全反式维甲酸对小鼠胚胎不同阶段神经干细胞诱导作用研究

目的:探讨全反式维甲酸对小鼠胚胎不同阶段神经干细胞(NSCs)的诱导分化情况.方法:分离孕12.5d及15.5d的胚胎小鼠脑皮质.取第3代NSCs,用含1μmol·L-1的全反式维甲酸在体外诱导小鼠胚胎不同阶段的NSCs.诱导5d后,通过神经元微管相关蛋白2(MAP2)免疫荧光染色和Westernblots检测NSCs分化为神经元的比例.结果:与对照组相比,全反式维甲酸可明显提高神经元分化的比例.E12.5干细胞和E15.5胚胎干细胞分化为神经元的比例分别为30%±1.47%和16.21%±1.36%.结论全反式维甲酸具有显著的促神经干细胞分化成神经元的效应,并对胚胎不同阶段神经干细胞的诱导作用有所不同.     

缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响

目的:探讨缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液(HP)对Hep G2细胞缺氧耐受性的影响.方法:用4种浓度的HP作用于缺氧(2%O2)培养HepG2细胞,以同浓度正常小鼠脑匀浆提取液(NP)作对照,检测了在缺氧培养后,Hep G2细胞的MTT值、早期凋亡率(Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测)、晚期凋亡率(Hoechst33258染色荧光显微镜检测).结果:低浓度HP对Hep G2细胞有保护作用,而高浓度HP对Hep G2细胞有损伤作用.结论:HP的作用有浓度依赖性和时间依赖性.     

丹酚酸B诱导分化的小鼠胎脑神经干细胞膜结构特征

目的:观察丹酚酸B诱导小鼠胎脑神经干细胞分化后细胞膜结构.方法:取孕13.5 d小鼠胎脑,机械分离神经干细胞,用Nestin免疫细胞化学进行鉴定.丹酚酸B诱导其分化为神经元样细胞,用原子力显微镜观察分化后的细胞膜结构.结果:神经干细胞经诱导分化为典型的神经元形态,细胞呈聚集悬浮生长,发出突起和分支.用原子力显微镜观察到对照组细胞膜有一些形态不规则,边缘光滑的窗孔样结构及小凹,膜表面粗糙,丹酚酸组亦有相似结构,窗孔样结构大而深且小凹聚集,其密度较对照组明显增大(P＜0.05),膜粗糙度与对照组无显著差异(P＞0.05).结论:丹酚酸B诱导神经干细胞分化的神经元细胞膜的窗孔样结构与小凹明显增多,可能与增强细胞内外物质交换功能和促进细胞内信号转导有关.     

NGF诱导PC12细胞转化为神经样细胞微管相关蛋白2(MAP2)的表达

目的探讨神经生长因子(NGF)诱导PC12细胞分化为神经元样细胞时MAP2的表达变化情况.方法细胞培养6 d后应用共聚焦显微镜观察MAP2表达情况;Western Blot法检测诱导不同时间点MAP2的表达情况.结果免疫组化结果显示:MAP2表达呈阳性;免疫印迹结果显示:MAP2蛋白表达在不同时间点呈动态变化,即随诱导时间延长呈递增趋势.结论 NGF成功诱导PC12细胞分化为神经样细胞,为缺血性脑卒中的体外细胞研究提供细胞参考.     

诱导MSCs转分化为视网膜神经样细胞的应用

近年来,人们研究发现骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外可经生长因子诱导,抗氧化剂诱导,中药诱导,增加细胞内cAMP等不同途径的诱导方法,分化为神经外胚层来源的神经元及神经胶质细胞,因此一些研究者尝试以上诱导途径使MSCs分化为视网膜神经样细胞,用于体内相关疾病的细胞替代治疗,为多种疾病带来了新的治疗思路。     

rhBMP-2对SD大鼠MSCs骨向分化的影响及机制研究

目的:通过观察重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)对骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、骨向分化能力的影响,以及对内源性因子TGF-β1、Smad4和下游细胞因子Cbfα1的作用,阐释其对MSCs骨向分化影响可能的作用机制.方法:运用全骨髓贴壁法分离、纯化大鼠MSCs;运用MTT法检测质量浓度分别为0、5、10、20、40、80、100ng/mL rhBMP-2对SD大鼠MSCs增殖活性的影响;以碱性磷酸酶(ALP)活性及ALP染色阳性率确定rhBMP-2的最佳促MSCs骨向分化浓度,并以该浓度对MSCs骨向分化进行干预.按是否添加经典成骨诱导液将实验分为:空白组,经典组,rhBMP-2组,rhBMP-2+经典组.通过检测ALP、I型胶原(Col I)、骨钙素(BGP)和钙化结节的表达,以评价各组骨向分化能力;通过检测TGF-β1、Smad4、Cbfα1 mRNA的表达,以评价各组促MSCs骨向分化的作用机制.结果:rhBMP-2的最佳促MSCs增殖质量浓度为80 ng/mL,最佳促MSCs骨向分化质量浓度为40 ng/mL.经典组和rhBMP-2诱导各组均能促进MSCs骨向分化,刺激TGF-β1分泌,并上调Smad4、Cbfα1 mRNA的基因表达,而TGF-β1在早期分泌量最高,提示其可能在MSCs早期骨向分化过程起重要作用.结论:rhBMP-2诱导各组均有促MSCs骨向分化的作用,可能是通过促进TGF-β1的分泌,启动TGF-β超家族/Smads信号通路调控MSCs的骨向分化.     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞表达酪氨酸羟化酶

目的:探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)表达酪氨酸羟化酶,为帕金森病细胞移植替代治疗提供特异性分化的细胞.方法:在无菌条件下从SD大鼠的股骨中分离骨髓间充质干细胞,体外培养传3代后,用表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和抗坏血酸诱导MSCs 表达酪氨酸羟化酶.在镜下,观察MSCs 在诱导前后的形态变化;用免疫荧光染色检测酪氨酸羟化酶的表达.结果:MSCs经诱导分化后,胞体逐渐变圆,并伸出神经轴突、树突样突起;免疫荧光化学表明细胞酪氨酸羟化酶染色呈强阳性反应.结论: SD大鼠骨髓间充质干细胞在体外能被定向诱导表达酪氨酸羟化酶,有可能为帕金森病治疗提供特异性分化的细胞.     

慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响

运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定MSCs纯度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染MSCs,作用48h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度;MTT法检测转染后MSCs的细胞活力.诱导MSCs-GFP向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白desmin和α-SMA的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的MSCs表达CD44、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和CD188,符合干细胞特性.MOI为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源MSCs的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了MSCs细胞,且此标记对MSCs的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响.     

人骨髓间充质干细胞体外扩增和向神经细胞定向诱导分化的研究

骨髓间充质干细胞(MSC)是一类存在于骨髓中的具有多向分化潜能的干细胞,在体外不仅可以分化为间充质类细胞,而且可以分化为非间充质类细胞.研究了人骨髓间充质干细胞的体外分离、扩增和向神经细胞的定向诱导分化条件.从骨髓中分离MSC,用MesenCult培养基进行纯化和扩增培养.每扩增一代,细胞数量增加约2～3倍,在体外扩增12代后扩增约4.6×10 4 倍;诱导不同扩增代数的MSC向神经细胞分化,诱导后的细胞平均有80%以上呈现典型的神经元样表型.免疫组化法检测发现,神经元样细胞强表达神经丝蛋白和神经元特异性烯醇化酶,组织化学法检测观察到神经元特有结构尼氏体,表明MSC在体外具有向神经细胞分化的潜能.     

人骨髓间充质干细胞不同亚群

为比较不同亚群的人骨髓间充质干细胞(human bone mesenchymal stem cell, hBMSC)自我更新和分化能力,通过获赠的人髂骨骨髓标本,联合运用密度梯度离心和差异贴壁法分离MSCs , 用10 μm 滤膜将不同群体细胞分离,倒置相差显微镜观察不同亚群细胞的形态;流式细胞仪检测BMSC不同亚群细胞的表型;在地塞米松、Vit C、β-磷酸甘油钠作用下将不同亚型细胞向成骨细胞诱导分化,分别观察其分化能力.结果成熟的MSC,即mMSCs 细胞(mature cells)呈纤维样梭形, RS 细胞(rapidly MSC self-renewing cells)呈圆形.RS细胞增殖能力明显强于mMSCs.经定向诱导分化后,RS细胞向成骨细胞分化能力较mMSCs细胞强.说明RS 细胞较之mMSC细胞可能是一种更原始的中胚层前体细胞,具有更强的自我更新和分化潜能.     

北五味子提取液对小鼠耐缺氧和抗疲劳能力的影响

目的：研究北五味子提取液（SCE）对小鼠耐缺氧和抗疲劳能力的影响．方法：选取健康昆明种小鼠120只,随机分为空白对照组和SCE低、中、高剂量组,每组30只,连续灌胃7d．观察小鼠常压耐缺氧存活时间和负重游泳时间,测定游泳前、游泳10min和游泳后20min血清乳酸含量的变化．结果：SCE能显著增加小鼠常压缺氧存活时间和负重游泳时间,并能显著降低游泳后血清乳酸的增加量．结论：SCE能够明显提高小鼠耐缺氧和抗疲劳的能力．     

Allograftic bone marrow-derived mesenchymal stem cells transplanted into heart infarcted model of rabbit to renovate infarcted heart

OBJECTIVE: To investigate the directed transplantation of allograftic bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) in myocardial infarcted (MI) model rabbits. MATERIALS AND METHODS: Rabbits were divided into 3 groups, heart infarcted model with MSCs transplanted treatment (MSCs group, n = 12), heart infarcted model with PBS injection (control group, n = 20), sham operation with PBS injection (sham group, n = 17). MSCs labelled by BrdUrd were injected into the MI area of the MSCs group. The same volume of PBS was injected into the MI area of the control group and sham group. The mortality, LVIDd, LVIDs and LVEF of the two groups were compared 4 weeks later. Tropomyosin inhibitory component (Tn I) and BrdUrd immunohistochemistry identified the engrafted cells 4 weeks after transplantation. RESULT: The mortality of the MSCs group was 16.7% (2/12), and remarkably lower than the control group's mortality [35% (7/20) (P < 0.05)]. Among the animals that survived for 4 weeks, the LVIDd and LVIDs of the MSCs group after operation were 1.17+/-0.21 cm and 0.74+/-0.13 cm, and remarkably lower than those of the model group, which were 1.64+/-0.14 cm and 1.19+/-0.12 cm (P < 0.05); the LVEF of the MSCs group after operation was 63+/-6%, and remarkably higher than that of the model group, which was 53+/-6% (P < 0.05). Among the 10 cases of animals that survived for 4 weeks in the MSCs group, in 8 cases (80%), the transplanted cells survived in the non MI, MI region and its periphery, and even farther away; part of them differentiated into cardiomyocytes; in 7 cases (70%), the transplanted cells participated in the formation of blood vessel tissue in the MI region. CONCLUSION: Transplanted allograftic MSCs can survive and differentiate into cardiomyocytes, form the blood vessels in the MI region. MSCs transplantation could improve the heart function after MI.     

骨髓间充质干细胞对放射性胸腺损伤的修复作用

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对放射性胸腺损伤的修复作用.方法 C57BL/6小鼠行1.75Gy X 线全身照射,每周1次,连续4周.实验设正常对照组、照射组及照射+MSCs组,于末次照射后30、60、90 d称量各组小鼠体质量.取胸腺组织,计算胸腺质量指数,并通过组织学观察MSCs对胸腺组织损伤的修复作用.结...     

东亚钳蝎提取物对致痫小鼠大脑GABAA受体活性的影响

目的:研究东亚钳蝎提取物对戊四氮致痫小鼠发作潜伏期的作用并探讨其机理。方法:采用戊四氮致痫小鼠模型,给予实验动物东亚钳蝎提取物灌胃,并以丙戊酸钠为对照,观察其对致痫小鼠发作潜伏期和大脑GABAA受体结合活性的影响。结果:东亚钳蝎提取物中剂量组(500 mg/kg)的惊厥潜伏期比模型鼠明显延长(p<0.05),大脑皮层GABAA受体的结合活性显著提高(p<0.001)。低剂量(250 mg/kg)和高剂量(1 000 mg/kg)治疗组与阳性对照药的作用相当。结论:东亚钳蝎提取物的抗癫痫作用机理可能与提高大脑皮层GABAA受体的结合活性有关。     

Immunotherapy of intracranial G422 glioblastoma with dendritic cells pulsed with tumor extract or RNA

OBJECTIVE: To investigate the anti-tumor efficacy of dendritic cell (DC)-based vaccines pulsed with tumor extracts or RNA in a mouse model of intracranial G422 glioblastoma. METHODS: Bone marrow-derived DCs were pulsed ex vivo with tumor extracts or RNA. Ninety female mice harboring 4-day-old intracranial G422 glioblastomas and 126 normal mice were treated with three spaced one week apart subcutaneous injections either with PBS, unpulsed DCs, G422 tumor extracts, RNA, DCs pulsed with G422 tumor extracts (DC/extract) or with RNA (DC/RNA). Seven days after the third immunization of normal mice, the spleens of 36 of them were harvested for cytotoxic T lyphocyte (CTL) assays and the others were challenged in the brain with G422 tumor cells. All the treated mice were followed for survival. Some mice brains were removed and examined pathologically when they died. RESULTS: Immunization using DC/extract or DC/RNA significantly induced G422-specific CTL responses compared with control groups (P<0.01). Vaccination with DC/extract or DC/RNA, either prior to G422 tumor challenge or in tumor-harboring mice, significantly prolonged survival compared with other control groups (P<0.01). CONCLUSION: DCs pulsed with tumor extracts or RNA derived from autologous tumors has potential antitumor effects via activation of cell-mediated immunity. Our results suggest a useful therapeutic strategy against gliomas.     

脑栓通颗粒对实验性脑缺血的保护作用

目的研究脑栓通颗粒对实验性脑缺血的保护作用。方法采用小鼠断头后张口喘气的方法,观察脑栓通颗粒对小鼠耐缺氧的影响;常压耐缺氧法考察脑栓通颗粒的抗缺氧作用;采用尾静脉注射伊文思蓝溶液,测定脑内的伊文思蓝含量,观察脑栓通颗粒对小鼠血脑通透性的影响;采用结扎大鼠双侧颈总动脉的方法,考察脑栓通颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。结果脑栓通颗粒能明显延长小鼠断头后喘气时间,对延长小鼠常压耐缺氧下存活时间的效果不明显;脑栓通颗粒中剂量组和高剂量组能明显增加小鼠脑内的伊文思蓝含量,增强血脑通透性;脑栓通颗粒能明显减轻缺血再灌注后大鼠的脑组织含水量,改善水肿状态。结论脑栓通颗粒对实验性脑缺血有保护作用。     

苍耳子提取物对斑马鱼的发育及运动行为的毒性研究

为研究苍耳子提取物对斑马鱼胚胎发育及运动行为的影响,取受精后12/24 h斑马鱼胚胎,将胚胎分别置于不同浓度苍耳子提取物溶液中,在作用不同时间后,显微镜下统计孵化率、死亡率和心率;取受精后120 h斑马鱼胚胎,用不同浓度苍耳子提取物处理60 min后,利用行为学分析系统统计各组斑马鱼在0~10、10~20、20~30 min内行为轨迹,基于游行距离与游行时间得到游行速度,并统计转圈值。结果表明,苍耳子提取物对受精后12 h斑马鱼胚胎的发育有毒性,使斑马鱼胚胎的孵化率降低,在提取物浓度大于15μg/mL时,孵化率低于40%;0.93μg/mL苍耳子提取物可提高24 h斑马鱼胚胎的心率(P≤0.01),当提取物浓度大于7.5μg/mL时,心率显著性降低(P≤0.01);在行为学分析中发现,当苍耳子提取物浓度大于3μg/mL时,游行速度与转圈均值明显增加。研究认为,苍耳子提取物对斑马鱼胚胎发育有毒性作用,能够兴奋斑马鱼胚胎心率并增加其游行速度。     

雪莲水煎剂的抗疲劳和耐缺氧作用研究

本项研究采用小鼠游泳实验和不同条件下的缺氧实验,观察了雪莲花的抗疲劳和耐缺氧作用。结果表明雪莲能显著延长小鼠的游泳时间和常压、减压缺氧及异丙肾上腺素(ISO)增加耗氧量的生存时间。但是,雪莲不能对抗氰化钾(KCN)和亚硝酸钠(NaNO_2)所致的组织细胞缺氧。这表明雪莲能提高机体整体的耐缺氧能力和明显延长ISO 所致耗氧量增加的小鼠的存活时间。     

胎心率监护与胎儿生长受限围生期临床观察

目的探讨妊娠末期对胎儿生长受限（FGR）的胎心率监护能及时了解胎儿体内储备能力,而且对选择正确的分娩方式十分重要。方法对2003年8月至2007年8月在我院进行胎心率监护后分娩的足月新生儿体重〈2500g的FGR产妇41例进行回顾性分析。结果41例FGR监护中有28例（68．3％）提示胎儿富内缺氧。其中产前无刺激试验（NST）18例中阳性者10例,阳性率为55．6％,催产索应激试验（OCT）23例,阳性者18例,阳性率为78．3％。结论对监护结果异常或FGR监护呈阳性应连续监护以重新评价,同时作诊断性破水,羊水清可以严密观察下尽快结束分娩;必要时阴道助产,如羊水粪样立即手术结束分娩。胎儿监护呈晚期持续性减速者选择分娩方式更应慎重,不宜进行剖宫手术。