发根农杆菌4A菌株转化红豆草途径及转化组织植株再生…

将生长２０ｄ的红豆草无菌苗的下胚轴切片０．５～１ｃｍ片段，例插在含２，４－Ｄ的固体ＭＳ培养基上预培养两天；然后转至无激素培养基上，用发根农杆菌Ａ４，菌悬液感染切面。１０ｄ后长出许多发状根。这些发状根在无激素培养基上继代培养，生长旺盛，且产生许多闪生侧要。次生根切段后，在含２，４－Ｄ的ＭＳ培养上诱导愈伤组织，进一步分化完整植株。初生根、次生根、愈伤组织，以及再生植株叶片均含有农杆碱和甘露碱，而未转化     

发根农杆菌A4转化黄瓜获得发状根再生植株

研究以黄瓜栽培品种津研四号为试材,比较了培养基中添激素对自然生根及发状根诱导的影响。无菌苗子叶及下胚轴经发根农杆菌Ａ４侵染后２周诱导出发状根,发状根在无激素的ＭＳ筛选培养基上能够自主生长,在附加ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的筛选分化培养基上分化出不定芽,ＧＵＳ染色表明转化植株呈阳性反应。     

农杆菌介导的红豆草转化及其特性

胭脂碱型根癌农杆菌C58和T37菌株通过离体感染红豆草下胚轴和子叶,能形成激素自主性转化瘤组织、畸胎瘤、再生苗和再生完整植株.在再生苗和植株基部可形成次生瘤组织.对转化瘤组织细胞系与正常愈伤组织细胞系的生理生化分析表明,两者可溶性蛋白质含量没有明显差异,但转化系过氧化物酶活性和L-苯丙氨酸解氨酶活性却比正常愈伤组织细胞系高得多.这可能与转化瘤组织中致瘤基因onc的表达改变内源激素水平所致.游离氨基酸含量的分析表明,转化瘤组织的总游离氨基酸含量比正常愈伤组织细胞系高2-3倍,其中除转化瘤组织中的天门冬氨酸含量比正常愈伤组织细胞系高18-37倍,C58转化瘤组织和T37转化瘤组织也显示出明显差异,其中,T37转瘤组织中的谷氨酸,精氨酸和脯氨酸含量比C58转化瘤组织和正常愈伤组织细胞系高得多的.     

发根农杆菌A4对骆驼刺的遗传转化

用野生型发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ａ４菌株感染骆驼刺（Ａｌｈａｇｉ ｐｓｅｕｄｏａｌｈａｇｉ）无菌苗的子叶和下胚轴,１５ｄ左右在感染部位诱导出发根。将发根切段放在附加２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织,在３．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的ＭＳ培养基上进一步分化形成完整植株,冠瘿碱检测结果表明,不仅在初生发根中,在次生发根、来源于发率的愈     

雷蒙特红豆草下胚轴愈伤组织原生质体再生植株

雷蒙特红豆草１０ｄ龄无菌苗的焉胚轴切段在附加２，４－Ｄ和ＫＴ各１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织，取培养３周后形成的愈伤组织进行酶解可获得大量原生质体。原生质体在修改的ＫＭ８Ｐ液体培养基中培养，第１０ｄ开始分裂，２周后形成小细胞团，４周时发育成大细胞团。第７周将小愈伤组织转于含０．５％琼指糖的固体培养基上，它们可以旺盛生长，成为有根、芽分化的胚性愈伤组织，转于分化培养基上发育成苗的小植株。无根苗     

发根农杆菌对苦马豆转化及植株再生的初步研究

用发根农杆菌A4转化苦马豆子叶和下胚轴外植体，获得转化发根．将发根转移到MS无激素培养基上，发根能够持续生长，并于继代40天后自发形成不定芽．将不定芽转移到1／2MS无激素培养基，长出不定根，形成再生植株．再生植株表现出典型的发根综合症，初步判断再生植株为转化植株．     

发根农杆菌A4对荞麦的遗传转化

用发根农杆菌Ａ４对荞麦的下胚轴和子叶进行离体转化,得到ＲｉＴ－ＤＮＡ表达的发状根。不同的培养环境对发状根的和生长有一定的影响,表现为发状根在液体培养基上比在固体培养基上生长更为迅速,且在培养基中含一定浓度的Ｃｕ＾２＋有助于发状根的形成。     

发根农杆菌介导云南萝芙木的遗传转化

用发根农杆菌A4分别感染云南萝芙木幼嫩的真叶和茎段,诱导出毛状根,并对毛状根进行了离体培养, PCR检测转基因毛状根和HPLC检测毛状根中利血平的含量．结果表明:这两种外植体的转化频率及诱导出的毛状根差异极大,幼嫩的真叶叶片比茎段更适合作转化外植体用．PCR检测结果表明,诱导毛状根的基因rolB和 rolC整合到云南萝芙木基因组中,HPLC含量检测表明毛状根中利血平的含量比自然根中利血平的含量有显著的增加,因此可以作为利血平来源生产的有效途径之一．     

发根农杆菌Ri质粒诱导的黄芪发状根根冠细胞亚显微结构研究

对膜荚黄芪发状根根冠细胞的亚显微结构进行研究发现：发状根根尖没有分化出典型的根冠结构；根冠平衡囊细胞中淀粉分布无极性，散地细胞质中；细胞中未发现粗面内质网而仅有滑面内质网的存在；高尔基体分泌功能不旺盛，无肥大的潴泡；细胞壁较薄，纵向壁略加厚，其间无粘液积累；根冠外周细胞逐渐老化，但细胞壁不溶解，老化的细胞不脱落，且根冠细胞层数不增加。     

埃斯基红豆草原生质体培养直接形成体细胞胚与再生植株

埃斯基红豆草花茎愈伤组织的原生质体在修改的ＫＭ８Ｐ和Ｖ－ＫＭ液体培养其中均能高频率地分裂和形成克隆，其分裂率为７１．４％－７６．１９％，在ＫＭ８Ｐ培养其中，原生质体经不等分裂可以直接形成体细胞胚，在Ｖ－ＫＭ培养其中形成的小愈伤组织培养也有体细胞胚的分化。     

种植红豆草和春小麦对土壤可溶性盐分运移的影响

通过田间试验，测定了种植红豆草（Onobrychis viciaefolia）和春小麦（Triticum aestivum）对土壤可溶性盐分运移的影响．结果表明：不同绿色覆盖方式对0～20cm土层都具有明显的抑盐效应，随着地上生物量的增加，土壤表层的可溶性盐分下降幅度达16．4％～30．5％；在生育期内，红豆草的抑盐效应（0～20cm土层）较小麦强，红豆草使0～80cm土层脱盐率达23．4％，而小麦使0～80cm土层积盐率达14．2％；单作小麦收获后的空闲地．土壤表层盐分上升速度较裸地快．     

多因子正交试验对发根农杆菌生物波培养基的筛选

用Ｌ１６（４＾５）正交设计考察了牛肉浸膏、酵母浸出汁、蛋白胨、蔗糖及琼脂５种ＶＥＢ细菌培养基成分对发根农杆菌Ａ４的生物波形成的影响,主差分析结果显示,各因子对菌落直径的影响都极显著,它们的作用大小依次为：琼脂,蛋白胨,蔗糖,牛肉浸膏,酵母梁出汁,各因子对生物波成环数的影响也都极显著,它们的作用大小依次为：蔗糖,牛肉浸膏,蛋白胨,酵母浸出讦,琼脂,筛选出的最佳波动波动培养基为２．０ｇ／Ｌ牛肉浸膏＋０     

超声波辅助的发根农杆菌对黄瓜的遗传转化

由于超声波处理可在外植体上产生许多微小伤口,从而提高农杆菌与外植体之间的接触面积,提高农杆菌对外植体的转化频率。用野生型发根农杆菌（Agrobacterium rhizogenes)A4菌株感染黄瓜（Cucumis sativus L.) 无菌苗的子叶和下胚轴,建立了黄瓜的发根遗传转化体系。同时,对超声波处理时间、外植体放置方向、预培养时间、外植体类型、乙酰丁香酮的添加与否等影响因素进行了研究。结果表明,采用外植体在添加0．5mg/L NAA和2mg/L 6-BA的MS培养基上预培养4d,超声波处理2s,共培养3d,在预培养共培养期间子叶上表皮向下可以取得最佳的转化效果,发根诱导率为94．7％。乙酰丁香酮对发根诱导频率影响不明显。冠瘿碱检测表明,发根确定能合成农杆碱。