     

人风疹病毒IgG抗体时间分辨免疫荧光法的建立

目的：建立人风疹病毒（Rubella virus;RV）IgG抗体时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）的方法。方法：采用间接两步法建立人风疹病毒IgG抗体的TRFIA分析方法,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果：试剂盒的可测范围为5～1601U／ml,灵敏度为0．0921U／ml,批内、批间的变异系数（CV）分别为7．8％和105％;130份血样用本方法与进口的同类试剂盒同时检测,其相关系数为0．926。结论：本试剂盒的各项指标均达到临床检测的要求。     

高活力天冬氨酸酶的分离提纯及性质

采用基因工程技术构建具有较高活性的突变菌株 Ｔ３３， 以它为产酶菌株分离提取天冬氨酸酶， 并研究它的酶学特性． 结果表明， 分子量为 １９０ ０００． 最适反应 ｐ Ｈ＝ ８０， 最适反应温度为 ３７ ℃． 在ｐ Ｈ＝ ６０ 时， 该酶呈负协同效应； 在ｐ Ｈ＝ ８０ 时， 该酶呈正协同效应． 该酶α螺旋度为３６３％     

克鲁维酵母y－85菊粉酶水解菊粉的研究及其中试

克鲁维酵母（Ｋｌｕｖｅｒｏｍｙｃｅｓｓｐ．）Ｙ－８５在菊粉提取液培养基中生长产菊粉酶，其细胞和胞外的菊粉酶活力分别约占菊粉酶总活力的７６％和２４％．试验中以酶发酵液作酶液．该酶的Ｓ／Ｉ值为１５．２．酶液在５０，５５和６０℃下保温１ｈ，活力分别残留１００％，９６％和６５％；在８℃下放置７ｄ，１４ｄ，酶活力分别残留９８％和９６％．在ｐＨ３．６～７．０内，酶活性十分稳定．５ｍｍｏｌＬ－半胱氨酸和Ｆｅ＋２分别可使酶活力提高１０．４％和４１．２％．ｙ－８５菊粉酶水解菊粉的适宜条件是：底物为总糖浓度１０％～１５％菊粉提取液，ｐＨ５．０，温度为５５℃，酶用量为底物每克糖加酶８００ｕ（以蔗糖为底物测酶活力）或２６．３ｕ（以菊糖为底物测酶活力）、搅拌酶解６ｈ．在上述条件上，底物降解率最高可达９８．５％．酶解液中，果糖占总还原糖量的８５％．用１１００Ｌ罐进行酶解中试，５批试验，底物降解率平均达９４．２％．     

大孔树脂固定化葡萄糖异构酶及其动力学研究

研究了用大孔径聚丙烯腈树脂固定化葡萄糖异构酶的方法及固定化酶的性质．固定化酶活力达到４．６２９６×１０－６ｍｏｌ·ｇ－１·ｓ－１左右．同时研究了固定化酶的反应动力学，测得其米氏常数Ｋｍ＝６．００ｍｏｌ·Ｌ－１，最大反应速度Ｖｍａｘ＝１．４０×１０－５ｍｏｌ·ｇ－１·ｓ－１．     

测定转氨酶生物传感器的研究

本文介绍了将固定化谷氨酸氧化酶与过氧化氢有构成的可以测定转氨酶转氨产物谷氨酸含量，从而测得转氨酶活性的生物传感器，谷丙转氨酶在４－１０６Ｕ；谷草转氨酶在２１－１２９Ｕ范围内具有良好的线性关系，回收率ＧＰＴ：９６．５７％；ＧＯＴ：１００．３％，稳定性（ｎ＝１０）：ＧＰＴ：ＣＶ＝０．２０－１．０８％；ＧＯＴ：ＣＶ＝０．３４－１．３０％，经与临床常用方法对比，传感器法的测定结果与全自动分光光度法测定结果     

生物功能电极：Ⅱ.酶修饰电极反应动力学

分别用吸附交联法和共价键合法将葡萄糖氢化酶修饰在破碳电极表面上，并用循环伏安法和旋转圆盘电极技术研究其生物电催化动力学．提出酶修饰电极的界面模型并导出电极上酶促反应的稳态动力学表达式，从而指出由电化学方法测得的固定化酶表观动力学参数的物理意义．讨论了酶修饰电极的电而响应特性与固定化酶的性质、酶电极界面的几何特征、溶液中的传质以及电子传递体在电极基体上的电荷传递动力学等因素的关系．     

抗土霉素单克隆抗体的制备及其在虾中土霉素残留的检测应用

研究目的：抗土霉素单克隆抗体的制备和特性分析，并用于间接竞争酶联免疫吸附测定法（icELISA）分析虾样品中土霉素的残留。创新要点：本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2．4F。研究方法：重要结论：用细胞杂交技术使土霉素．牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC／c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2—4F、7-3G和11-11A），并制备它们的单克隆抗体。通过ieELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度（IC-50）和交叉反应率，明确其灵敏度和特异性。实验结果发现单克隆抗体2—4F具有最高的灵敏度，对土霉素的IC50为7．01ng／ml，且该单抗特异性强，仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应，而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时，其批内和批间回收率分别为82％～118％和96％～113％，变异系数分别为3．9％～13．9％和5．5％～14．9％。因此，单克隆抗体2．4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。     

表皮生长因子间接竞争酶联免疫吸附测定法的建立

目的：建立一种可应用于临床的快速定量测定表皮生长因子含量的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。方法：以重组人表皮生长因子(ECF)为包被抗原和竞争抗原，两与一定量的ECF。抗血清反应，建立检测EGF的间接竞争ELISA方法。结果：理想的包被抗原质量浓度为1μg/mL，ECF抗血清的工作浓度为1：10000，酶标二抗工作浓度为1：3000，可测最适范围为0．5～16ng／mL，最小检测量为0．5ng/mL，批内和批间变异系数分别为6．21％和7．42％。得到回归方程y=-13．65ln(x) 81．554，相关系数R^2=0．997。结论：建立了快速定量检测ECF的间接竞争ELISA方法。     

聚乙烯醇-海藻酸钠共固定化葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶

酶的固定化是提高酶的稳定及降低使用成本的重要途径．通过制备聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠(SA)复合载体,对共固定化葡萄糖氧化酶(GOD)和过氧化氢酶(CAT)的条件进行了研究,优化了固定化酶制备工艺,研究了固定化酶性质．得出制备固定化酶最佳条件为：载体比例 PVA∶SA＝9．0∶1．5,加酶量10 mg/mL,酶活之比CAT∶GOD＝10∶1．固定化酶的最适反应温度为45℃,比游离酶提高了5℃,最适反应pH 没有发生变化,连续使用6次酶活保留60％．研究结果有一定的应用潜力．     

NSTEMI个体化诊疗中同型半胱氨酸、心肌钙蛋白联合检测价值前瞻性研究

目的探讨非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)个体化诊疗中同型半胱氨酸、心肌钙蛋白联合检测的价值.方法前瞻性选取NSTEMI患者86例为研究组,选取同期体检的86例健康人为对照组,采用酶定量法检测血脂指标,ELISA法检测同型半胱氨酸,乳胶增强免疫比浊法检测心肌钙蛋白水平.结果单一同型半胱氨酸、心肌钙蛋白诊断NSTEMI的灵敏度分别为84.88%,95.35%,特异性分别为90.70%,87.21%;两指标联合检测的灵敏度、特异性升至97.67%,98.84%.ROC曲线分析显示:联合检测AUC明显大于单项检测,差异具有统计学意义(P0.05).研究组治疗后TG,LDL-C、同型半胱氨酸、心肌钙蛋白水平均明显低于治疗前,但仍高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05);HDL-C明显高于对照组,但仍低于对照组,差异具有统计学意义(P0.05).同型半胱氨酸含量与TG,LDL-C之间呈明显正向直线相关性(r=0.553、0.377,P=0.000、0.002);同型半胱氨酸含量与HDL-C之间呈明显负相关(r=-0.402,P=0.000).心肌钙蛋白含量与TG,LDL-C之间呈明显正向直线相关性(r=0.637、0.481,P=0.000、0.001);心肌钙蛋白含量与HDL-C之间呈明显负相关(r=-0.402,P=0.000).结论同型半胱氨酸、心肌钙蛋白联合检测可明显提升NSTEMI个体化诊疗的灵敏度和特异性,且与血脂指标存在明显相关性.     

响应面法优化酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的研究

鱼鳞是鱼类加工的下脚料之一,含有丰富的蛋白质和矿质元素等营养物质,是非常好的可利用生物资源. 文中研究了碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的优化工艺. 以ACE抑制率为指标,在酶解温度、酶解pH、加酶量、底物质量浓度等条件下先进行单因素实验,在此基础上运用响应面法优化碱性蛋白酶酶解鱼鳞制备ACE抑制肽的工艺条件. 结果表明:在加酶量61%(约12 000 U/g)、pH 89、温度547 ℃的条件下酶解2 h,ACE抑制率理论值为8536%,实际酶解物的ACE抑制率为862%,相对误差为091%.     

蛋白质酶促水解反应机理与动力学模型

研究蛋白质酶促水解制备生物活性多肽的反应机理与动力学行为，并建模表征不同反应机制的酶解曲线。基于对不同实验条件下反应时程特性的分析，以经典的米氏方程为理论基础，提出了同时考虑蛋白质单底物水解、蛋白酶失活以及底物或产物抑制因素的机理模型，并构建了指数形式动力学方程dh／dt=aexp（-bh），其中参数（a和b对于不同反应机理具有不同的表达形式和确定的数值结果，对于牛血清白蛋白（BSA）-胰蛋白酶（trypsin）模型体系，经实验拟合平均相对误差为4．73％，并求得该体系相应热力学和动力学常数：Km=0．0748g/L，Ks=7．961g/L，Kd=9．358min^-1，K2=38．439min^-1，Ea=64．826kJ／mol，Ed=80．031kJ／mol。所建整套模型可用于蛋白质酶解反应过程的模拟、热动力学常数的计算和生物反应器的优化设计。     

碱性苦味酸法测定血清肌酐试剂的配制

目的 :配制直接测定血清肌酐的试剂碱性苦味酸 ,使得方法简单 ,结果可靠。方法 :改变氢氧化钠与苦味酸的浓度及配比 ,采用固定时间法测定。结果 :本法测定两种批号 RANDOX质控血清与其靶值比较 P>0 .0 5 ,精密度批内分别是 CV=3.4%和 2 .7% ,批间分别是 CV=3.96 %和 3.34%。本法与除蛋白滤液法 ,上海试剂 (速率法 )测定 10 0份血清结果分别是 113± 71μm ol/ L,110± 70 μmol/ L,115± 6 4μmol/ L.P>0 .0 5。结论 :本法准确度 ,精密度 ,回收率 ,线性均良好。     

血清中盐酸洛美沙星的测定及荧光光谱特性

用荧光分光光度法研究了盐酸洛美沙星在血清中的荧光光谱特性,并对其在血清样品中的含量进行了测定．用乙腈沉淀蛋白对血清进行预处理,在硼酸盐缓冲溶液中,用硫酸调节酸度,并使其pH值为3．0,以β环糊精为荧光增敏剂．通过扫描其激发光谱和发射光谱,可知盐酸洛美沙星在血清中有以下荧光特性盐酸洛美沙星血清提取液和盐酸洛美沙星的标准溶液具有相同特征的激发光谱和发射光谱,其激发波长为288nm,发射波长为450nm,也即药物光谱不受血清成分干扰,但血清样品对盐酸洛美沙星的荧光强度造成强烈的荧光猝灭．测定血清中盐酸洛美沙星的线性范围为0．v5～5．0μg·ml,其回归方程为y＝-0．2370+4．809X(R＝0．9968),血清中盐酸洛美沙星的平均回收率为99．5％,方法的相对标准偏差为0．82％(n＝5)．     

Microplate chemiluminescence enzyme immunoassay for the quantitative evaluation of carbohydrate antigen 72-4 in human serum

A highly sensitive and specific microplate chemiluminescence enzyme immunoassay （CLEIA） was developed for the quantitative evaluation of carbohydrate antigen 72-4 （CA72-4） in human serum, using luminol-H2O2 catalyzed by horseradish peroxidase （HRP） as the chemiluminescence system. The simple and quick determination was accomplished through a sandwich reaction mode. Several physicochemical parameters of the immunoreaction, including incubation conditions, antibody coating conditions, dilution ratio of anti-CA72-4-HRP conjugate, and chemiluminescence reaction time, were studied and optimized. The proposed method exhibited a linear range of 0-200 U/mL with correlation coefficient and detection limit of 0.9995 and 0.18 U/mL, respectively. The inter-assay and intra-assay coefficients of variation （CV） were both less than 10%. The average recovery of two clinical sera with low and high concentration CA72-4 was 99.3% and 98.7%, respectively. Normal tumor markers, including AFP, CEA, CA24-2, CA19-9 and CA15-3, did not cross-react with each other. The method＇s stability was evaluated by assessing its analytical performance after storing the immunoreagents at 4℃ and 37℃ for 7 days. Little difference was found, indicating satisfactory stability of the method. The present method has been successfully applied to the detection of CA72-4 human serum, and showed a good correlation with the commercially available ELISA kit （r^2=0.9383）. This method showed great potential in the fabrication of diagnostic kit for CA72-4, and could be well used in diagnosis of cancer in clinical practice.     

乳酸脱氢酶在CTAB-戊醇反胶束体系中的催化动力学研究

以十六烷基三甲基溴化铵（CATB）-异辛烷-戊醇反胶束体系对乳酸脱氢酶（LDH）了固定化,探讨了体系含水量W0（W0=n（水）/n（CTAB）、CTAB浓度、戊醇体积比对LDH固定化的影响及游离酶和固定酶的催化动力学性质.结果表明：LDH进入反胶束的最佳条件是：体系含水量为4.3,CTAB浓度为0.24 mol/L,戊醇体积比为25%.对游离酶和固定化酶的酶促反应的最适pH值均为8.8,最适反应温度分别为52℃和30℃,米氏常数Km分别为65mmol/L和48mmol/L.在25℃时,游离酶存放2 h后失活35%,而固定化酶仅失活16%,说明反胶束固定化LDH具有良好的活力稳定性.     

铜锰负载型堇青石整体催化剂表面低浓度甲烷催化燃烧本征动力学研究

采用等温积分反应器，在常压、600~700℃和甲烷体积分数0.1%~1%的条件下，对国产铜锰负载型堇青石整体催化剂上低浓度甲烷催化燃烧本征动力学特性进行了系统的实验研究。以单纯形法对动力学实验数据进行最优化参数估计，建立了低浓度甲烷催化燃烧双曲型本征动力学模型，数理统计和残差分布检验结果表明，所建模型与实验结果良好相容，是适宜和可信的。     

亚硝酸钠氧化法测定总胆红素试剂的研制

探讨建立一种亚硝酸钠氧化法测定血清总胆红素的新方法.采用亚硝酸钠氧化法测定血清总胆红素反应前后吸光度的变化,与标准品相比较,求得标本中总胆红素的浓度.精密度试验批内精密度(CV)值为1.38%;批间CV值为1.74%.线性范围可达792μmol/L.与其他相关试剂比较γ=0.996 7.可用于检测临床标本.     

高效液相色谱法测定磷酸肌酸钠及其有关物质

采用高效液相色谱法测定磷酸肌酸钠及其有关物质的含量,色谱柱为phenomenex Luna HILIC,乙腈-20 mmol·L-1磷酸氢二铵(pH为7.0)(77∶23)为流动相,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为210 nm,柱温为35℃.结果表明:磷酸肌酸钠与其有关物质肌酸、肌酐在同一检测条件下能够完全分离,磷酸肌酸钠、肌酸、肌酐分别在0.06².24(r=0.999 9)g·L-1、0.052.24(r=0.999 9)g·L-1、0.05².10(r=0.999 9)g·L-1和0.052.10(r=0.999 9)g·L-1和0.05².04(r=0.999 9)g·L-1范围内浓度与峰面积呈良好线性关系,其平均回收率分别为磷酸肌酸钠97.8%,肌酸100.4%,肌酐96.1%,RSD分别为1.5%、1.3%、0.7%.该方法操作简便,灵敏度高,专属性强,可用于磷酸肌酸钠及其有关物质的测定.