氨基酰化酶产生菌GR1—11菌株的选育和产酶条件的研究

采用物理因子诱变剂处理出发菌株米曲霉3．951(Aspergillus 3.951)，获得氨基酰化酶（EC3．5．1．4）高产菌株GR1－11，这株经紫外线和γ射线诱变获得的变异株的产酶能力较出发菌株提高了91％，在最佳培养条件下，每克曲含氨基酰化酶达122．4单位，40％至60％饱和度硫酸铵沉淀所得粗酶比活力达210U／mg。     

发酵液中纤溶酶盐析法分离纯化的研究

作者分离出一株能产纤溶酶的芽孢杆菌菌株,用液体发酵法将其发酵,对纤溶酶的纯化方法进行了初步的研究。产生的纤溶酶采用硫酸铵盐析法进行粗提纯,使用超滤脱盐的方法纯化。结果如下：硫酸铵盐在70％饱和度时提纯效果较好,工作压力为0．11MPa超滤脱盐后,粗纤溶酶纯化倍数达到12．41,活性回收率为74．35％。     

裂殖壶菌菌株FJU-512油脂提取的细胞破壁工艺

裂殖壶菌(Schizochytrium)是目前用于商业化生产二十二碳六烯酸(DHA)的高产菌种之一,由于DHA属于胞内油脂,因此对其进行充分破壁是工业化提取DHA的关键工序.研究了酸热法、碱热法、超声波法以及酶法对裂殖壶菌细胞破壁的影响,考察了不同破壁方法提取得到的总油脂及DHA产量,结果表明酶法是最优破壁方法.继而探讨不同单一酶破壁的总油脂产量,并将破壁效果最好的碱性蛋白酶和其他酶进行比较,确定最佳用酶为碱性蛋白酶.为进一步完善酶法破碎裂殖壶菌细胞的效果以提高总油脂产量,对碱性蛋白酶酶解的温度、pH、时间以及酶用量等条件进行优化.正交试验结果表明,碱性蛋白酶最佳酶解条件为酶用量2.0%,温度55℃,pH 10.0,酶解时间2.0h.在此优化条件下,裂殖壶菌菌株FJU-512的每克菌体细胞总油脂产量达到0.458 6g.     

一株假单胞杆菌（Pseudomonas sp.）中D—海因酶的分离纯化

菌体经超声波处理后,上清液首先用热变性作为纯化的第一步,后经硫酸铵沉淀和Q－Sepharose fast flow阴离子交换柱,Phenyl-Sepharose fast flow疏水层析,Superose12凝胶排阻层析等步骤,从Pseudomonas2262菌体中获得电泳纯的海因酶,酶活力回收15．6％,比活为18．37U／mg,提纯倍数为59．3。     

诺卡氏菌株胞外β-淀粉酶的分离和鉴定

诺卡氏菌株（Nocaridasp．）82除去菌体的发酵液经硫酸镀沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、SephadexG－200凝胶过滤，得到高纯度的β-淀粉酶。用SDS－PAGE测定酶蛋白分子量为53000，不具亚基；酶反应最适pH和温度分别为7．0和60℃，有较高的热稳定性；Fe2十和Zn2+对酶活力有促进作用，而Hg2+对酶活力有抑制作用。     

处理因素对龙须菜藻红蛋白抗氧化活性的影响

比较多种细胞破碎方法、不同硫酸铵浓度对龙须菜藻红蛋白的提取、分离效果,探讨不同光照、温度、pH等处理条件对藻红蛋白粗提物抗氧化活性的影响.结果表明,采用组织捣碎破壁细胞,50%饱和度硫酸铵沉淀藻红蛋白提取效果较好;温度、光照和不适宜pH均会导致藻红蛋白粗提物清除.OH自由基能力降低甚至起促氧化作用.因此对龙须菜原料的保存、加工及藻红蛋白的提取分离等必须在低温、避光、中性环境下进行,以保证藻红蛋白的稳定性.     

海带凝集素的分离及性质研究

海带 (Laminariajaponica)经TBS缓冲液粗抽提 ,然后进行硫酸铵分级实验 ,测定盐析范围为 70 %硫酸铵饱和度 ,经 70 %硫酸铵饱和度分级后 ,海带凝集素 (LJL)纯化倍数为 9,总活力回收为 410 % ,LJL粗抽提液糖含量为12 .94% .该凝集素不被已测试的D 果糖、葡萄糖、γ 球蛋白所抑制 ,但被卵清蛋白抑制     

光合细菌中氢化酶的分离纯化及其性质研究

以光合细菌为出发菌株,离心得到的菌体经超声破碎后,得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-200分子筛凝胶层析分离纯化获得电泳纯的氢化酶,且该酶的分子量为62.0 ku和37.0 ku的两个亚基组成的分子量为99.0ku的二聚体,对该酶进行酶学性质的研究得到酶催化最适温度和pH值范围分别为30℃和pH=7.5,且在25～35℃和pH=7.0～8.0范围内催化放氢活力较稳定.     

多核苷酸磷酸化酶的分离提纯及某些多聚核苷酸的酶促合成

医疗实践提出了人工合成多聚核苷酸的任务,这是由于某些多聚核苷酸具有防治病毒病的效果。本文的第一部分报导了从大肠桿菌中分离多核苷酸砱酸化酶的工作。菌体经细菌磨研磨后,用缓冲液抽提;利用硫酸链霉素除去杂质;加入硫酸铵粉末除去杂蛋白;经过纤维素柱层析后,得到酶蛋白,酶活力提高68倍,而三种杂酶含量降低到3％或4％。本文的第二部分报导了利用此酶,从一些核糖核苷二砱酸(IDP、CDP、ADP)合成多聚核苷酸的工作,合成的多聚核苷酸,用凝胶电泳法测得的分子量相当于4—16S。     

东方弧菌SOD的分离纯化和特性研究

从东方弧菌５１８菌株的细胞中提取超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。先以硫酸铵分级沉淀取得粗酶，再经ＤＥ－５２，ＤＥＡＥ－纤维素柱层析，并以５－５００ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液作线性梯度洗脱，再次分级沉淀而获纯化的ＳＯＤ，呈棕黄色，其分子量为３８０００道尔顿，为二聚体，亚基分子量为１８５００道尔顿，原子吸收光谱测定其金属辅基为Ｆｅ＾＋＋＋。该酶反应最适温度为２５℃，室温下溶液中很易失活。紫外及可见光吸收光谱测     

地衣芽孢杆菌NK-27菌株β-甘露糖苷酶的产酶条件及粗酶性质

地衣芽孢杆菌NK－27菌株可以产生胞外β－甘露聚糖酶和胞内β－甘露糖苷酶。β－甘露糖苷酶活力主要集中于细胞匀浆液中。以2．0％魔芋粉、1．0％（NH4）2SO4为碳、氮源地衣芽孢杆菌NK－27菌株经30℃振荡培养20－24h产生β－甘露糖苷酶酶活力最高。该酶于30－40℃、pH6.0时酶活力最高，在30－40℃、pH5．4－7．0酶稳定性较好。     

重组蛋白对工程菌的保护作用

为考察重组蛋白对强氧化剂环境中工程菌的保护作用,分别在含百草枯及维生素K3（VitK3）的强氧化剂和不舍强氧化剂的培养基中培养重组蛹虫草超氧化物歧化酶菌株和对照菌株并诱导表达．测定菌体密度（A600）及菌体内超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）的酶活变化。结果表明：重组菌株对百草枯和VitK3引起的生长抑制作用具有抗性．百草枯和VitK3对重组蛋白的表达没有影响．重组菌株的A600、SOD酶活力明显高于对照菌株．CAT酶活力略高于对照菌株。说明外源基因在E．coli中的高效表达提高了菌体抵抗自由基引起的损伤的能力。     

海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

采用硫酸铵沉淀、Sephadex-75,Sephadex-100凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌（Vibrio pacini)X4B-7菌株产生的碱性蛋白酶，得到电泳纯酶制品，并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示：纯酶的分子量为27KD，等电点pI=8.7,最适反应pH9.0-10.5，最适反应温度50－60℃。EDTA对酶活力没有影响，高酶浓度可以降低SDS对酶的抑制作用，该酶可用于解聚组蛋白。DNA琼脂糖凝胶电泳证明：酶对DNA酶有降解作用，而对DNA没有降解作用，该酶有希望应用于核酸的提取。     

牛奶黄嘌呤氧化酶的纯化及性质研究

本文建立从牛奶中分离纯化黄嘌呤氧化酶的工艺,该工艺采用正丁醇-硫酸铵分级提取、磷酸钙凝胶吸附、SephadexG-150层析纯化获得纯品．从磷酸钙凝胶上解吸到的XOD粗酶比活性达5．096I．U／mg－pr,提纯340倍,产率达74．3％．每单位粗酶的吸附剂用量以6mg为最佳．纯酶的最大紫外吸收在285nm处,酶活性测定的最适pH在8．60～10．15之间,最适温度在25℃～35℃间．1mol／LKCN、1．5％H2O2及甲醇对酶活力都有明显的抑制作用．经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条蛋白带．经黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-Luminol（XOD－X－Luminol）发光体系检测结果表明20μl牛奶XOD（相当0．181．UXOD）的发光强度最大,其发光值受抑制50％的超氧化物歧化酶（SOD浓度（IC50）为1．14μg／ml（相当0．514USOD）．     

产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2‘—脱氧—5—氟尿苷的酶法…

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２＇－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最     

枯草芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的三种纯化方法研究

分别采用硫酸铵盐析法,丙酮沉淀法,聚乙二醇沉淀法对枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ）Ｋ３－１４菌株发酵产生的β－甘露聚糖酶（β－ｍａｎｎａｎａｓｅ）进行提纯．其中硫酸铵盐析法在６０％饱和度时提纯９．１８倍,比活力为１６９．２０Ｕ／ｍｇ;丙酮沉淀法在用量体积分数１．０∶１时提纯１０．４３倍,比活力为１９２．３１Ｕ／ｍｇ;聚乙二醇沉淀法在０．３５ｇ／ｍｌ浓度时提纯１４．６８倍,比活力为２７０．６９Ｕ／ｍｇ．提纯后的β－甘露聚糖酶制品经电泳鉴定呈四条蛋白带．     

产漆酶菌株的筛选及产酶条件的优化

以愈创木酚培养基为底物,利用平板筛选法从土壤朽木中筛选能够产漆酶的菌株,通过测定漆酶活力进行复筛,筛选出一株产漆酶活力较高的白腐茵菌株。以漆酶活性为参考指标,确定葵花粉发酵产漆酶条件：发酵培养基中硫酸铵0．025％,初始pH值5．5,接种量8％,装液量50mL,愈创木酚0．10％,培养时间7d。     

产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2′-脱氧-5-氟尿苷的酶法合成

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２′－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最佳摇床转速为１６０ｒ／ｍｉｎ。     

诺卡氏菌株82β－淀粉酶的部分纯化及其性质研究

诺卡氏菌株８２（Ｎｏｃａｒｄｉａｓｐ．８２）可产生一种β一淀粉酶，经５０％硫酸铵沉淀、ＤＥＡＥ一纤维素离子交换层析，将其纯化２１倍。该酶在６０℃，ｐＨ７．０条件下酶活最高；１００℃处理３０ｍｉｎ仍具有４０％的最初酶活力。     

大鼠CuZn—SOD cDNA的克隆及高效表达

采用PCR技术,扩增大鼠CuZn-SOD cDNA,双酶切后与表达载体pBV220连接,构建出表达质粒pBV-RCS,并转化大肠杆菌DH5α,经金属离子和42℃诱导,pBV-RCS得到高表达,经SDS－PAGE及薄层扫描测定表达蛋白占菌体总蛋白的49％,是目前国内外SOD高表达菌株之一^[1,2],表达蛋白以包涵体形式存在于菌体内,经超声波破壁后,再经透析复性和稀释复性,表达蛋白具有特异性SOD酶活性（1298U/mL)。α