玻璃化冷冻保存小鼠受精卵的研究

在20°C室温下,用玻璃化冷冻液(含体积分数为0.3的乙二醇、0.21kg/L的葡聚糖和0.35mol/L的海藻糖)对昆明纯种小白鼠受精卵进行一步法和二步法玻璃化冷冻保存.一步法的2min平衡组(39%)和二步法的1min平衡组(41%)的胚胎解冻后存活率较好,与对照组(83%)相比有极显著差异(p<0.01).在玻璃化冷冻效果较好组胚胎的子宫移植中,妊娠受体率、妊娠受体产仔率和移植受体产仔率均与对照组无显著差异(p>0.05).     

小鼠囊胚玻璃化冷冻保存研究

在20°C室温下,用玻璃化冷冻液(体积分数为0.4的乙二醇,质量浓度为0.18kg/L的葡聚糖和0.3mol/L海藻糖)对昆明小白鼠囊胚进行一步法和二步法玻璃化冷冻保存.一步法的1min平衡组和二步法的0.5min平衡组胚胎解冻后,体外培养24h后的发育率较高,都为91%,与对照组(98%)相比无显著差异(P＞0.05);体外培养48h后的囊胚孵化率较好,分别为48%和51%,但与对照组(90%)相比,均有极显著差异(P＜0.01).将此两组冷冻囊胚植入假孕3d的受体鼠子宫内,其产仔率分别为43%和50%,与对照组(55%)相比,均无显著差异(P＞0.05).     

昆明小鼠未成熟卵母细胞OPS和SSV冷冻保存的比较

目的寻找昆明小鼠卵母细胞冷冻保存效率的新途径。方法选用5~6周龄雌性昆明小鼠的未成熟卵母细胞,在不同前处理液(10%EG或10%EG+10%DMSO)中平衡5 min,然后在冷冻液(EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40)中平衡30 s后进行OPS(Open pulled straw)法和SSV(Solid-surface vitrification)法玻璃化冷冻保存。结果小鼠未成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存中,用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为84.4%,成熟率低于16.7%;而在SSV法冷冻保存中,用EFS液冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率最高为86.0%,成熟率为46.5%。OPS法和SSV法冷冻小鼠未成熟卵母细胞形态正常率为91.6%和91.4%,与对照组间差异较显著(P>0.01);成熟率为42.9%和59.1%,与对照组差异极显著(P<0.01)。结论多种抗冻保护剂组合使用效果好于单种抗冻保护剂;EDFS冷冻液冷冻保存效果好于EFS,尤其是EDFS30;OPS法可以有效地冷冻保存小鼠未成熟卵母细胞,且新型玻璃化冷冻法SSV法冷冻保存效果优于OPS法。     

平衡方法及平衡和解冻温度对牛体外受精胚胎玻璃化冷冻保存效果的研究

以体外成熟、体外受精并体外发育的牛囊胚为实验材料进行玻璃化冷冻保存，分别探讨了防冻剂的平衡方法以及平衡和解冻温度对胚胎冷冻效果的影响．实验结果显示，在室温下（１８℃）以二步法或三步法添加防冻剂的冷冻效果，明显优于在４℃下，以二步法添加防冻剂的效果，其冷冻—解冻胚的发育率分别为６２．８％（５９／９４）、５３．１％（５２／９８）和１４．６％（１２／８２）（Ｐ＜０．０１）；另外，室温下以二步法玻璃化冷冻的胚胎，在２０℃水浴中解冻的发育率明显高于３７℃解冻的效果，６２．７％（３７／６２）、２６．２％（１６／６１）（Ｐ＜０．０１）．结果表明：体外成熟、体外受精的牛胚胎可以进行玻璃化冷冻保存，并能得到较高的培养存活率，在室温下，以二步法添加防冻剂，并于２０℃下解冻的玻璃化冷冻保存方法是一种快速、简便而有效的方法．     

平衡方法及平衡和解冻温度对牛体外受精胚胎玻璃化冷…

以体外成熟，体外受受精并体外发育的牛囊胚为实验材料进行玻璃化冷冻保存，分别探讨了防冻剂的平衡方法以及平衡和解冻温度对胚胎冻冷效果的影响。实验结果显示，在室温下（１８℃）以二步法或三步法添加防冻剂的冷冻效果，明显优于在４℃下，以二步法添加防冻剂的效果，其冷冻一解冻胚的发育率分别为６２．８％（５９／９４）、５３．１％（５２／９８）和１４．６％（１２／８２（Ｐ＜０．０１）；另外，室温下以二步法玻璃化冷冻     

Lats基因敲除小鼠胚胎玻璃化冷冻的研究

用冷冻麦管、细胞冷冻管分别采用一步法和二步法对Lats基因敲除小鼠胚胎进行玻璃化冷冻 ,胚胎解冻后 ,囊胚发育率分别为 90 %、90 1%、89 2 %和 91 4 % ;移植后着床率分别为 :5 0 0 %、4 7 1%、4 3 4 %和 4 6 5 % ,差异不显著 ;并且与对照组相比差异也不显著。因此 ,玻璃化冷冻可以作为Lats鼠保种方法之一     

DAP 玻璃化冷冻液对小鼠2-细胞胚胎的冷冻保存

摘要: 目的探索和优化小鼠2-细胞胚胎冷冻效果,建立小鼠胚胎冷冻保存技术以及超低温保存模型动物胚胎实验室所需的相关技术。方法选择3 个品系( C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － ) SPF 级4 周龄雌性小鼠,运用超数排卵、体外受精、玻璃化冷冻法,以及二细胞期胚胎复苏、体外培养等技术方法,观察上述实验效果。结果C57BL/6、ApoE － / －、NOS3 － / － 3 个品系小鼠超数排卵平均值分别为42. 98 个/只、27. 93 个/只、23. 11 个/只,体外受精2-细胞期胚胎率分别为68. 79%、32. 70%、23. 08 %,胚胎冷冻复苏后胚胎回收率72. 77%、80. 87%、83. 33%,存活率分别为56. 92%、54. 84%、70%,存活胚胎体外培养发育到囊胚比率分别为72. 37%、60. 78%、25%。结论选择4 周龄小鼠,按预定相同的技术方法做超数排卵、体外受精、胚胎冻存、胚胎复苏,呈现出较好效果,C57BL/6 小鼠优于基因工程小鼠,基本建立起小鼠2-细胞胚胎冷冻保存技术。     

角膜内皮体外模型玻璃化法保存研究

以牛角膜内皮细胞在培养至融合时的单层细胞作为角膜内皮的体外模型,采用两种玻璃化溶液,考察玻璃化过程对细胞活性的影响.首先以光学显微镜和扫描电镜考察了体外模型的细胞形态和胞间连接情况,发现培养的角膜内皮细胞融合后无论是细胞形态和胞间连接都与天然的角膜内皮相近.然后用低温显微镜考察了两种玻璃化溶液在升降温过程的结冰情况,发现两玻璃化溶液在100 ℃/min的降温和升温速率下都能玻璃化且反玻璃化较弱.设计了一套保护剂的导入和洗脱方案,使得内皮细胞的体积变化维持在-50%～40%.最后以CCK-8试剂盒考察了玻璃化溶液的毒性和细胞经冷冻后的活性,发现VS2的毒性比VS1强;经VS1和 VS2冷冻后的细胞活率分别为61.3%和51.7%,这说明VS1的保存效果比VS2好.     

小鼠胎儿成纤维细胞的冷冻保存研究

为了摸索小鼠胎儿成纤维细胞冷冻保存的简易方法,采用常规冷冻和玻璃化冷冻2种模式,探讨了不同的冷冻方法、不同的冷冻前平衡时间、不同的冷冻保护液的配比等因素对成纤维细胞冷冻效果的影响。实验结果表明:常规冷冻采用含10%(体积分数)甘油的DMEM液作保护剂,可将0~5℃下平衡时间缩短至45~60 min,细胞活力可达0.87。玻璃化冷冻采用10%(体积分数)NBS+1.8 mol/L乙二醇+0.1 mol/L蔗糖的PBS冷冻小鼠胎儿成纤维细胞效果好于其他组合,细胞活力可达到0.86。玻璃化冷冻法与常规冷冻法的冷冻效果差异不显著。     

小鼠胚胎冷冻技术的研究进展

传统胚胎冷冻技术如OPS、冷冻环、冷冻帽、冷冻膜等,在胚胎复苏率和囊胚形成率、技术可行性、温度适用范围、冰冻和解冻速率等方面各具有其特定优缺点,在实际推广和应用中存在一定局限性。本文就新型微滴式玻璃化(Modified droplet vitrification,MDV)胚胎冷冻技术和高重量渗透摩尔浓度玻璃化(High osmolality vitrification,HOV)两种新型胚胎冷冻保存技术进行概述,并阐明胚胎冷冻保存及复苏发育过程中所受温度、饮食中植物雌激素、N-乙酰半胱苷酸等参数的影响。     

蒙古长爪沙鼠颌下静脉丛真空采血法探讨

摘要: 目的 探讨蒙古长爪沙鼠( Mongolian gerbil) 颌下静脉丛真空采血的技术与方法,提高蒙古长爪沙鼠实验的成 功率。方法 选取 40 只蒙古长爪沙鼠,麻醉后将静脉输液针刺入颌下静脉丛血管取血。结果 成功获得沙鼠静 脉血,每只沙鼠的采血量可达 0. 3 － 0. 6 mL。结论 此方法可多次重复采血,血液标本质量高,创伤小,是一种简便、安全、采血量多的采血方法。     

萝卜与小白菜属间杂交的初步研究

以萝卜(Raphanus sativus L.)与小白菜(Brassica ssp.chinensis L.)进行属间杂交,研究不亲和性发生的时期,并通过胚抢救克服属间杂交的不亲和性.试验结果表明:萝卜与小白菜的属间杂交的平均结荚率为89.7%,而胚珠在第6天开始出现败育,胚珠成活的最长时间为10d.实验说明萝卜和小白菜的不亲和发生在胚发育过程中,授粉后第5~7天进行胚抢救可获得成活苗,成苗率为3.3%.     

蒙药敖其日奈日勒嘎治疗类风湿关节炎的临床研究

目的：通过临床试验研究,客观评价蒙药敖其日奈日勒嘎治疗类风湿关节炎的临床研究.方法：将72例类风湿关节炎患者随机分为治疗组和对照组,治疗组用MTX＋蒙药敖其日奈日勒嘎治疗,对照组用MTX治疗.治疗中观察临床症状、体征和试验前后各行一次手的正位片（治疗前）检查以及血常规、肝功能、肾功能检查.结果：（1）治疗组的显效率为6.06%,总有效率为90.91%,对照组显效率为0%,总有效率为81.82%,两组间无显著性差异（P〉0.05）（.2）两组的生化检查结果的改变,两组无显著差异（P〉0.05）,但治疗前后自身对照,两组的RF有显著差异（P〈0.01）,治疗组CRP有显著差异（P〈0.01）,两组的ESR两组无显著差异（P〉0.05）,对照组CRP两组无显著差异（P〉0.05）（.3）对照两组治疗后各症侯好转情况：治疗前后每组各症侯自身对照疼痛程度,压痛程度,晨僵时间P〉0.05两组无显著差异,晨僵,关节屈伸不利等症状的好转（P〈0.05）有显著差异,肿胀程度、肿胀数、压痛数等症状的好转,治疗组优于对照组（P〈0.01）（.4）敖其日奈日勒嘎对人体血象、肝肾功能无明显不良反应.结论：蒙药敖其日奈日勒嘎对类风湿关节炎的治疗有效,两组的总有效率相仿,但治疗晨僵、关节屈伸不利、肿胀程度、肿胀数、压痛数等症状方面蒙药敖其日奈日勒嘎＋MTX组优于MTX组.     

野生和驯养长爪沙鼠携带细菌情况的调查研究

目的调查野生长爪沙鼠和驯养长爪沙鼠的细菌携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学检测北京市地方标准提供依据。方法对银川市和呼和浩特周边地区捕获的长爪沙鼠以及驯养在屏障系统中长爪沙鼠实施安死术,解剖后分别分离回盲部和喉部细菌,接种于血平皿上,分离菌株单克隆培养后分类,用全自动微生物分析系统鉴定种属,并计算检出率。结果银川市和呼和浩特地区的野生长爪沙鼠分别携带了12种和8种细菌,屏障系统中饲养的长爪沙鼠携带了7种细菌。结论两地区野生长爪沙鼠和屏障系统中饲养的长爪沙鼠所携带的细菌数量、种类和感染率有所不同,在制定北京市地方标准时要综合考虑。     

可膨胀石墨/磷酸三氯乙酯协同阻燃硬质聚氨酯泡沫塑料的研究

本文研究了可膨胀石墨(EG)协同磷酸三氯乙酯(TCEP)对硬质聚氨酯泡沫塑料(RPUF)的阻燃性能的影响.采用极限氧指数(LOI)、烟密度等级(SDR)、热重分析(TGA)等方法进行测试.当RPUF中添加20%的EG/TCEP(质量比1∶1)时,RPUF的LOI值达到30.0%,比未添加时提高了13.4%.同时,SDR降低至55.49%,最大烟密度值(MSD)出现时间均比未添加阻燃剂和单独添加TCEP时滞后.TGA分析结果表明,添加EG/TCEP后RPUF的失重速率下降、残炭量增加,表明EG/TCEP能在RPUF中起到良好的协同阻燃效应.     

蒙药哈它嘎其-7治疗宫颈糜烂效果观察

目的：探讨蒙药哈它嘎其-7治疗宫颈糜烂（CE）的临床疗效.方法：选择宫颈糜烂患者52例,病程3个月以上,曾用西药或中药治疗而未用过蒙药者,给予外用蒙药观察疗效.结果：外用蒙药治疗有效率达94.2%.结论：蒙药治疗宫颈糜烂治愈率高,复发率明显降低,副作用小,价格低廉,值得更多的临床医生了解并在临床中推广应用.     

HPLC法测定蒙药哈斯-哈图古日-15中没食子酸的含量

建立用HPLC法测定蒙药哈斯-哈图古日-15中没食子酸的方法.色谱柱为：Hypcrsil C18 ODS（4.6mmX250mm,5μL）,流动相为乙腈-水-磷酸（体积比为5：95：0.02）,流速为0.8 mL·min-1,检测波长为273nm,柱温为30℃.没食子酸在（0.40～1.2）mg·mL-1范围内线性关系良好（y=9E＋06x-127588,r=0.9999）,平均回收率94.95%（RSD=2.24%）.该方法可作为蒙药及蒙药材的没食子酸的含量测定方法.     

蒙药治疗80例寻常型银屑病临床观察

目的：观察蒙药珍宝丸等对寻常型银屑病的疗效.方法：将80例寻常型银屑病患者随机分为治疗组和对照组各40例;治疗组口服珍宝丸等蒙药进行治疗,对照组口服银屑灵膏治疗,一个疗程21天,共4个疗程.观察皮损,记录PASI评分,评定疗效.结果：治疗组痊愈24例,显效8例,好转5例,无效3例,总有效率80.0%;对照组痊愈10例,显效16例,好转9例,无效5例总有效率65.0%.结论：蒙药治疗优于中药治疗.