患病牦牛源大肠杆菌对10种不同抗菌药物敏感性试验

采用K-B纸片扩散法对67株患病牦牛源大肠杆菌进行粘杆菌素、多西环素、利福平等10种不同抗菌药物敏感性试验,试验数据采用Whonet5.4软件统计以分析牦牛源大肠杆菌的耐药率和耐药谱型.结果表明,牦牛源大肠杆菌对乙酰甲喹的耐药率为41.79%,其余9个药的耐药率均在80%以上,其中利福平、土霉素的耐药率为100%.耐药谱型以粘杆菌素/多西环素/利福平/磺胺嘧啶/替米考星/土霉素/萘啶酸/磺胺间甲嘧啶/磺胺二甲嘧啶为优势耐药谱型.     

动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测研究

氟喹诺酮类药物是一类广谱高效抗菌药物,随着该药在兽医临床和水产养殖广泛应用,有关氟喹诺酮类药物的不良反应和耐药性的报道越来越多,其残留问题已引起人们广泛的关注。用于氟喹诺酮类药物残留检测的方法主要有微生物法、液相色谱法、高效液相色谱法、高效薄层色谱法、液相色谱-质谱联用法、高效毛细管电泳法、高效免疫亲和色谱法、免疫分析法等。     

我国食品中非法添加物的监管--以动物性食品为例

食品中非法使用的添加物严重威胁着人们的健康,它们的非法使用引起社会的普遍关注.以动物性食品为例,介绍了我国对食品中非法添加物的监管情况.     

水貂源大肠杆菌对9种抗菌药物敏感性试验

为了解水貂源大肠杆菌对抗菌药物的敏感性,指导兽医临床有效防治大肠杆菌病.采集山东省某水貂养殖场水貂粪便;采用常规的分离、鉴定方法获得8株大肠杆菌菌株;采用K-B纸片扩散法检测菌株对9种抗菌药物的药物敏感性.结果表明,菌株对9种药物呈不同水平的耐药性(耐药率范围25.0~100.0%),对妥布霉素、阿米卡星100%耐药;对粘杆菌素、氟喹诺酮类呈较低耐药率;62.5%的菌株对所检测的8种药物耐药.以上结果说明了本次检测的水貂源大肠杆菌耐药性非常严重,临床上应根据药敏试验结果,合理和谨慎地使用抗菌药物以控制水貂大肠杆菌病.     

鸡源大肠杆菌对17种抗菌药的药敏测定

对从滩坊市主要养鸡场分离邮的20株致病性大肠杆菌进行了17种抗菌药的药敏实验，结果表明，这20种菌株除对氟哌酸（NOR）头孢哌酮（CFP）和头孢三嗪（CRO）未产生耐药性外，对其余14种抗菌药均有不同程度的耐药性，对红霉素（ERY），苯唑青霉素（OXA）和头孢潜新（CFX）普遍产生耐药性，20株菌中有14种耐药谱型，且多数为6种以上联合耐药性。     

河北省部分地区肉、蛋食品大肠杆菌污染状况的检测

为了解河北省肉食品大肠杆菌污染状况,从河北省内不同地区集贸市场和超市随机采集了生活用肉、蛋类等105个样品,采用国家标准法和PCR方法对样品进行了大肠杆菌的检测与鉴定。结果表明,从105个样品中检测到大肠杆菌19株,大肠杆菌总阳性率18.1%。其中,生鸡肉、生猪肉、生鸡蛋的大肠杆菌阳性率分别为35.3%,23.8%,16.7%;生羊肉、生牛肉、生鸭蛋、生虾没有检出大肠杆菌。19株大肠杆菌中从生鸡肉样品中检出产志贺样毒素大肠杆菌2株。河北省肉类食品总体上大肠杆菌污染程度较轻,但生鸡肉中大肠杆菌的检出率较高。     

猪源产ESBLs大肠杆菌三种耐药基因检测及分析

了解福建省闽西地区猪源产ESBLs大肠杆菌耐药现状。从龙岩市10个规模猪场分离的大肠杆菌中,按CLSI推荐的纸片扩散法筛选产ESBLs菌,对其分别用CTX-M、TEM和SHV等3种引物进行PCR扩增及测序分析。结果表明,105株大肠杆菌的产ESBLs检出率为28.6%(30/105);其ESBLs基因亚型以CTX-M型和TEM型为主,检出率分别为56.7%(17/30)和36.7%(11/30),SHV型检出率13.3%(4/30)较低;5株菌同时携带CTX-M和TEM基因,2株菌同时携带CTX-M和SHV基因;测序结果表明,共检测出3种基因型:CTX-M-15、TEM-2和SHV-12。     

大肠杆菌耐药机制和消除耐药性方法概述

由于广谱抗菌药的滥用以及细菌间耐药基因的转导等因素,导致耐药菌增多,尤其是大肠杆菌对常用抗菌药物耐药的发展越来越令人担忧．本文从大肠杆菌耐药的遗传学机制、生物化学机制和开发新抗菌药物及抑制剂方面的研究进行了综述,提供了大肠杆菌耐药特点及其规律的最新研究进展,从而为防治大肠杆菌耐药的产生及合理用药提供理论依据．     

甘南州动物性食品安全现存问题与对策

甘南州动物性食品生产较为原始,动物产地检疫、屠宰检疫、贸易防疫监管受客观条件限制而难以实施,动物产品市场卫生监管不力,致各种疫染、污染较重,安全隐患大。应针对不同生产形式实施改进和安全监控,强化市场卫生监管,改变不良习俗,保障动物性食品安全。     

动物性食品中蜡样芽胞杆菌的建模及风险评估应用进展

动物性食品有极高的营养价值,在食品组成中占有重要地位。蜡样芽胞杆菌是动物性食品中常见的一种食源性致病菌。综述了近年来国内外对蜡样芽胞杆菌的建模及在风险评估中的应用所开展的研究,对肉类、乳及乳制品、蛋及蛋制品等食物中建立的生长模型与失活模型的最新研究成果进行总结,概述了动态变化环境下的界面模型研究及模型在风险评估中的应用情况,最后对蜡样芽胞杆菌预测建模的研究及应用提出了展望,以期为今后的研究提供参考。     

致仔猪腹泻大肠杆菌的耐药性与质粒谱分析

对河北省不同地区发病猪场分离的已经过系统鉴定的12株猪源大肠杆菌,采用K-B纸片法进行了15种抗生素的耐药性检测,并提取质粒,对耐药谱和质粒谱型进行了比较分析。结果显示,分离菌株对氨苄西林的耐药率达到了100%,对阿莫西林的耐药率为91.7%,对四环素和复方新诺明的耐药率介于50%～70%。分离菌株存在多重耐药性,以耐4种、6种和7种药物为主,占总数的75%。对分离菌株耐药谱与质粒谱的分析表明,大肠杆菌的质粒携带与细菌的耐药性之间并没有明显的对应关系。     

三种大肠杆菌高效感受态的制备及转化

描述了一种改良的高效细菌感受态的制备和感受态细胞的保藏及细菌的转化方法.三种不同的大肠杆菌分别是DH5α,TG1和XL1blue,其中最有效的是XL1blue.每种菌株的感受态细胞制备的最佳光密度(OD600值)不同.对感受态细胞的存储时间及其与转化效率之间的关系也进行了研究,结果显示感受态细胞可以在-20℃存储7d,在-70℃存储15d.将常见的方法做了三种改进:首先是将CaCl2溶液改为TB溶液;其次是将培养基由LB换成S.O.C;再就是在质粒对感受态细胞的转化过程中加入DMSO或PEG8000.改良的细菌转化系统比常见的方法能提高转化效率约1000倍,是一种高效的细菌转化系统.     

STEC的耐药性监测和分析

目的了解各种标本来源的产志贺样毒素大肠杆菌(STEC)对常用抗生素的敏感性.方法采用WHO推荐的K-B法,进行分鉴定菌株对18种抗生素的药物敏感试验,依照NCCLS判定结果.结果各种来源产志贺样毒素的大肠杆菌共46株,O157型23株,其余为非O157型.全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%(13株),氨苄西林为30.4%(14株),红霉素为69.6%(32株),而且有5株对至少4种以上抗生素产生多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-红霉素-氨苄西林.非O157型STEC耐药菌次为122,而O157型为63.结论非O157型STEC对抗生素可能较易形成耐药性.     

豹蛙酶的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

根据豹蛙酶的氨基酸序列,采用大肠杆菌偏爱密码子设计引物,重叠延伸PCR法合成出目的基因,约350bp。将得到的片断克隆于载体pGEM-T中并测序,再连接至表达载体pET-22b(+)中,重组质粒转入大肠杆菌Rosetta中。转化的重组大肠杆菌用终浓度1 mmol/L的IPTG诱导外源基因表达,采用Tricine-SDS-PAGE系统,分析目标蛋白主要以包涵体形式存在,其质量分数可达48.8%。利用液相电喷雾串联质谱方式(LC-ESI-MS/MS)鉴定蛋白,通过LCQ DECA XP Plus系统进行蛋白序列的分析,其覆盖率达到35%,确定了其蛋白质一级结构的正确性。     

肺炎克雷伯氏菌D-乳酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

以肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增并克隆出D-乳酸脱氢酶的基因（ldhD）,将其连接到表达载体pET-22b(+)质粒上,构建pET-22b(+)-ldhD重组质粒,测序结果100%正确。将重组质粒pET-22b(+)-ldhD转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中,通过氨苄霉素抗性平板筛选,构建大肠杆菌BL21(DE3)-pET-22b(+)-ldhD基因工程菌。重组菌株经IPTG诱导表达,SDS-PAGE蛋白电泳分析,目标条带出现在分子量约37000处,表明D-乳酸脱氢酶基因ldhD在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达。采用紫外分光光度法测定其酶活,底物丙酮酸终浓度为10mmol/L时,在丙酮酸还原为D-乳酸反应方向D-乳酸脱氢酶表现出119.04U/mL的酶活力;底物D-乳酸终浓度为50mmol/L时,在D-乳酸转化为丙酮酸的逆反应方向中表现出0.89U/mL的酶活力。比酶活则分别为9.16U/mg和 0.07U/mg。通过Lineweaver-Burk双倒数作图法,计算出酶反应的米氏常数K_M为10.54mmol/L。经摇瓶发酵后,通过高效液相色谱测定产物,D-乳酸的产量达到3.09g/L。     

Expression of self-incompatibility ribonucleases of Antirrhinum in Escherichia coli

Self-incompatibility is an intraspecific reproductive barrier to prevent self-fertilization in the flowering plants.In many species,self-incompatibility is controlled by a single S locus with multiple alleles.So far,the only gene known in the S locus of the Solanaceae,Scrophulariaceae and Rosaceae encodes a class of ribonucleases,called self-incompatibility ribonucleases (S RNases),which have been shown to mediate stylar expression of self-incompatible reaction.As the first step to investigate their three-dimensional structure,we successfully expressed three biologically active S RNases of Antirrihnum (S2,S4 and S5) in Escherichia coli (E.coli).Their functional expressions caused no detrimental effect on host bacteria growth and provided a basis for a large scale preparation of S RNase proteins.Possible reasons for non-lethality of S RNases on E.coli are discussed.     

不同环境温度下的大肠杆菌数量监测及生存机制研究

应用荧光染色和传统的培养法对不同温度下的大肠杆菌数量进行了监测，结果表明：随着时间的延长，传统培养法的监测结果逐步变小，直到为零，进入了非可培养状态，这种情况在温度为25℃下时尤其明显，而采用荧光染色法的实验结果相差不大，较准确地反映了客观情况。