植物体细胞胚发生的同步控制：I 枸杞细胞悬浮培养系…

以枸杞幼茎和叶片为外植体，诱导出胚性愈伤组织。经振荡悬浮培养、过筛、分离得到单细胞和细胞聚集体悬浮液。适当降低大量元素浓度有利于细胞生长。生长曲线表明，悬浮培养第５天和第８天的细胞曲线较平缓且生长良好，可用于体细胞胚的同步化控制研究。     

柑桔幼胚培养的直接体细胞胚发生与植株再生

将柑桔幼胚分离接种于MS固体诱导培养基上诱导了体细胞胚直接高频发生并再生植株，初步建立了柑桔体细胞胚直接高频发生的实验系统。研究结果表明，柑桔幼胚在附加1mg／LIAA和20mg／LBA的MS培养基上的直接体细胞胚诱导频率最高。     

花生体细胞胚和丛生芽的诱导及扩繁培养

以花生成熟胚培养成的无菌苗叶节为外植体 ,在高浓度 6-BA ( 3 0 mg/ L) MS培养基中 ,光强 2 0 0 0Lx,( 2 5± 3 )℃和 1 4 / 1 0光暗比条件下培养 ,50天后全部诱导分化出整齐一致的丛生芽 ,每个外植体平均产生 8.2 5个丛生芽 ;切下带少许丛生芽的组织块转入含 6-BA ( 3 0 mg/ L) ,LH ( 40 0 mg/ L)和 YE ( 0 .0 1 % )的 MS培养基中 ,可诱导出新的丛生芽 ,诱导率达 98.70 % ,平均出芽 1 3 .86个 .将花生成熟胚轴转接于含NAA ( 1 mg/ L)和 6-BA ( 3 mg/ L) MS培养基中 ,2 0～ 3 0天后 ,诱导出大量正常的体细胞胚 ,诱导率达 95.7% ,将胚切成小块转入含 2 ,4 -D ( 2 0 mg/ L) ,6-BA ( 3 mg/ L )和 LH ( 2 0 0 m g/ L) MS培养基中 ,经 1 5天培养 ,诱导出白色致密的胚性愈伤组织 .     

甘薯品种“白星”体细胞胚的诱导

将甘薯品种“白星”带2个叶原基的茎尖接种于含5μmol/L 2,4-D的修改的MS培养基上能诱导出胚性俞伤组织;胚性愈伤组织在不含生长素类的修改的MS培养基上进一步发育成子叶胚;子叶胚在1/2MS培养基上能发育成试管植株.     

植物体细胞胚发生的同步控制──Ⅰ枸杞细胞悬浮培养系的建立

以枸杞幼茎和叶片为外植体，诱导出胚性愈伤组织。经振荡悬浮培养、过筛、分离得到单细胞和细胞聚集体悬浮液；适当降低大量元素浓度有利于细胞生长。生长曲线表明，悬浮培养第５天和第８天的细胞曲线较平缓且生长良好，可用于体细胞胚的同步化控制研究。     

中国七叶树悬浮培养体细胞球形胚的增殖与发育研究

以中国七叶树(Aesculus chinensis Bunge)的胚性愈伤组织为材料,进行悬浮培养诱导体胚增殖和发育研究。在MS+2,4D(3 mg/L)+NAA(1 mg/L)+KNO3(1.9 mg/L)+蔗糖(30 g/L)的液体培养基中可获得同步化程度较高的球形胚;采用MS+2,4D(2 mg/L)+KT(0.2 mg/L)+蔗糖(40 g/L)和MS+2,4D(3 mg/L)+BA(0.5 mg/L)+蔗糖(40 g/L),两种培养基均可使体细胞胚保持在球形胚阶段;而MS+TDZ(0.02 mg/L)+蔗糖(30 g/L)可有效解除对球形胚发育的阻遏,促使子叶胚的形成;建立了球形胚增殖和分化的两个悬浮培养体系,同时跟踪观测了液体培养基的pH变化,球形胚增殖方式和球形胚启动和发育动态,以及悬浮培养过程中体胚的形态结构变化。     

几种豆科牧草植物组织培养体细胞胚诱导研究

对鹰嘴紫云英、苜蓿、红豆草、甘肃棘豆、红三叶草、白三叶草、胡卢巴和扁蓿豆八种豆科植物的组织培养和体细胞胚诱导。不同种类的外植体在ＵＮ培养基上进行离体培养,均获得愈伤组织。     

甘薯胚性悬浮系的建立及其细胞生长特性研究

徐薯18叶片接种在附加2mg/L,4-D的MS固体培养基上，形成了质地松散的胚性愈伤组织，胚性愈伤组织在附加1mg/L,2,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养，建立了增殖迅速、分散度良好的具有较高体胚分化能力的细胞悬浮系。小型细胞团（直径小于350μm）以2％－4％的接种量转移到无激素MS液体培养基中，可分化出大量体胚。在继代初期，悬浮系pH值呈下降趋势，细胞处于旺盛分裂时期，导致悬浮系鲜质量、干质量、细胞紧实体积（PVC）的显著升值；4d以后，pH值逐渐回升，细胞分裂缓慢而体积增长迅速，导致鲜质量、PVC增加而干质量少有变化；6d以后pH值继续回升而细胞分裂和生长受到明显抑制。     

大花君子兰的胚培养及其胚状体的诱导

大花君子兰幼胚培养,其胚状体采用MS培养基(其中大量元素减半),附加ZT1毫克/升,NAA0.2毫克/升,IAA0.2毫克/升,蔗糖1.5％、琼脂0.65％、pH5.8％,在温度25±1℃、光照1200 Lx(10小时/天)下培养20天后即诱导出芽,然后转入壮苗发根培养基:MS培养基(其中大量元素减半)、附加BA0.05毫克/升、IBA0.2毫克/升、IAA0.6毫克/升,蔗糖、琼脂、pH及培养条件同上。培养三个星期后即长出叶片并发根2—3条。将试管苗鳞茎状部分切成0.5—1 cm见方的小块,接入壮苗发根培养基中,经2—3次(每次20天)继代培养形成8—9个胚状体,然后移至无激素的MS培养基中培养(培养条件同上),19天后转入壮苗发根培养基中,16天后相继长出根和叶,成为壮苗。最后经炼苗移栽至花盆,成活率可达100％。     

水稻佳辐占成熟种胚培养及其悬浮细胞系的建立

以优质早籼稻佳辐占成熟种胚为材料．研究外植体大小、激素对成熟种胚愈伤组织诱导率的影响，并高频快速建立起水稻胚性悬浮系．结果表明：在外植体较大并只添加2，4-D-种激素时，就可获得较高的愈伤组织诱导率，2，4-D浓度为1．5mg／L时，诱导率达95％；浓度为2mg／L时．诱导率可达100％．佳辐占成熟种胚组织培养最佳的条件为适当大小的外植体和添加浓度为2mg／L2，4-D．以4周龄的胚性愈伤组织为材料可高频快速建立起均质、分散性好的水稻胚性悬浮系，5周龄以上的胚性愈伤组织较难建立起水稻胚性悬浮系．     

香蕉胚性及非胚性悬浮培养的建立及其培养液中阿拉伯半乳糖蛋白含量的测定

测定了贡蕉花序外植体起始的胚性细胞悬浮系以及东莞大蕉薄片外植体起始的非胚性细胞悬浮系中，悬浮细胞分泌到培养基中的AGPs的含量。结果显示，香蕉细胞悬浮系在培养过程中分泌到培养基中的AGPs浓度与细胞系的发育状态相关，胚性细胞分泌的AGPs的含量高于非胚性细胞。该结果为今后研究AGPs与香蕉悬浮细胞胚性潜能的关系提供了可能性。     

几种豆科牧草外植体培养和体细胞胚诱导及人工种子研究

研究了鹰咀紫云英，苜蓿，红豆草，甘肃棘豆，红三叶草，白三叶草，胡卢巴和扁蓿豆八种豆科植物的组织培养和体细胞胚诱导。不同种类的外植体在附加不同成分的ＵＭ培养基上进行离体培养，均获得愈伤组织采用固体和乳浮两种方式进行分化诱导；     

埃斯基红豆草原生质体培养直接形成体细胞胚与再生植株

埃斯基红豆草花茎愈伤组织的原生质体在修改的ＫＭ８Ｐ和Ｖ－ＫＭ液体培养其中均能高频率地分裂和形成克隆，其分裂率为７１．４％－７６．１９％，在ＫＭ８Ｐ培养其中，原生质体经不等分裂可以直接形成体细胞胚，在Ｖ－ＫＭ培养其中形成的小愈伤组织培养也有体细胞胚的分化。     

濒危植物四合木（Tetraena mongolica Maxim.）悬浮培养下体细胞胚胎发生

将四合木（Tetraena mongolicaMaxim.）外植体诱导产生的愈伤组织进行细胞悬浮培养。通过实验在MS培养基附加2,4－D0.1mg/L,6-BA0.25mg/L,水解酪蛋白500mgL的液体培养基中培养,经120～150r/min摇床振荡分散建立细胞悬浮系,直到体细胞胚胎产生后转至无激素的固体培养基中产生再生植株。结果表明：四合木悬浮培养条件下可以得到胚状体,并形成试管苗。     

香蕉胚性及非胚性悬浮培养的建立及其培养液中阿拉伯半乳糖蛋白含量的测定

测定了贡蕉花序外植体起始的胚性细胞悬浮系以及东莞大蕉薄片外植体起始的非胚性细胞悬浮系中,悬浮细胞分泌到培养基中的AGPs的含量.结果显示,香蕉细胞悬浮系在培养过程中分泌到培养基中的AGPs浓度与细胞系的发育状态相关,胚性细胞分泌的AGPs的含量高于非胚性细胞.该结果为今后研究AGPs与香蕉悬浮细胞胚性潜能的关系提供了可能性.     

水稻佳辐占成熟种胚培养及其悬浮细胞系的建立

以优质早籼稻佳辐占成熟种胚为材料,研究外植体大小、激素对成熟种胚愈伤组织诱导率的影响,并高频快速建立起水稻胚性悬浮系.结果表明在外植体较大并只添加2,4-D一种激素时,就可获得较高的愈伤组织诱导率,2,4-D浓度为1.5 mg/L时,诱导率达95%;浓度为2 mg/L时,诱导率可达100%.佳辐占成熟种胚组织培养最佳的条件为适当大小的外植体和添加浓度为2 mg/L 2,4-D.以4周龄的胚性愈伤组织为材料可高频快速建立起均质、分散性好的水稻胚性悬浮系,5周龄以上的胚性愈伤组织较难建立起水稻胚性悬浮系.     

红松成熟胚愈伤组织诱导外植体选择及培养条件优化

【目的】通过培养条件的优化和适宜外植体类型的筛选,解决红松成熟胚愈伤组织诱导中存在的愈伤组织诱导率低、生长状态差、褐化率较高等问题,为建立红松成熟胚体胚发生体系奠定基础。【方法】用5种培养基类型、3种蔗糖浓度和9种植物生长调节剂组合,选择8种来源于成熟种子不同部位的外植体,对愈伤组织诱导的培养条件和适宜外植体类型进行优化和筛选。【结果】① 在5种培养基中,DCR培养基上愈伤组织诱导率高于其他培养基、生长状态好于其他培养基; ② 添加在DCR中的3种蔗糖浓度中,35 g/L时的愈伤组织诱导率最高(92.01%)、褐化率最低(17.01%); ③ DCR添加35 g/L蔗糖情况下,9种植物生长调节剂组合中NAA 2.0 mg/L + 6-BA 1.5 mg/L组合的愈伤组织诱导率最高、褐化率最低、生长状态最佳; ④ 在选出的优化培养条件下,8种来源外植体中,从裸胚上切离的下胚轴的愈伤组织诱导率高、褐化率低,且增殖能力强,具备胚性愈伤组织的形态解剖特征。【结论】红松成熟胚愈伤组织诱导的优化培养条件为DCR +蔗糖35 g/L + NAA 2.0 mg/L+ 6-BA 1.5 mg/L,适宜外植体裸胚上切离的下胚轴。     

胡萝卜愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养研究

分别以胡萝卜子叶、下胚轴和直根形成层为外植体诱导出愈伤组织,并建立细胞悬浮系.实验结果表明:胡萝卜下胚轴是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体;诱导松散型愈伤组织的最佳激素浓度配比是1.0mg/L2,4 D+0.5mg/LKT;细胞悬浮培养细胞最佳起始密度为1.125×104个/mL～2.325×104个/50mL时,7d～9d为对数生长期;继代培养4代～5代时,可得到稳定的悬浮细胞系.