猪IFNα在毕赤酵母中分泌表达条件的优化及高密度发酵

从发酵时间、接种量、pH值、诱导剂量等方面对重组基因工程（毕赤酵母甲醇利用缓慢型）的摇瓶发酵条件进行了优化，进一步探索了酵母菌表达猪IFNα的发酵工艺，包括种细胞密度对初始发酵期的影响，补加甘油、甲醇速率条件的控制等．结果表明，摇瓶发酵时，诱导最佳时间为96h，甲醇最适浓度为8g/L，发酵pH范围为6.4～9．0．最适接种量2：1．在分批发酵、接种量为10%且种子细胞光密度（OD600）为5～6时，最有利于细胞的高密度培养，在补料发酵时，根据溶氧控制甘油流加速率与时机，细胞干重达到118．75g／L，在48h重组猪IFNα表达量达到1。304g／L．     

LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步研究

利用摇瓶在温度、pH范围、诱导剂量及诱导时间等不同因素变化时，进行了重组毒素LHRH-PE40工程菌发酵条件的初步探索.结果表明，工程菌优化的发酵条件为：pH范围7．3～7．5，诱导温度为34℃．诱导时菌密度A600=0．8，诱导时间为4～4．5h，诱导剂(IPTG)浓度为0.5mmol/L。     

摇瓶中重组大肠杆菌生产人γ-干扰素工艺优化

目的优化大肠杆菌生产重组人γ-干扰素摇瓶发酵工艺条件,分析摇瓶发酵过程中的制约因素。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对工程菌生产rhIFN-γ和质粒稳定性的影响,及优化条件下工程菌发酵参数。结果最佳条件:种子液为OD6000.5~1.5,接种量为6%,培养至OD600为1.5时42℃诱导表达4 h。在此条件下,在摇瓶中使用M9II培养基时,质粒无丢失,摇瓶中rhIFN-γ的表达量占菌体总蛋白的43.2%,光密度为3.3。对发酵过程中总糖、还原糖、总氮和pH的分析表明,发酵过程中培养基中碳源、氮源丰富,而溶解氧的不足和pH值偏酸性可能是整个培养过程的限制性因素。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好,为rhIFN-γ的大规模生产提供可靠的放大依据。     

猴头菌深层发酵工艺条件的研究

通过单因子试验和多因子正交试验，优化筛选了适于猴头茵摇瓶培养条件。结果表明，其适宜的摇瓶条件为：培养温度28℃，培养基起始pH值为5．0，摇瓶装量为60mL／250mL，接种量15％，摇瓶培养最适碳氮源及其浓度分别为：可溶性淀粉3．5％。酵母膏3．5％。     

荧光假单胞菌株M18产吩嗪-1-羧酸的条件

在摇瓶发酵条件下，研究了产吩嗪—1—羧酸(PCA)的荧光假单胞菌M18在各种碳源、氮源、盐类、温度、接种量下PCA的分泌量，确定了适合PCA分泌的最佳培养基(1L)：葡萄糖20g，肉胨22g，KNO310g；最佳培养条件：温度28℃，起始pH7．0，装瓶量200／500(mL)，接种量5％；最佳培养时间72h．在此条件下，PCA在发酵液中的浓度可达到820mg/L．     

绣球菌深层发酵工艺条件的研究

通过单因子试验和多因子正交试验,优化筛选了适于绣球菌摇瓶培养条件。结果表明,适于产菌丝体的摇瓶条件为：培养温度28℃,培养基起始pH4．5,接种量8％,摇瓶转速100r/min;摇瓶培养适于产菌丝体的最适碳氮源及其浓度分别为：可溶性淀粉2．5％,蛋白胨0．15％。适于产胞外多糖的摇瓶条件为：培养温度29℃。培养基起始pH5．5,接种量8％,摇瓶转速100r／min;摇瓶培养最适碳氮源及其浓度分别为：可溶性淀粉2．5％,蛋白胨0．25％。     

灰树花液体培养工艺的研究

对灰树花液体培养工艺进行了系统的研究．通过单因子试验优化筛选了适于灰树花的液体培养基和摇瓶培养条件，结果表明，适宜的培养基组成为：玉米粉50g几、麸皮20g／L、KH2PO41g／L、MgSO40．5g／L、VB1 0．01g／L最适摇瓶培养条件为：培养温度25℃、摇床转速160r／min、pH值6．0、接种量10％、装液量120ml／500ml、培养时间6d、最高茵丝体干重达16．8g／L。     

产纤维素酶粗糙脉孢菌1602产酶条件优化

通过优化设计，确定纤维素高产菌株Neurospora crassa 1602摇瓶发酵最佳产酶条件为：培养液初始pH值为5、5，培养温度为28℃，摇瓶转速为150rpm，培养96h；3％玉米芯粉、0．5％麸皮酸水解液(0．6mol/L)能够促进产酶，最适宜的有机氮源为黄豆粉；最适宜的无机氮源为NH4HSO4．在最适发酵条件下，其纤维酶的活力CMCase为10．34IU／ml．FPase为0．71IU／ml．     

枯草芽孢杆菌工程茵产耐酸性高温a-淀粉酶发酵条件的优化

利用基因工程手段获得的产耐酸性高温弘淀粉酶基因枯草芽孢杆菌工程菌株pWB—amyd／WB600,通过单因素筛选及正交实验进行发酵培养基优化,得到的最佳配方为（g／L）：玉米粉20,蛋白胨30,CaC120．5,Na2HP048．同时对实验室摇瓶条件下液体发酵的主要影响因素初始pH、接种量、装液量、转速、温度等进行探讨,确定了最佳培养条件：37℃、pH6．5、200r／min摇床培养36h,接种量为2％,装液量为30mL／250mL．在此优化条件下,耐酸性高温弘淀粉酶活力达到3980U／mL,是未优化条件下的2．1倍．     

重组大肠杆菌DH5α生产rhTum-5-NGR培养条件的优化

目的提高重组大肠杆菌DH5α生产rhTum-5-NGR的能力。方法在摇瓶中研究了种子菌龄、接种量和诱导时机等因素对菌体生长及rhTum-5-NGR表达量的影响。结果最佳条件为接种量2%,初始pH为7.2,装液量30%,37℃培养至OD_(600)为2.3左右时加入0.5mmol/L IPTG,诱导表达4h。在此条件下,摇瓶中rhTum-5-NGR的表达量占菌体总蛋白的40.1%,光密度为5.94,生产能力为2.38,较优化前(0.82)提高了1.9倍。结论构建的工程菌发酵的稳定性和重复性良好,为肿瘤新药rhTum-5-NGR的工业化生产奠定基础。