禽致病性大肠杆菌研究进展

从大肠杆菌的危害性、毒力因子和致病机理等方面对国内外关于禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)的研究进行了综述。APEC的血清型众多,尤以O1,O2和O78最为常见,可引起鸡、火鸡等其他禽类的气囊炎、肝周炎、心包炎、败血症等其他肠道外疾病,给养禽业带来严重威胁和造成重大经济损失。     

貂致病性大肠杆菌的诊断与治疗

貂大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌的某些致病血清型引起的一类疾病的总称。主要临床症状为发病急剧,死亡率高。无菌条件下采取病死仔貂的心脏、肝脏、脾脏、肾脏进行病原菌的分离、鉴定、药敏试验、生化试验和动物回归试验等。结果表明引起该貂场仔貂发病的病原为致病性大肠杆菌,并且该菌对小白鼠有较强的致病力。根据试验结果可得出,大肠杆菌对仔貂危害严重,而且易产生耐药性,平时应合理的预防和治疗。     

银杏叶黄酮对大肠杆菌生物膜的抑制作用

以乙醇为提取溶剂从银杏叶中提取总黄酮,使用DA201大孔树脂对其进行纯化;测定了银杏叶黄酮对大肠杆菌的最小抑菌浓度（MIC）,并考察了对大肠杆菌生物膜形成和黏附性的影响,使用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定了银杏叶黄酮对胞外多糖含量的影响。结果表明,银杏叶黄酮对大肠杆菌的MIC为4 mg/mL;银杏叶黄酮对大肠杆菌生物膜的形成和黏附有抑制作用,其质量浓度为1倍MIC时,生物膜形成抑制率为59.09%,黏附性抑制率为28.99%;其质量浓度在1倍MIC以上时,对大肠杆菌生物膜多糖的形成有明显的抑制作用。     

致病性鸡大肠杆菌噬菌体的分离与效价测定

鉴于临床分离的致病性大肠杆菌的耐药谱很广,常规抗生素的治疗效果较差,死疫苗往往存在毒力返祖的问题.实验从污水中分离得到了5株噬菌体,采用自行分离和鉴定的大肠杆菌为宿主菌,经纯化增殖提高效价后进行裂解试验,取得了比较满意的效果.     

大肠杆菌在微塑料上定殖自主实验

环境中微塑料的浓度正逐年上升.微生物在微塑料上形成生物膜从而会影响其在水中的沉降和传输行为,并且可能影响病原微生物在水体中的输移.通过大肠杆菌的培养、 结晶紫染色和平板计数法分析了水体中溶解性有机物浓度对大肠杆菌在微塑料上的定殖,并分析了羟基自由基的产生对定殖的影响.结果发现水中溶解性有机物可以促进大肠杆菌的定殖.该实...     

川西北牦牛源产肠毒素大肠杆菌的分子流行病学调查

为调查川西北地区牦牛源产肠毒素大肠杆菌的流行情况,对采自川西北甘孜州和阿坝州的26份腹泻牦牛粪便样品进行大肠杆菌分离,分别以分离的大肠杆菌DNA和牦牛腹泻粪便样本提取的总DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,分析产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻中存在情况,同时比较两种DNA提取方法对产肠毒素大肠杆菌PCR检出率的差异;以分离自外表健康牦牛粪便的105株大肠杆菌DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,比较牦牛源产肠毒素大肠杆菌在外表健康牦牛和腹泻牦牛中的携带情况.结果:从26份牦牛腹泻粪便样本中共鉴定出84个大肠杆菌菌落携带K99菌毛基因,这些菌落分别来自所有26份牦牛腹泻样品,因此,牦牛腹泻样本100%分离并检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌;而粪便总DNA检测结果为K99+菌毛基因阳性率84.62%(22/26),粪便中提取的总DNA模板K99+菌毛基因PCR检出率略低于分离鉴定的细菌DNA检出率;105株外表健康牦牛粪便样本分离株中检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌34株,检出率为32.38%(34/105),产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻样本中的检出率显著高于外表健康牦牛粪便的检出率(P0.001).结果表明,产肠毒素大肠杆菌在牦牛粪便中存在广泛,是引起牦牛腹泻的一种重要病原菌;以粪便中提取的总DNA为模板,可快速检测牦牛粪便中产肠毒素大肠杆菌的存在.     

鸭致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

对四川省什邡县马景镇养鸭户发病鸭中分离的3株细菌,经培养特性及生化试验,鉴定为大肠杆菌.用临床上常用的22种抗菌素纸片对分离菌株进行药敏试验.结果表明:所分离的大肠杆菌对菌必治、丁胺卡那霉素和复达欣3种药物高度敏感,对头孢噻肟、痢特灵、庆大霉素、链霉素和氨曲南中度敏感,而对利福平、四环素及呋喃妥因等药物表现为耐药性.     

神奇杀星对致病性大肠杆菌的药敏研究

采用不同抗菌素与神奇杀星对比。对致病性大肠杆菌C83902（O8：K87，K888ac）和44499[O139：K82（B）；H1]进行药教试验，并查明神奇杀星的最低押菌浓度和最低杀菌浓度。为在临床上正确应用神奇杀星等抗菌药物提供科学的理论依据．     

内蒙古部分地区肉仔鸡致病性大肠杆菌生物学特性的研究

从内蒙古四个盟市分离到10种优势血清型的肉仔鸡致病性E.coli,对其进行生物学特性研究表明：电镜观察均具有菌毛，形态不完全一致；有的还可见到有鞭毛生长。均无溶血性，对1%、3%、5%鸡红细胞悬液均可产生明显的凝集作用(+++～++++)，加入甘露糖后，E.coliO1、O35、O54、O55、O103、O68表现为“+”凝集作用，而O5、O20、O2、O78则表现为抑制作用。所有血清型盐凝集阳性(SAT+)，并且都能摄入刚果红染料。     

鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了解鸡源致病性大肠杆菌的生物学特性和耐药性,试验通过采集病料、细菌分离培养、16S rRNA基因鉴定、致病性试验、药敏试验等方法。结果表明:分离出的20株细菌的培养特征、镜检特征均符合大肠杆菌特征;16S rRNA基因序列经BLAST比对与大肠杆菌同源性达99.9%～100%,确定20株分离菌为鸡源大肠杆菌;20株大肠杆菌的致病力为40%～100%;10株鸡源致病性大肠杆菌对15种抗菌药物均呈现多重耐药,耐药率为33.3%～93.3%,耐药情况较严重和复杂。     

超声波辐照对大肠杆菌细胞膜的影响

为了解大肠杆菌经超声波作用后其细胞膜的变化状况,采用荧光染料二乙酸荧光素、罗丹明123、二氯荧光黄双乙酸盐对大肠杆菌样品染色,并通过荧光分光光度计、荧光显微镜和透射电镜检测、观察.结果显示:荧光探针测定法可用于测定大肠杆菌细胞膜的变化.在超声波频率为25 kHz、电功率为300W的条件下处理90 s后,细胞结构完整,膜双分子层变模糊,表面有破损成小孔的地方,内含物外渗.膜通透性增加12.7%,膜电位下降26.7%,胞内活性氧水平上升.     

Expression of self-incompatibility ribonucleases of Antirrhinum in Escherichia coli

Self-incompatibility is an intraspecific reproductive barrier to prevent self-fertilization in the flowering plants.In many species,self-incompatibility is controlled by a single S locus with multiple alleles.So far,the only gene known in the S locus of the Solanaceae,Scrophulariaceae and Rosaceae encodes a class of ribonucleases,called self-incompatibility ribonucleases (S RNases),which have been shown to mediate stylar expression of self-incompatible reaction.As the first step to investigate their three-dimensional structure,we successfully expressed three biologically active S RNases of Antirrihnum (S2,S4 and S5) in Escherichia coli (E.coli).Their functional expressions caused no detrimental effect on host bacteria growth and provided a basis for a large scale preparation of S RNase proteins.Possible reasons for non-lethality of S RNases on E.coli are discussed.     

豹蛙酶的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据豹蛙酶的氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子设计引物,重叠延伸PCR法合成出目的基因,约350bp。将得到的片断克隆于载体pGEM-T中并测序,再连接至表达载体pET-22b(+)中,重组质粒转入大肠杆菌Rosetta中。转化的重组大肠杆菌用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导外源基因表达,采用Tricine-SDS-PAGE系统,分析目标蛋白主要以包涵体形式存在,其质量分数可达48.8%。利用液相电喷雾串联质谱方式(LC-ESI-MS/MS)鉴定蛋白,通过LCQ DECA XP Plus系统进行蛋白序列的分析,其覆盖率达到35%,确定了其蛋白质一级结构的正确性。     

不同环境温度下的大肠杆菌数量监测及生存机制研究

应用荧光染色和传统的培养法对不同温度下的大肠杆菌数量进行了监测，结果表明：随着时间的延长，传统培养法的监测结果逐步变小，直到为零，进入了非可培养状态，这种情况在温度为25℃下时尤其明显，而采用荧光染色法的实验结果相差不大，较准确地反映了客观情况。     

大肠杆菌和枯草芽胞杆菌的原生质体融合

本文对大肠杆菌（Escherichia coli）和枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）的原生质体融合进行了研究，获得了融合菌原生质体的再生，根据两种菌的形态和利用淀粉的能力上存在的明显差异，对融合菌的原生质体进行筛选，实验结果表明，融合细胞具有降解淀粉的能力，但不形成芽胞。     

抗CEACAM5纳米抗体在大肠杆菌中的高效周质表达

纳米抗体具有相对分子质量小、稳定性高、特异性强以及能够穿过血脑屏障等众多优势,而且其能够通过大肠杆菌、酵母等简单微生物大量表达。大肠杆菌周质表达纳米抗体是目前纳米抗体制备主要的方法之一,但是纳米抗体的表达水平还相对较低。以pET22b和pMES4为载体构建了两种重组表达质粒,并且比较了他们在不同宿主菌中表达纳米抗体的情况。结果表明,以pMES4为载体的大肠杆菌能够在周质中可溶性表达纳米抗体,而以pET22b为载体的大肠杆菌表达的纳米抗体无法分泌到周质空间中。随后,通过IPTG浓度优化及5 L发酵罐过程,控制实现了纳米抗体在大肠杆菌周质中的表达量达到308. 32 mg/L。研究提供了一种高效表达纳米抗体的方法,为纳米抗体的规模化制备奠定了技术基础。     

人脂联素在大肠杆菌中的可溶性表达

为了提高重组人脂联素在大肠杆菌中的可溶性,构建和表达了增溶标签与人脂联素的融合表达栽体.这些标签包括大肠杆茵硫氧还蛋白和NusA蛋白、酿酒酵母SUMO蛋白和噬热海洋茵Thermotoga maritime 的红素氧还蛋白.结果显示,所有的人脂联素融合蛋白在大肠杆茵中都获得了高水平的表达,但可溶性存在很大差异,说明不同融合标签对人脂联素可溶性表达的促进作用不同.其中,红素氧还蛋白与SUMO蛋白组合一起对人脂联素可溶性的增强作用最为显著,其相应的融合蛋白几乎全部可溶.另外,通过酵母SUMO/Ulp1反应,经His标签亲和层析纯化得到的人脂联素融合蛋白能被有效酶切,加工为人脂联素成熟肽产物.     

β-1,4-葡聚糖内切酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

利用PCR方法从一株短小芽孢杆菌H9克隆了编码葡聚糖内切酶的基因（该序列已经被已收录于GeneBank,登录号为EF620915）,序列分析表明该基因读码框为1980bp,编码659个氨基酸。预测的酶由两个不连续的结构域组成,其一为N-端催化结构域,由糖基水解酶家族9组成,第二个结构域为C-端底物结合结构域,由碳水化合物绑定结构域家族3组成。将基因构建在大肠杆菌表达载体pET20b中得到重组质粒pET20b-EglA,将重组载体转化至大肠菌株BL21(DE3)菌株,基因在大肠杆菌中得到了良好的分泌表达, SDS-电泳图谱表明酶的分子大小约为73KD。     

陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的血清型调查

研究了陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的流行血清型。对分离自腹泻仔猪粪便的131株疑似大肠埃希菌进行生化试验、溶血性试验分析,并对其血清型进行鉴定。121株分离菌符合大肠埃希菌的生化特征,鉴定率为92.37%;有溶血性的菌株占总分离株的81.82%(99/121),其中23株出现β溶血现象,76株出现α溶血现象,22株溶血现象不明显;血清型定型104株,占分离株的85.95%(104/121)。这些定型菌株涵盖了13种血清型,其中O80血清型分离率为28.85%(30/104),O141血清型为19.23%(20/104),O139血清型为9.62%(10/104);O6,O9,O20,O101各有6株;4株及以下的血清型的有O38,O45,O93,O138,O147,O157。血清型O80,O141和O139为陕西省致仔猪腹泻大肠埃希菌的优势血清型。     

大肠杆菌耐热性肠毒素（ST）的分子生物学研究进展

大肠杆菌的耐热性肠毒素（ST）在产肠毒素性大肠杆菌引起的腹泻中扮演重要的角色,对人类和家畜的健康构成很大的威胁。文章从ST的理化特性、致病机理等一般生物学特性到基因克隆、定点突变以及分子结构与功能的关系等分子生物学特征,全面概述了ST的分子生物学研究进展,对于从分子水平全面了解ST的结构、性质、致病机理以及免疫原性等生物学性状具有重要意义。