一步法和离心柱法提取小鼠肝组织RNA的比较研究

从动物组织中提取总RNA技术被广泛使用在现代生物学研究中.文中比较了两种从新鲜动物组织中提取、鉴定纯度及完整性较高的总RNA的技术方法.用进口离心柱法和自行研制的一步法RNA提取试剂TRI-pure分别提取12例小鼠肝脏组织的总RNA,并通过电泳和紫外分光光度计检测,鉴定其提取效率和纯度.两种方法提取小鼠肝组织总RNA的纯度和产量经t检验无显著性差异.自行研制的一步法RNA提取试剂TRIpure可以取代进口离心柱法.     

甜菜单体附加系M14与栽培甜菜蛋白质的SDS-PAGE比较分析

利用SDS- PAGE电泳比较分析了甜菜单体附加系M14与栽培甜菜在花蕾期蛋白水平上的差异.对甜菜单体附加系M14与栽培甜菜花蕾期蛋白的SDS-电泳图分析后,样品分别获得41与40条蛋白质条带,以栽培甜菜为对照甜菜单体附加系M14在花蕾期特异表达了3条蛋白质带,表达缺失了2个条带,初步推测其中可能有与M14进行无融合生殖相关蛋白质.     

甜菜M14品系特异表达基因ESTs的生物信息学分析

甜菜M14品系具有无融合生殖特性,为了获得M14品系特异表达的基因,本实验室前期利用抑制消减杂交(SSH)和mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术对M14品系和能够进行有性生殖的栽培甜菜A2Y品系进行了基因特异表达研究,获得了298条M14品系特异表达基因的ES-Ts。对这些ESTs进行生物信息学分析并进行了GO分类,筛选出5条可能与基因表达调控和细胞周期调控相关的ESTs,为进一步获得这些基因的全长序列并研究其功能奠定了基础,也为今后能在甜菜M14品系中寻找并克隆与无融合生殖相关的基因提供了可靠的保证。     

甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox启动子的克隆及序列分析

甜菜M14品系是带有白花甜菜染色体的栽培甜菜单体附加系,其染色体组成中除了包含18条栽培甜菜染色体外,还附加有白花甜菜第9号染色体,具有无融合生殖特性,无融合生殖能够固定杂种优势.在前期工作中,通过SSH、RACE等技术获得了甜菜M14品系特异表达基因BvM14-MADSbox的eDNA全长.通过6种限制性内切酶分别酶切M14品系基因组总DNA,再与相应接头连接,构建了6个DNA步移文库.根据基因BvM14-MADSbox cDNA序列设计引物,通过染色体步移技术克隆出该基因的上游DNA序列.经生物信息学分析,推测获得了BvM14-MADSbox基因上游1 718 bp的启动子序列,该序列含有启动子的基本元件TATA-box、CCAAT-box,和ARE、ERE、HSE、ABRE、CGTCA-motif等重要的顺式调控元件及一些光反应相关元件.该结果为今后BvM14-MADSbox基因的时空特异性表达调控机制奠定基础.     

甜菜无融合生殖单体附加系的繁殖传递特性

由栽培甜菜(Beta vulgaris L.)和白花甜菜(B.croolliflora Zoss.)杂交分离荻得的甜菜无融合生殖单体附加系具有高频率近100%传递的特性.经过四代传递分析,平均传递率达95%以上,表现为稳定传递.在其传递后代中,分离出BⅢ后代(VV+1C+V,2n=28)、二倍体(2n=18)非整倍体(2n＝29,2n＝20)等.无融合生殖单体附加系后代结实株数、结实率、单株种粒产量与其二倍体姊妹相比皆明显下降,说明它们的繁殖特性受到破坏,表现出雌配子体突变特征.本文对高频传递和分离产生各种类型的原因及意义进行了讨论.     

甜菜硝酸还原酶全长基因的克隆及其在缺氮胁迫下表达与活性分析

用50 mmol·L-1KNO3溶液处理的甜菜幼苗提取总RNA,通过RT-PCR法从甜菜总RNA中分离得到一个硝酸还原酶基因,其cDNA长2 760 bp,包含了完整的基因编码序列,与已公布的硝酸还原酶基因序列相似性达99%.同时利用活体测定法检测了经缺氮胁迫不同时间后甜菜叶中NR活性,并利用NR片段引物进行半定量RT-PCR,检测了基因的表达量.结果表明,随着缺氮处理时间的延长,甜菜叶中的NR活性随诱导时间增加活性逐渐降低,在缺氮处理1 h,其活性便有明显的降低;而NR的mRNA受缺氮胁迫下调表达,暗示着NR基因的表达与氮诱导相关.     

甜菜无融合生殖单体附加系M14的小孢子发生与雄配子体发育的观察

利用常规石蜡制片技术，对甜菜无融合生殖单体附加系M14品系(Beta vulgaris L.)小孢子发生、雄配子体发育进行了研究．结果表明：1．小孢子母细胞减数分裂过程中的胞质分裂为同时型，四分孢子为四面体形．2．单核小孢子经两次有丝分裂，产生营养细胞和两个精子，成熟的花粉粒为三细胞型．单核小孢子第一次有丝分裂后，80％的花粉败育，可育花粉只有20％．3．花药壁由五至六层结构组成，表皮，药室内壁，2至3层中层，绒毡层为分泌型．4．同一朵花中，在前期，雄蕊的发育早于雌蕊的发育，在后期，当花粉成熟时，雌配子体也达到成熟．提供了花蕾的大小与雌、雄蕊发育的相关数据。     

羊草(Leymus chinensis)psbD基因开放读码框(ORF)的克隆及序列分析

从羊草中提取总RNA,采用简并PCR方法,扩增出编码353个氨基酸的psbD基因开放读码框(Open read ing frame,ORF)cDNA序列,GenBank登陆号为FJ176573,并对其序列进行了分析.同时次基因组DNA为模板对psbD基因开放读码框区域进行了扩增,证明该基因无内含子,为其功能的进一步研究提供基因材料和理论依据.     

新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究

将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用.     

血清总胆固醇检测结果的影响因素分析

通过不同检测条件对同一样本血清总胆固醇(TC)含量的测定,研究影响检测结果的因素,为临床准确检测总胆固醇提供实验依据.在全国范围内选取815家医院,分组后采用剔除离群值的方法得出的均值为总胆固醇含量的靶值,计算出各个检测部门检测总胆固醇结果的偏倚,剔除样本量较小(小于25)的检测部门,然后用SPSS13.0软件对不同的检测条件的偏倚(检测方法、检测仪器、试剂、校准物)进行方差分析,检验差异是否具有统计学意义,确定对总胆固醇检测结果的影响因素.不同检测仪器、不同的试剂和不同校准物检测同样的标本得到的结果其差异均有统计学意义(F=3.601,P<0.01;F=9.537,P<0.01;F=7.750,P<0.05).血清总胆固醇测定主要与仪器、试剂、校准物有关.     

甜菜M14品系花器官蛋白质双向电泳体系的建立

双向电泳是目前唯一能将数千种蛋白同时分离与展示的技术.以具有野生白花甜菜优质基因资源的甜菜M14品系为材料,从植株取材、样品制备、蛋白质定量、上样量、双向电泳、染色、脱色等方面优化,构建了高效、稳定的甜菜M14品系花器官蛋白质双向电泳技术平台.结果证明所获得的凝胶图谱背景清晰,对比度高,重复性好,蛋白质点边缘平滑,并且...     

氧化塘污水对甜菜生理学影响的研究

本实验用氧化塘经生物氧化处理后的污水浇灌甜菜,研究甜菜苗期叶绿素、可溶性糖和生长素等变化规律,为综合利用城市污水提供参考.     

对黑龙江省甜菜高产高糖栽培技术的探讨

分析了我省１０余年甜菜纸筒育苗技术的应用现状，论述了纸筒育苗在增加生育天数的基础上，能加快甜菜的生育进程，肯定了该项技术的增产增糖作用，指出了目前生产上存在的问题及解决的办法，为纸筒育苗技术在各原料产区的大面积推广提供理论依据．     

纤维素酶产生菌的分离和鉴定

利用以纤维素为唯一碳源的选择培养基，从齐市糖厂弃渣塘的土样中，分离到了一株纤维素分解能力很强的真菌（QCF3），根据形态特征，可鉴定为绿色木霉（Trichodermaviride）．     

大豆胚芽中RNA提取方法的比较评价

从细胞中分离完整性好、纯度高的RNA是进行基因克隆和基因表达研究的基础，不同植物、不同组织的RNA提取难点各异，适宜方法也不尽相同，大豆胚芽富含蛋白质、脂质、多糖、酚类化合物及未知次级代谢产物，其组成成分的复杂性增加了从大豆胚芽中提取高质量的RNA的难度，本文采用了尿素-LiCi法、异硫氰酸胍法及改进的异硫氰酸胍法等三种方法从大豆胚芽中提取了RNA，从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这三种方法进行了比较和评价，结果发现改进的异硫氰酸胍法是从大豆胚芽中提取RNA的适宜方法。     

SDS、CTAB和PVP法提取香蕉基因组 DNA的比较研究

文章报道了采用SDS法、CTAB法和PVP法提取的香蕉基因组DNA片段大小比较一致,都可直接用于RAPD分析,SDs法提取的DNA纯度较高,吸芽基因组DNA提取率略高于嫩叶,对相同done不同单株间基因组DNA的RAPD分析结果并不表现出明显的多态性.     

大庆油田微生物采油代谢成分对比分析的研究

从大庆油田采油污水中分离出一种菌株,进行了实验室配伍试验和室内驱油模拟试验。建立了一种新的乙醇-氢氧化钠-正己烷萃取剂体系,直接对原油中极性化合物进行了提取分离,并通过气相色谱-质谱联用等方法对微生物降解前、后原油中的极性化学成分进行了分析测定。结果表明,该菌种具有较强的降解原油的能力。