肠球菌临床耐药性分析及耐药基因vanM在屎肠球菌中的检测

目的了解肠球菌临床分离株耐药性及vanM基因在屎肠球菌的分布情况,为临床合理用药及探讨耐药机制提供依据.方法采用VITEK60全自动微生物分析仪对肠球菌进行鉴定及药敏试验,按NCCLS/CLSI标准判断并统计分析结果;PCR法检测耐万古霉素、替考拉宁菌株中的耐药基因vanM,并对阳性基因进行测序,分析耐药基因与耐药性的关系.结果临床分离肠球菌共506株,其中屎肠球菌277株,粪肠球菌229株.尿液标本来源比例最高,为167株（33%）;粪便标本114株（22.5%）;痰液标本78株（15.4%）;胆汁标本57株（11.3%）;脓液标本54株（10.7%）;其他来源36株（7.1%）.药敏结果显示：肠球菌对大部分临床抗菌药高度耐药,屎肠球菌对β-内酰胺类抗菌药物（氨苄西林）、喹诺酮类（左氧氟沙星）、糖肽类（万古霉素、替考拉宁）的耐药率明显高于粪肠球菌（P〈0.05）.vanM基因在耐万古霉素菌株中的检出率为100%,耐替考拉宁菌株检出率为90%.结论屎肠球菌可引起临床各类感染,屎肠球菌对大多数抗生素的耐药率明显高于粪肠球菌,且呈多重耐药趋势.vanM基因可能在糖肽类药物万古霉素、替考拉宁耐药机制中发挥重要作用.     

屎肠球菌JT1701对人体肠系细菌的调控作用

用屎肠球菌JT1701与人体肠系有害菌（大肠杆菌、产气荚膜梭菌、脆弱拟杆菌）和人体肠系益生菌（婴儿双歧杆菌、嗜酸乳杆菌）分别及共同培养发现,肠球球菌对这些菌均有抑制作用。它能抑制这些菌氨的产生,降低培养基的pH。其原因是,屎肠球菌与氨产生相关的尿酶、氨基酸脱氨酶的种类少,酶活性亦低,而与NH4^ 同化相关的谷氨酸脱氢酶、谷氨酸合酶、谷酰氨合成酶的活性要高得多。表明屎肠球菌对人体肠系菌群具有调控作用。     

干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393 upp基因突变株的构建

upp基因可用来作为反向筛选标记基因。利用p ORI温度敏感型双质粒系统敲除干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393的upp基因,构建得到重组菌Lactobacillus casei 393-△upp。重组菌可作为反向筛选标记基因upp使用的宿主菌。     

肠球菌研究进展

肠球菌是人类和动物肠道正常菌群的重要成员。由于抗生素的广泛使用,使肠球菌的感染不断上升,成为医院内感染的主要致病菌。由于肠球菌携带多种毒力因子和具有多重耐药性、天然耐药性以及获得性耐药等特性,给临床肠球菌感染的治疗和控制带来了极大的困难。文章就肠球菌生物学特性、分类地位、致病机制、耐药性、实验室诊断以及治疗等方面进行阐述。     

342株肠球菌的临床分类及耐药性分析

目的:了解肠球菌的临床分离率及其对常用抗生素的耐药性,指导临床合理使用抗生素。方法:用Vitek 2 Compact法进行细菌鉴定及常规药敏试验。结果:临床分离到的342株肠球菌中,粪肠球菌有140例,阳性率40.9%,屎肠球菌有186例,阳性率54.4%,其它肠球菌有16例,阳性率4.7%。342株肠球菌主要分离自尿液254例,阳性率74.3%;血液28例,阳性率8.2%;脑脊液21例,阳性率6.1%;胆汁15例,阳性率5.3%。屎肠球菌对青霉素、氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星、红霉素和四环素的耐药率已接近或达到90%,而粪肠球菌对青霉素和氨苄西林仍保持100%敏感性。未发现肠球菌对万古霉素、利奈唑胺和替加环素耐药。结论:革兰阳性球菌中肠球菌是引起医院感染的重要病原菌之一,肠球菌引起的感染性疾病的治疗一定要以药敏结果为指导合理选用抗生素。     

不同物种源的150株肠球菌抗生素抗性分析

以来自人、狗、鸡、牛、猪五个物种源共150株肠球菌为试材,采用K-B法进行药敏实验,分析不同物种源粪便中的肠球菌对抗生素耐药情况的差异性。结果显示对红霉素的耐药率鸡源高达80%,而牛源仅为20%、对呋喃妥因的耐药率猪源和狗源分别为62.1%和3.4%、对环丙沙星鸡源耐药率为70%,而狗源并未出现耐药菌株;而对多重耐药分析后人源与狗源主要集中于2耐、3耐和4耐;牛源主要为2耐和4耐;猪源主要为3耐和4耐;鸡源的多重耐药情况复杂。表明不同物种源肠球菌的耐药情况具有差异性,为我国利用抗生素分析法识别粪便污染来源提供理论依据。     

92株肠球菌的临床感染及耐药性分析

目的:了解肠球菌的临床感染特点和耐药性,为指导临床用药,控制感染提供依据.方法:回顾性分析2007年7月至2010年7月间从江汉大学附属医院临床标本中分离出的92株肠球菌的分布情况及药物敏感试验结果.结果:分离的92株肠球菌中粪肠球菌占73.9%,屎肠球菌13.1%,其他种类肠球菌13.0%.主要来源于尿液标本,占33.7%,且主要分布于干部病房和重症监护病房等科室.药敏结果显示耐药率最高的是环丙沙星38.0%和红霉素37.0%;青霉素G、氨苄西林和左旋氧氟沙星也呈中度耐药;替考拉宁和呋喃妥因的耐药率较低,为6.5%;未发现耐万古霉素和耐利奈唑胺的肠球菌.结论:该院肠球菌以粪肠球菌感染为主,主要引起泌尿道感染,对临床常用抗菌药物有不同程度的耐药,医务人员应根据药敏试验结果合理使用抗生素并加强对细菌耐药性的全面监测.     

68株临床分离肠球菌的耐药性检测及临床意义

目的：了解肠球菌在临床标本中的分布及对常用的抗菌药物的耐药现状，指导临床合理用药．方法：对临床标本中分离出的细菌进行系统检验，采用纸片法对分离鉴定后的肠球菌进行药物敏感性试验．结果：肠球菌可在临床常见的多种标本中检出，粪肠球菌（86．7％）明显多于屎肠球菌（10．3％），其他肠球菌（3％）少见．对常用抗菌药物的耐药性，粪肠球菌和屎肠球菌之间的差异无统计学意义．结论：临床医生应关注临床常见病原菌的耐药性研究，参考抗菌药物敏感性试验结果调整用药种类．     

铜绿假单胞杆菌调节基因突变株的分离及特性

铜绿假单胞杆菌ＰＡＯ１经过亚硝基胍诱变获得了弹性蛋白酶缺失的突变株。经弹性蛋白营养琼脂平板法，从１０次独立处理的６００００个菌落中得到７１株该酶缺失的突变株，其突变株对Ｎ－３－氧代己酰－Ｌ－高丝氨酸内酯（ＨＳＬ）诱导物有无反应分成２组。ＰＡＮＯ６７菌株在加入诱导物后能恢复该酶产生，经过菌落形态、生化特征和细胞膜蛋白质成份的分析，除该酶产生缺失外，突变株ＰＡＮＯ６７与亲本菌株ＰＡＯ１相同，结果表明，ＰＡＮＯ６７是弹性蛋白酶操纵子的调节基因发生突变的诱变菌株。     

动物源性肠球菌的研究进展

综述了动物源性肠球菌的生物学特性，致病性，流行病学，实验室诊断和耐药性的研究进展。     

甘蔗蔗糖磷酸合成酶基因中间缺失突变体的构建

根据NCBI中EU278617序列设计引物,利用甘蔗SPSG2菌液为模板,扩增SPS8-11并克隆到T载体后测序.通过排除野生型DNA的定点突变PCR方法获得SPS8-11中第8内含子缺失TGCATG的突变体pMD-SPS8-11-A,酶切后测序鉴定.成功构建了甘蔗SPS8-11中间缺失突变体pMD-SPS8-11-A.     

Hlrg基因定点突变体的构建及其对HepG2细胞的影响

构建Hlrg基因的定点突变体,研究突变Hlrg基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响.首先利用数据库对Hlrg基因的结构特点进行分析,在此基础上用PCR法构建Hlrg基因的定点突变体.将突变的Hlrg基因克隆到pcDNA3.1（＋）载体中,并稳定转染到HepG2细胞中.流式细胞仪和透射电镜观察突变基因表达的蛋白对HepG2细胞的影响.结果获得了针对Hlrg基因的定点突变体,亮氨酸拉链中的第二个亮氨酸被突变成丝氨酸.发现稳定表达HLrgm蛋白的HepG2细胞中出现一定比例的凋亡细胞.表明构建了Hlrg基因定点突变体,为进一步的功能研究奠定了基础.     

集胞藻PCC6803基因ssl1690缺失突变株的构建

使用BLAST软件对聚球藻PCC7002的裂合酶基因cpcT进行了同源搜索分析,在集胞藻PCC6803中获取了相似程度达68%的同源基因ssl1690.为进一步探讨ssl1690功能,构建了同源缺失突变载体,将其转入蓝藻细胞中,筛选得到基因缺失突变株,并将基因缺失突变株培养于BG11液体培养基中,观察了其生长情况和表型变化.结果表明:基因缺失突变株与野生株相比,生长有所延迟,有漂白现象.通过分离和比较SDS-PAGE电泳突变株与野生株的藻胆体蛋白,发现缺失株存在藻胆体组分蛋白的缺失.故认为集胞藻PCC6803 ssl1690基因功能与光合作用有关,其所编码的蛋白对藻蓝蛋白正常的体内生物合成具有重要作用.     

一个水稻抗纹枯病突变体的遗传分析及其基因的初步定位

高水平抗纹枯病突变体和高感纹枯病品种蜀恢881杂交构建分离群体,经F2分离世代的遗传分析,抗、感单株比例符合3 1(χc2=0.563,χ12,0.05=3.84),初步确定该突变体对纹枯病的抗性由一对显性主效基因所控制,命名为Rsb-2(t)。利用已合成的530对微卫星引物,对抗纹枯病突变体和蜀恢881进行多态性引物筛选,用多态性引物对上述F2分离群体的全部感病单株和部分抗病单株的DNA进行PCR分析,借助MAPERMAKER/EXP3.0软件,对其微卫星标记实验数据进行连锁分析,将Rsb-2(t)定位于第3染色体的p臂,发现RM218、RM251、RM4321和RM5748与Rsb-2(t)连锁,它们均位于着丝粒端,连锁距离分别为32.1 cM,41.1 cM,42.4 cM和49.7 cM。研究结果为进一步对该基因的精细定位奠定了基础。     

圆弧青霉突变株HB01碱性脂肪酶基因的克隆和表达

圆弧青霉(Peniciuium cyclopium)突变株可产生一种具有工业价值的碱性脂肪酶(alkaline lipase,PEL),通过RT-PCR基因克隆及序列测定,获得了PEL完整的基因序列,该基因全长855bp,编码1个由285个氨基酸残基组成的酶蛋白,根据氨基酸组成推导该脂肪酶蛋白的分子量约为30kD.     

无毛突变基因对无毛小鼠免疫器官结构及功能的影响

摘要: 目的探讨无毛突变基因的作用,对无毛小鼠、有毛小鼠的免疫器官结构及功能进行了对比研究。方法比 较无毛小鼠和有毛小鼠主要免疫器官组织学变化,以及血清白介素－ 2 受体、淋巴细胞亚群、淋巴细胞增殖等方面 的差别。结果发现无毛小鼠和有毛小鼠免疫器官结构及功能均有一定的差异。结论研究结果提示无毛突变 基因不仅影响被毛结构,对免疫器官及功能也有一定的影响。该基因在杂合状态时也有一定的作用,表明该突变 基因具有一定的共显性。     

定点突变内皮抑素Zn2+的结合位点及突变基因的克隆表达

从人胚肝组织中提取总RNA, 以逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法获得人内皮抑素编码序列, 采用定点突变技术将His2和His4双突变为Leu2和Val4. 将突变基因cDNA插入含有T7启动子的质粒pET-28b中构建表达质粒pMendo, 转化大肠杆菌BL21(DE3), 筛选表达菌株BL21-Mute, 表达菌株经IPTG诱导后以包涵体方式产生大量内皮抑素突变蛋白. SDS-PAGE分析表明, 表达的重组蛋白占菌株可溶性蛋白质的30%. 复性、 纯化的内皮抑素突变蛋白纯度达到98%, 失去抑制人脐静脉内皮细胞增殖的活性.     

水稻矮化突变体G蛋白α亚基基因的结构和表达

利用γ-Co60辐射诱发水稻特光矮-2(Oryza sativa L.cv.TGA-2)产生变异,获得一种稳定遗传的新型水稻矮化突变体dwarf69.dwarf69和TGA-2及其杂交后代F1、F2、F3成熟期的株高数据表明矮化表型受一对隐性基因控制.进一步研究发现,虽然dwarf69和TGA-2的G蛋白α亚基基因(Rice G protein alpha-subunit,RGA)编码区核苷酸序列只有一个核苷酸的差异,但RGA在野生型TGA-2中的表达量明显高于在突变体dwarf69中的表达量.对矮化突变体dwarf69和野生型TGA-2的RGA基因5＇上游区的序列分析表明,dwarf69 RGA 5＇上游区比TGA-2RGA5＇上游区多出1076bp.首次报道水稻矮化突变体中的RGA5＇上游区序列与其野生种的RGA5＇上游区序列存在显著的差异.