孤儿受体TR2 mRNA在恒河猴睾丸中表达的研究

以孤儿受体ＴＲ２ ｃＤＮＡ５＇－端的一段片段为模板体外转录的地高辛标记的ｃＤＮＡ及α－＾３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记的该片段ｃＤＮＡ为探针,用原位杂交和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交的方法研究孤儿受体ＴＲ２ｍＲＮＡ在恒河猴睾丸中的细胞定位和特异表达。结果表明ＴＲ２ｍＲＮＡ在恒河猴睾丸中特异定位于生精细胞,主要在处于减数分裂期的分化程度较高的生精细胞,其表达在不同的曲细精管有明显的差异,主要在处于减数分裂期的分化程度     

孤儿受体TR3 mRNA在大鼠卵泡中的表达和定位

采用原位杂交方法,研究了孤儿受体ＴＲ３ｍＲＮＡ在大鼠卵泡早期发育过程中的定位,结果ＴＲ３ｍＲＮＡ首先在出生后２ｄ（Ｄ２）的卵巢间质细胞中表达;随后在出生后４ｄＤ４）的初级卵泡颗粒细胞（ＧＣ）中表达,ＴＲ３ｍＲＮＡ在ＧＣ的表达随卵泡的发育而增另,在Ｄ６其高量表达逐渐转至ＧＣ外层和膜细胞（ＴＣ）内层,这种表达方式一直维持到小窦状卵泡期（Ｄ１０￣１６）,在Ｄ３０９某些小窦状卵泡的ＧＣ内层又有较高量的表达     

孤儿受体TR3蛋白及其mRNA在大鼠睾丸中的定位和表达研究

孤儿受体(Orphan receptor)是一类目前还未发现其配体的核受体,它与类固醇激素受体、甲状腺激素受体及维生素D3受体同属一个家族。目前发现的孤儿受体成员众多,其中TR3(NGFIB,Nur 77)是一种独特的孤儿受体,它是早期即刻表达基因(immediate-early gene)的产物,其表达可被血清生长因子等多种刺激所诱导。TR3的生理功能目前还不完全清楚,已知TR3参与丘脑下部-垂体-肾上腺轴激素调节和神经调节,在T细胞活化所诱导的细胞程序化死亡(apoptosis)中起关键作用,并调控类固醇21-羟化酶基因的表达。目前国际上对TR3的研究主要集中在基因结构和调控机理方面,而对其在睾丸内受体蛋白和其mRNA的定位和表达的研究则未见报道。我们用免疫组织化学和原位杂交的方法观察了孤儿受体TR3蛋白及其mRNA在大鼠睾丸中的定位和表达。结果表明,在大鼠睾丸中孤儿受体TR3蛋白特异定位于生精细胞,其mRNA在生精细胞特异表达,说明TR3在精子发生过程中可能起着重要作用。     

DPH2L基因在细胞分化/凋亡中的降调节——mRNA差异显示的应用

为鉴定维甲酸诱导的人肺癌细胞分化／凋亡相关基因,采用ｍＲＮＡ差异显示的方法对全反式维甲酸处理前后的人肺腺癌细胞系ＧＬＣ８２的ｍＲＮＡ表达模式进行了分析。６个ｃＤＮＡ片段被分离和克隆。其中１个对就于序列已知而功能未知的ＤＰＨ２Ｌ基因。该基因的２．３ｋｂ全长ｃＤＮＡ最初是从人卵巢癌的关键缺失位点１７ｐ１３．３上分离出来,并被认为是一个候选的肿瘤抑制基因。结果显示ＤＰＨ２Ｌ是一个广泛的基因,除已报道的２     

AA98靶分子在恒河猴胎盘发生过程中的表达及功能

用Western blot和免疫组织化学方法研究了一种新血管内皮因子—— AA98的靶分子在恒河猴早期胎盘发生过程中的表达. AA98靶分子主要在血管内皮细胞和部分胎盘细胞滋养层细胞(CTC)上表达, 在新生小血管内皮细胞上的表达高于成熟血管内皮细胞; AA98靶分子的表达与CTC的侵入活动具有相关性. 胎盘发育过程中, AA98靶分子在基板区CTC上的表达有明显降低趋势; 在CTC从细胞柱顶端迁移到胎盘基板区的过程中, AA98靶分子的表达逐渐增加, 在侵入以及基本完成螺旋动脉改造的CTC上有AA98强阳性染色. AA98靶分子在灵长类胎盘发生过程中的时空特异性表达说明, 它可能在血管发生、CTC迁移和扩展以及对螺旋动脉的改造过程中有重要作用.     

bcl-2基因在蛇毒诱导的血管内皮细胞凋亡中表达增加

通过去除培养液中生长因子和向培养液中加入响尾蛇毒两种方法诱导人脐带静脉血管内皮细胞发生凋亡中 用ｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法检测被片处理细胞的ｂｃｌ－２基因的表达,结果表明在正常２的细胞和用去除生长因子诱导亡垢细胞中未检测到ｂｃｌ－２基因的表达,而在１０μｇ／ｍｌ的蛇毒诱导细胞凋亡６ｈ后ｂｃｌ－２基因表达增加,并且其ｍＲＮＡ剪接为两条首次发现ｂｃｌ－２基因在蛇毒诱导的血管内皮细胞凋亡中表达增加和剪接     

内皮素A型受体(ET_A-R)基因在大鼠心血管系统细胞中的表达

内皮素A型受体cDNA由Lin首先从大鼠肝脏cDNA文库中克隆出来.它为在分子生物学水平研究ET受体提供了一个可靠的基础.现已证明,ET受体主要分为两种亚型(A型和B型).A型受体主要分布在平滑肌细胞,B型受体则主要存在于内皮细胞.这两种亚型受体是由不同基因编码,ET和ET_A受体结合后,可使血管收缩,引起平滑肌细胞的增殖,可能与高血压的发病有密切关系.而当ET和ET_B受体结合后,则会引起EDRF等舒血管物质的释放.     

杆状病毒诱导凋亡昆虫细胞中的线粒体反应和Ca2+的变化

以罗丹明123作为线粒体跨膜电位荧光标记探针, 流式细胞术和激光共聚焦显微镜研究显示, SfaMNPV诱导凋亡的斜纹夜蛾SL-1细胞, 线粒体跨膜电位(∆Ψm)产生明显改变, 病毒接种后4 h, 膜电位开始下降, 随着病毒感染进程的延续, 线粒体膜电位∆Ψm持续降低. 利用Western 杂交分析定位于线粒体的Bcl-2蛋白, 结果表明, 线粒体Bcl-2蛋白含量随病毒感染逐渐减小, 表达水平降低, 病毒感染下调了Bcl-2蛋白的表达. Western杂交检测到显示细胞色素c从线粒体向细胞质中释放, 并在细胞质逐渐积累, 呈时间依赖性特征. 病毒感染诱发的线粒体反应, 提示杆状病毒诱导昆虫细胞凋亡, 可能存在线粒体介导的凋亡信号转导途径. 以Ca²⁺荧光探针Fluo-3/AM负载, 激光共聚焦显微镜观察和荧光分光光度计测定凋亡细胞 [Ca²⁺]_i浓度的变化, 检测到病毒诱导凋亡细胞内的[Ca²⁺]_i浓度明显升高, 细胞外Ca²⁺内流; 在EGTA抑制胞外钙离子内流和细胞质Ca²⁺钳制状态下, PI染色后流式细胞仪检测显示细胞凋亡不受影响, 说明胞质内游离Ca²⁺升高和胞外钙离子内流不是细胞凋亡的主要诱因, 提示内质网钙库Ca²⁺排空可能是SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡信号转导通路中的重要媒介.