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氨基酰化酶产生菌GR1—11菌株的选育和产酶条件的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采用物理因子诱变剂处理出发菌株米曲霉3.951(Aspergillus 3.951),获得氨基酰化酶(EC3.5.1.4)高产菌株GR1-11,这株经紫外线和γ射线诱变获得的变异株的产酶能力较出发菌株提高了91%,在最佳培养条件下,每克曲含氨基酰化酶达122.4单位,40%至60%饱和度硫酸铵沉淀所得粗酶比活力达210U/mg。 相似文献
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裂殖壶菌(Schizochytrium)是目前用于商业化生产二十二碳六烯酸(DHA)的高产菌种之一,由于DHA属于胞内油脂,因此对其进行充分破壁是工业化提取DHA的关键工序.研究了酸热法、碱热法、超声波法以及酶法对裂殖壶菌细胞破壁的影响,考察了不同破壁方法提取得到的总油脂及DHA产量,结果表明酶法是最优破壁方法.继而探讨不同单一酶破壁的总油脂产量,并将破壁效果最好的碱性蛋白酶和其他酶进行比较,确定最佳用酶为碱性蛋白酶.为进一步完善酶法破碎裂殖壶菌细胞的效果以提高总油脂产量,对碱性蛋白酶酶解的温度、pH、时间以及酶用量等条件进行优化.正交试验结果表明,碱性蛋白酶最佳酶解条件为酶用量2.0%,温度55℃,pH 10.0,酶解时间2.0h.在此优化条件下,裂殖壶菌菌株FJU-512的每克菌体细胞总油脂产量达到0.458 6g. 相似文献
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一株假单胞杆菌(Pseudomonas sp.)中D—海因酶的分离纯化 总被引:6,自引:3,他引:3
菌体经超声波处理后,上清液首先用热变性作为纯化的第一步,后经硫酸铵沉淀和Q-Sepharose fast flow阴离子交换柱,Phenyl-Sepharose fast flow疏水层析,Superose12凝胶排阻层析等步骤,从Pseudomonas2262菌体中获得电泳纯的海因酶,酶活力回收15.6%,比活为18.37U/mg,提纯倍数为59.3。 相似文献
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诺卡氏菌株胞外β-淀粉酶的分离和鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
诺卡氏菌株(Nocaridasp.)82除去菌体的发酵液经硫酸镀沉淀、DEAE-纤维素离子交换层析、SephadexG-200凝胶过滤,得到高纯度的β-淀粉酶。用SDS-PAGE测定酶蛋白分子量为53000,不具亚基;酶反应最适pH和温度分别为7.0和60℃,有较高的热稳定性;Fe2十和Zn2+对酶活力有促进作用,而Hg2+对酶活力有抑制作用。 相似文献
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比较多种细胞破碎方法、不同硫酸铵浓度对龙须菜藻红蛋白的提取、分离效果,探讨不同光照、温度、pH等处理条件对藻红蛋白粗提物抗氧化活性的影响.结果表明,采用组织捣碎破壁细胞,50%饱和度硫酸铵沉淀藻红蛋白提取效果较好;温度、光照和不适宜pH均会导致藻红蛋白粗提物清除.OH自由基能力降低甚至起促氧化作用.因此对龙须菜原料的保存、加工及藻红蛋白的提取分离等必须在低温、避光、中性环境下进行,以保证藻红蛋白的稳定性. 相似文献
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海带凝集素的分离及性质研究 总被引:1,自引:0,他引:1
海带 (Laminariajaponica)经TBS缓冲液粗抽提 ,然后进行硫酸铵分级实验 ,测定盐析范围为 70 %硫酸铵饱和度 ,经 70 %硫酸铵饱和度分级后 ,海带凝集素 (LJL)纯化倍数为 9,总活力回收为 410 % ,LJL粗抽提液糖含量为12 .94% .该凝集素不被已测试的D 果糖、葡萄糖、γ 球蛋白所抑制 ,但被卵清蛋白抑制 相似文献
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以光合细菌为出发菌株,离心得到的菌体经超声破碎后,得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-200分子筛凝胶层析分离纯化获得电泳纯的氢化酶,且该酶的分子量为62.0 ku和37.0 ku的两个亚基组成的分子量为99.0ku的二聚体,对该酶进行酶学性质的研究得到酶催化最适温度和pH值范围分别为30℃和pH=7.5,且在25~35℃和pH=7.0~8.0范围内催化放氢活力较稳定. 相似文献
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《北京大学学报(自然科学版)》1974,(2)
医疗实践提出了人工合成多聚核苷酸的任务,这是由于某些多聚核苷酸具有防治病毒病的效果。本文的第一部分报导了从大肠桿菌中分离多核苷酸砱酸化酶的工作。菌体经细菌磨研磨后,用缓冲液抽提;利用硫酸链霉素除去杂质;加入硫酸铵粉末除去杂蛋白;经过纤维素柱层析后,得到酶蛋白,酶活力提高68倍,而三种杂酶含量降低到3%或4%。本文的第二部分报导了利用此酶,从一些核糖核苷二砱酸(IDP、CDP、ADP)合成多聚核苷酸的工作,合成的多聚核苷酸,用凝胶电泳法测得的分子量相当于4—16S。 相似文献
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东方弧菌SOD的分离纯化和特性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
从东方弧菌518菌株的细胞中提取超氧化物歧化酶(SOD)。先以硫酸铵分级沉淀取得粗酶,再经DE-52,DEAE-纤维素柱层析,并以5-500mmol/L磷酸钾缓冲液作线性梯度洗脱,再次分级沉淀而获纯化的SOD,呈棕黄色,其分子量为38000道尔顿,为二聚体,亚基分子量为18500道尔顿,原子吸收光谱测定其金属辅基为Fe^+++。该酶反应最适温度为25℃,室温下溶液中很易失活。紫外及可见光吸收光谱测 相似文献
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地衣芽孢杆菌NK-27菌株β-甘露糖苷酶的产酶条件及粗酶性质 总被引:4,自引:0,他引:4
地衣芽孢杆菌NK-27菌株可以产生胞外β-甘露聚糖酶和胞内β-甘露糖苷酶。β-甘露糖苷酶活力主要集中于细胞匀浆液中。以2.0%魔芋粉、1.0%(NH4)2SO4为碳、氮源地衣芽孢杆菌NK-27菌株经30℃振荡培养20-24h产生β-甘露糖苷酶酶活力最高。该酶于30-40℃、pH6.0时酶活力最高,在30-40℃、pH5.4-7.0酶稳定性较好。 相似文献
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为考察重组蛋白对强氧化剂环境中工程菌的保护作用,分别在含百草枯及维生素K3(VitK3)的强氧化剂和不舍强氧化剂的培养基中培养重组蛹虫草超氧化物歧化酶菌株和对照菌株并诱导表达.测定菌体密度(A600)及菌体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的酶活变化。结果表明:重组菌株对百草枯和VitK3引起的生长抑制作用具有抗性.百草枯和VitK3对重组蛋白的表达没有影响.重组菌株的A600、SOD酶活力明显高于对照菌株.CAT酶活力略高于对照菌株。说明外源基因在E.coli中的高效表达提高了菌体抵抗自由基引起的损伤的能力。 相似文献
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海洋弧菌碱性蛋白酶的分离纯化及部分性质研究 总被引:11,自引:0,他引:11
采用硫酸铵沉淀、Sephadex-75,Sephadex-100凝胶过滤层析等方法纯化海洋弧菌(Vibrio pacini)X4B-7菌株产生的碱性蛋白酶,得到电泳纯酶制品,并对纯化酶的性质进行了研究。结果显示:纯酶的分子量为27KD,等电点pI=8.7,最适反应pH9.0-10.5,最适反应温度50-60℃。EDTA对酶活力没有影响,高酶浓度可以降低SDS对酶的抑制作用,该酶可用于解聚组蛋白。DNA琼脂糖凝胶电泳证明:酶对DNA酶有降解作用,而对DNA没有降解作用,该酶有希望应用于核酸的提取。 相似文献
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牛奶黄嘌呤氧化酶的纯化及性质研究 总被引:5,自引:0,他引:5
本文建立从牛奶中分离纯化黄嘌呤氧化酶的工艺,该工艺采用正丁醇-硫酸铵分级提取、磷酸钙凝胶吸附、SephadexG-150层析纯化获得纯品.从磷酸钙凝胶上解吸到的XOD粗酶比活性达5.096I.U/mg-pr,提纯340倍,产率达74.3%.每单位粗酶的吸附剂用量以6mg为最佳.纯酶的最大紫外吸收在285nm处,酶活性测定的最适pH在8.60~10.15之间,最适温度在25℃~35℃间.1mol/LKCN、1.5%H2O2及甲醇对酶活力都有明显的抑制作用.经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示两条蛋白带.经黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶-Luminol(XOD-X-Luminol)发光体系检测结果表明20μl牛奶XOD(相当0.181.UXOD)的发光强度最大,其发光值受抑制50%的超氧化物歧化酶(SOD浓度(IC50)为1.14μg/ml(相当0.514USOD). 相似文献
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研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明:摇瓶培养时,延长菌体培养时间,菌体部分自溶时酶的转化率最高;发酵培养基中加入10g/L乙酸钠可使底物转化率提高7.7%,0.001g/L的底物dU诱导可使酶活力提高11.0%;流加底物dU对酶反应转化率无显著影响,表明该酶促反应为非2'-脱氧尿苷底物抑制型;反应过程存在扩散控制,酶反应的最 相似文献
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枯草芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的三种纯化方法研究 总被引:7,自引:1,他引:6
分别采用硫酸铵盐析法,丙酮沉淀法,聚乙二醇沉淀法对枯草芽孢杆菌(Bacilussubtilis)K3-14菌株发酵产生的β-甘露聚糖酶(β-mannanase)进行提纯.其中硫酸铵盐析法在60%饱和度时提纯9.18倍,比活力为169.20U/mg;丙酮沉淀法在用量体积分数1.0∶1时提纯10.43倍,比活力为192.31U/mg;聚乙二醇沉淀法在0.35g/ml浓度时提纯14.68倍,比活力为270.69U/mg.提纯后的β-甘露聚糖酶制品经电泳鉴定呈四条蛋白带. 相似文献
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以愈创木酚培养基为底物,利用平板筛选法从土壤朽木中筛选能够产漆酶的菌株,通过测定漆酶活力进行复筛,筛选出一株产漆酶活力较高的白腐茵菌株。以漆酶活性为参考指标,确定葵花粉发酵产漆酶条件:发酵培养基中硫酸铵0.025%,初始pH值5.5,接种量8%,装液量50mL,愈创木酚0.10%,培养时间7d。 相似文献
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产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2′-脱氧-5-氟尿苷的酶法合成 总被引:1,自引:0,他引:1
研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明:摇瓶培养时,延长菌体培养时间,菌体部分自溶时酶的转化率最高;发酵培养基中加入10g/L乙酸钠可使底物转化率提高7.7%,0.001g/L的底物dU诱导可使酶活力提高11.0%;流加底物dU对酶反应转化率无显著影响,表明该酶促反应为非2′-脱氧尿苷底物抑制型;反应过程存在扩散控制,酶反应的最佳摇床转速为160r/min。 相似文献
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诺卡氏菌株82(Nocardiasp.82)可产生一种β一淀粉酶,经50%硫酸铵沉淀、DEAE一纤维素离子交换层析,将其纯化21倍。该酶在60℃,pH7.0条件下酶活最高;100℃处理30min仍具有40%的最初酶活力。 相似文献
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采用PCR技术,扩增大鼠CuZn-SOD cDNA,双酶切后与表达载体pBV220连接,构建出表达质粒pBV-RCS,并转化大肠杆菌DH5α,经金属离子和42℃诱导,pBV-RCS得到高表达,经SDS-PAGE及薄层扫描测定表达蛋白占菌体总蛋白的49%,是目前国内外SOD高表达菌株之一^[1,2],表达蛋白以包涵体形式存在于菌体内,经超声波破壁后,再经透析复性和稀释复性,表达蛋白具有特异性SOD酶活性(1298U/mL)。α 相似文献