银杏细胞悬浮培养及其黄酮类物质生产

探讨了银杏细胞悬浮培养过程中诸多因子对细胞生长率和黄酮类化合物含量的影响，结果表明：液体培养基以N6＋NAA（1.6-1.8) BA0.5为最好；最适接种量为2.5g-3.0g／瓶（鲜重），最适pH值为6.0-6.5，附加MES效果更好；碳源以40％葡萄糖进行细胞培养的30％蔗糖进行黄酮生产较好；细胞生长和生产黄酮的激素、碳源等培养条件不同，激素类以NAA（1.6-1.8) BA0.5进行细胞培养、以GA0.5 KT1.0进行黄酮生产最佳，附加黄酮前体物PLA可提高黄酮产量，放线菌素－D不适合黄酮类药用物质生产。     

银杏细胞悬浮培养及黄酮的产生

本文研究了激素、培养基的成分组成及诱导子对银杏悬浮细胞生长及黄酮产生的影响，结果表明：在银杏细胞悬浮培养过程中，NAA和6-BA组合使用比NAA、6-BA单独使用更有利于细胞的生长，当培养基的蔗糖浓度达到35g．L^-1时，比较有利于细胞的生长；去掉培养基中的氮源，虽不利于细胞的生长，但有利于细胞中黄酮的累积，黄酮的含量可达2．16％，培养基中附加0．1g．L^-1琼脂糖诱导子可使细胞中黄酮含量提高到细胞干重的2．23％。     

培养条件对银杏悬浮培养细胞黄酮合成影响研究

对12个不同品种的银杏树幼叶及其诱导的愈伤组织进行了银杏黄酮含量测定，发现其存在较大差异．梅核品种幼叶黄酮含量最高，为3．32％，大白果品种幼叶黄酮含量最低，为0.84％；梅核品种幼叶愈伤组织黄酮含量最高，达1．26％，岭南品种幼叶愈伤组织黄酮含量最低，为0.22％．选取生长旺盛、银杏黄酮含量高的愈伤组织在B5液体培养基中进行了银杏细胞悬浮培养，研究了多种条件对银杏细胞生长和银杏黄酮含量的影响．结果表明，在150mL培养瓶中装有50mL培养液，接种量为鲜质量30—40g/L，对培养细胞给予3000—40001x的光照、以蔗糖为碳源最有利于黄酮的合成，以葡萄糖为碳源则最有利于细胞生长．HPLC检测结果显示，银杏悬浮培养细胞中银杏黄酮含量可达细胞干质量的2．82％．     

拟南芥叶柄细胞脱分化与叶绿体超微结构变化

对培养的拟南芥叶柄细胞的超微结构进行观察,培养0～2.0 d,叶绿体内淀粉粒的数量和体积逐渐增加;培养2.0～3.0 d,叶绿体淀粉粒的数量和体积逐渐减少,细胞中细胞质大量增加,开始形成愈伤组织.以叶绿体及其淀粉粒的变化为依据,将培养的拟南芥叶柄细胞经过脱分化形成愈伤组织的过程划分为前期(培养0～1.5 d)、中期(培养1.5～2.0 d)和后期(培养3.0 d左右)3个阶段;以叶绿体超微结构的变化来界定植物细胞脱分化的过程,为进一步揭示植物细胞脱分化机制提供了依据.     

银杏根中黄酮类化合物的提取及其含量测定

采用浸泡与回流的方法从银杏根中提取黄酮，用721型分光光度计测得总黄酮含量为6.89%.高效液相色谱法检测银杏根中槲皮素百分率为1.24%，是黄酮类化合物中含量较高的成分.紫外-可见分光光度法确定最佳检测波长为370 nm.     

适于双向电泳分析的银杏叶绿体蛋白质提取方法

【目的】获得银杏叶绿体蛋白质的提取方法,在蛋白质水平探讨银杏光合作用对环境的响应机制。【方法】建立一种适合银杏叶绿体蛋白双向电泳分离的实验体系,采用Tris-平衡酚抽提法对银杏叶绿体蛋白质进行提取,并与三氯乙酸(TCA)-丙酮沉降法进行对比分析。【结果】Percoll密度梯度离心法适用于银杏叶绿体的提取,提取的叶绿体平均完整率在85%左右。单向电泳结果显示,与TCA-丙酮沉降法相比,在用Tris-平衡酚抽提法分离的叶绿体蛋白质泳道中,低分子质量蛋白质条带更多、更清晰。进一步的双向电泳结果表明,用Tris-平衡酚抽提法对银杏叶绿体蛋白质进行提取,蛋白质产量更高,图谱清晰,所分离的蛋白点更多,形态更好,条纹影响相对较小。【结论】Tris-平衡酚抽提法可有效地提取高质量的叶绿体蛋白质并进行双向电泳,可用于银杏叶绿体的蛋白质组学分析。     

一株产黄酮银杏内生真菌的分离鉴定与培养介质的初步研究

从银杏（Ginkgo biloba L.)叶片中分离获得了一株内生真菌EG4，经形态学分类研究鉴定为刺盘孢Colletortrichum sp.用TLC分析培养液发现该菌可产生黄酮类化合物，培养生物学特性的研究表明不同的碳，氮源对其生长和代谢有不同的影响，蔗糖和葡萄糖，NH4^ ，能够明显促进其生长；乳糖，NO2^-能够明显促进其酮类物质的合成。     

干旱对银杏生理生化特性及叶绿体超微结构的影响

以五年生盆栽的银杏大佛指实生苗为实验材料,通过持续自然干旱,研究了持续干旱条件下银杏叶片生理生化指标和叶绿体超微结构的变化.结果表明:干旱处理30 d后,银杏叶片叶绿素含量逐渐下降;MDA含量和SOD活力逐渐上升,CAT活力逐渐下降;脯氨酸和可溶性糖含量逐渐上升,可溶性蛋白质呈先下降后上升的趋势;各项生理指标(除SOD...     

银杏发根的转化及其悬浮培养无性系的建立

运用具有Ｒｉ质粒的发根农杆菌对银杏的叶片，幼芽和幼茎进行成功地转化，并建立银杏发根的悬浮培养无性系，冠瘿碱检测实验表明，发根农杆菌Ｒｉ质粒的Ｔ－ＤＮＮＡ部分已整合到银杏细胞中，这为利用生物技术开发银杏资源提供一条新的途径。     

银杏悬浮培养细胞中黄酮糖苷提取动力学研究

利用醇提法从人工悬浮培养银杏细胞中提取黄酮糖苷。以扩散传质定律为基础，根据质量平衡方程，建立提取过程的动力学模型,结合测得的数据计算出提取过程中的重要动力学参数。结果表明，乙醇法提取银杏细胞黄酮糖苷是从固相到液相的扩散传质过程，属一级反应。建立的动力学模型ρ_FG=ρ_eq｛1-exp［-1.023t·exp(-1469.55/T)］｝能描述银杏细胞黄酮的乙醇法提取过程，高效液相色谱(HPLC)分析表明，人工培养细胞中提取成分主要是以槲皮素、山萘素和异鼠李素与糖结合形成的糖苷。这既促进了生物技术在天然药物生产上的应用，又为黄酮糖苷提取的工艺设计和操作条件选择等方面提供了理论依据。     

银杏组织培养研究进展

为了全面了解银杏组织培养现状，找出银杏组织培养的规律，概述了利用银杏的器官培养、愈伤组织培养、细胞悬浮培养、花粉培养、胚及其发生的培养、毛状根培养等组织培养手段进行银杏种质保存及生理学研究的现状。并指出，弄清次生代谢物合成途径及其关键步骤的关键酶，利用原生质体、雌配子体细胞和花粉获得体细胞胚，建立起一个将胚长成植株的体系，是今后努力的方向。     

银杏叶中总黄酮的提取和测定

本试验比较了有机溶剂浸提法和超声波法提取总黄酮的效果,选择提取率较高的超声波法来提取。对料液比、超声时间和乙醇体积浓度对银杏中总黄酮提取效果的影响进行了单因子试验,并采用正交试验法找出最佳提取条件为料液比1g∶30 mL、超声时间30min、乙醇浓度70%。采用紫外可见分光法检测黄酮类化合物的含量,不加显色剂,直接以258 nm作为最大吸收波长。结果表明,银杏中总黄酮的平均含量稳定在2.77%,精密度的RSD为0.302%,该方法的平均回收率为100.3%。本试验方法样品处理简单,准确度高,精密度好,适合于银杏叶中总黄酮的提取和测定。     

银杏愈伤组织培养及药用成分研究

银杏是我国特有植物,具有重要的药用价值.利用组织培养技术生产次生代谢产物前景广阔.本文综述了银杏愈伤组织诱导过程中外植体、基本培养基、激素、光照等因素对愈伤组织生长速度和主要药用成分含量的影响以及银杏主要药用成分的提取及测定方法.     

微波技术应用于银杏黄酮浸提的研究

以银杏叶为原料，研究了微波技术在银杏黄酮浸提中的应用．实验通过改变溶剂浓度、提取时间、料液比等条件对产品提取得率的影响进行了探讨，并比较了传统浸提法、微波法、微波结合浸提法三种方法的提取，结果表明微波法提取银杏黄酮是一种快速、高效、节能的新型提取方法，具有一定的实用价值．     

银杏叶用林定向培育技术体系的集成

银杏叶中由于含有广泛的具药理活性的化学成分,已经成为药品、食品、化妆品和饮料等工业产品的重要原料,银杏叶用林的定向培育能够为以银杏叶为原料的各种加工业提供优质的原料。笔者在介绍银杏叶用园培育原理的基础上,依据银杏叶用林研究的相关材料,系统总结了银杏叶用林的定向培育关键技术,包括:①选择适宜的立地条件,选择排水良好、土层深厚肥沃、土壤pH为6.0～7.5的适生丰产区内的造林地; ②选择优良的品种,选用经过选育并获得新品种权或通过林木品种审定委员会审定的叶用优良品种; ③采用合理的密度,根据不同的立地及栽培条件,栽植密度控制在4万～7万株/hm²; ④采用截干萌芽矮化经营方式,4～5 a截干1次; ⑤施肥以有机肥为主,生长前期追N肥,后期增施K、P和微量元素肥料(Mg、Zn、Mo); ⑥生长前期采取措施促进生长(水分充足、温度和光照适宜),后期采取措施促进药用成分的合成和积累(适度干旱、低温和强光)。     

不同产地银杏黄酮及相关活性物质含量变异分析

【目的】比较研究来自10个产地的银杏古树叶黄酮,以及与黄酮合成相关的可溶性糖、蛋白质含量和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,以了解不同产地银杏叶片的活性物质含量变异以及各活性物质间的相关关系。【方法】以10个产地银杏古树叶为材料,测定各活性物质的含量,探究各成分在不同产地间及产地内的变异。【结果】嫁接在相同环境条件下的银杏,其叶片活性物质含量在产地间及产地内均存在显著差异。10个产地银杏古树总黄酮、可溶性糖、蛋白质含量和PAL活性(鲜质量)分别为9.13 mg/g、157.15 mg/g、0.71 g/L和10.96 U/g。银杏叶黄酮含量与可溶性糖含量及PAL活性呈极显著正相关,而可溶性糖和蛋白质含量存在极显著负相关关系。【结论】来自汉中产地的黄酮含量最高,在今后优良叶用银杏来源的选择中应予重视。都匀产地黄酮变量的变异系数最大,在产地间选择的同时也需要关注产地内的选择。     

银杏与其它裸子植物之间的关系—分子生物学的证据

银杏Ginkgo biloba L.Ls-rRNA 5＇末端188个核苷酸序列已被准确测定。与苏铁Cycas revoluta Thunb.,水松Glyptostrobus pensilis(Staunt.)Koch,南方红豆杉Tax-us mairei(Lemee et Levl.)S.Y.Hu和5种被子植物及1种绿藻的同源序列比较分析,其所构建的rRNA系统树图表明,银杏与苏铁的关系较为密切,与其它裸子植物的关系相对较远。     

AlCl3-分光光度法测定银杏黄酮的含量

提出了AlCl3-分光光度法测定药物制剂中银杏黄酮含量的新方法.该法是基于银杏黄酮能与AlCl3反应生成黄色络合物,此物质在408 nm处有最大吸收.方法的线性范围为2.00～110 μg/mL,r=0.999 9,平均回收率为99.9%.