包虫病基因工程疫苗免疫效果考核试验——免疫持续期二年

本试验肯定包虫病基因工程疫苗免疫程序为初次免疫2次，间隔期1月（或4周），以后每年加强免疫1次，即可获得十分理想的免疫保护效果。在包虫病流行区通过对新疆细羊毛免疫持续期2年的保护效果观察，确定该免疫程序免疫动物可获得保护（减囊）率95．1％。同时，利用ELISA法定期对试验动物血清抗体进行检测，发现虽然动物免疫后表现出十分明显的抗体值，并且在相当长时间与空白对照动物形成鲜明差异，这仅仅是反映群体的免疫状况，但针对免疫个体尚未能形成一一对应的关系，即明确指出某一动物获得很好的免疫保护，或某一动物免疫效果欠佳。     

包虫病基因工程疫苗免疫效果考核试验（免疫持续期一年）

对不同品种绵羊2次免疫包虫病基因工程疫苗，间隔期1月，1年后通过剖捡确定新疆细毛羊可获得83．6％的保护（减囊）率。蒙古黑头羊也同样取得了83．3％的保护（减囊）率。     

细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3和Eg10免疫差异的初步研究

表达纯化细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3(rEg14-3-3)和Eg10(rEg10),分别免疫小鼠,8w后进行细粒棘球蚴原头蚴攻击感染.计算免疫保护力,检测脾组织中CD4+T、CD8+T细胞亚群以及T细胞增殖情况.实验结果表明,rEg14-3-3免疫组小鼠具有85.3%抵抗细粒棘球绦虫感染的能力,而rEg10免疫组小鼠与对照组小鼠相比无免疫保护力;与PBS对照组相比,只有rEg 14-3-3免疫组的CD4+T细胞亚群的分布有明显差异,且rEg 14-3-3抗原能诱导淋巴细胞显著增殖.因此rEgl4-3-3蛋白能抑制细粒棘球蚴的生长,诱导小鼠产生高水平的免疫保护力,可作为疫苗候选分子.     

细粒棘球绦虫重组pET30a-EgA31疫苗的构建和诱导表达

克隆细粒棘球绦虫EgA31抗原基因,构建pET30a-EgA31原核表达载体,并在大肠埃希菌宿主系统中表达EgA31重组蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE分析.从细粒棘球绦虫成虫组织中提取总RNA,反转录生成cDNA,以此cDNA为模板RT-PCR 克隆获得EgA31抗原基因,将其克隆至pUCm-T载体,测序确定其正确性.利用定向克隆技术将EgA31抗原基因片段克隆至原核表达质粒pET30a上,转化E coli DH5α,根据选择标记的卡那霉素抗性基因筛选到阳性克隆,通过PCR分析和酶切鉴定筛选出阳性克隆.IPTG初步诱导和表达pET30a-EgA31重组蛋白,SDS-PAGE电泳检测,并经凝胶图像分析确定目的蛋白的表达水平.测序表明选取的pET30a-EgA31阳性克隆均为正确连接EgA31抗原基因的重组质粒.经IPTG诱导后重组蛋白得到成功表达,在相对分子量约为31 kDa处有表达条带,表达量约占菌体总蛋白质的26%.成功克隆并构建了pET30a-EgA31原核表达质粒.初步诱导表达出EgA31重组蛋白,为进一步研究其免疫特性奠定了基础.     

ND-EDS二联油乳疫苗免疫对比及田间免疫试验

以自制 ND- EDS二联油苗为主进行免疫试验 ,并以同种二联油苗、ND和 EDS单油苗作对照 ,测定各种疫苗免疫后 ND、EDSHI抗体消涨规律 ,并进行强毒攻击试验。在此基础上 ,用自制二联苗实地免疫产前蛋鸡 2 6 830只 ,进行田间免疫试验。结果表明 :自制二联苗免疫效果良好 ,免疫期为 36 0 d左右 ,免疫期内对 ND和 EDS强毒攻击的保护率分别为 10 0 %和 95.8%     

血清滤纸斑点免疫结合试验诊断棘球蚴病

以定性滤纸吸附血清样品,保存于室温和4℃冰箱内,3和6个月后对所保存的血清滤纸进行生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验,以检测血清样品中抗棘球蚴抗原的抗体.结果表明2种条件下保存的干血清滤纸的检测结果与新鲜血清样品检测结果基本一致(P＞0.05).证明在生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验检测棘球蚴病患者免疫应答时,干血清滤纸法可作为患者血清样品的保存方法.     

生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验检测棘球蚴病患者的免疫应答

建立了生物素-抗生物素系统斑点免疫结合试验(BAS-DIBA),并以此法研究了棘球蚴病患者对细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus)抗原的免疫应答.79例棘球蚴病患者血清、69例非棘球蚴病患者血清和119例健康人血清的BAS-DIBA试验结果为:两试验检测抗棘球蚴抗原抗体的敏感性分别为97.45%和92.41%;特异性分别为98.40%和98.94%;在91.14%的棘球蚴病患者血清中,BAS-DIBA试验较DIBA法敏感;两法同为阳性的棘球蚴病患者血清中,BAS-DIBA检出的抗体效价的几何均数为DIBA法的5.48倍;4例DIBA试验阴性的棘球蚴病患者血清在BAS-DIBA法中为阳性.证实所建立的BAS-DIBA法是检测棘球蚴病患者免疫应答敏感性高、特异性强的方法,特别是对于低抗体水平的棘球蚴病患者可能具有更高的应用价值.     

棘球蚴抗原纯化对免疫球蛋白IgG免疫应答的影响

以纯化的棘球蚴抗原和未经纯化的粗抗原用于棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原的特异性免疫球蛋白IgG水平的检测试验,结果表明,当血清稀释度为1∶200时,使用纯化抗原可以获得较高的特异性 (98.9%),并可保持在使用粗抗原及血清稀释度为1∶400时获得的较高的敏感性（93.7%）,提示在棘球蚴感染者血清中抗棘球蚴抗原特异性免疫球蛋白IgG水平的检测中,使用纯化棘球蚴抗原和粗抗原均可获得较高的敏感性(93.7%)和较高的特异性 (98.4%,98.9%),使用纯化抗原时的特异性略高,但在统计学上并无显著差异.     

鸡新城疫Ⅰ系、Ⅱ系疫苗早期免疫扩大试验

对成都、江油、中江三个养鸡场的六批次,具有不同水平母源抗体的11450只雏鸡采用新城疫Ⅱ系苗1日龄滴鼻首免,Ⅰ系苗20日龄饮水二免,经过鸡群定期检测血清HI抗体效价和攻击强毒保护结果,证明雏鸡首免和二免后,HI抗体效价能在长期内维持在较高水平,对强毒攻击具有坚强抵抗力,Ⅰ系苗饮水免疫后,经长期观察,未见免疫鸡群与同群感染哨鸡出现任何不良反应。本次扩大试验表明:雏鸡采用Ⅱ系,Ⅰ系疫苗早期免疲,效果确实,安全可靠,方法简便易行,具有生产实用价值。作者并结合大量研究文献论证了早期免疲的应答机制和重要意义。     

中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗的研制及免疫效果

为通过免疫防治途径控制嗜水气单胞菌引起的多种中华鳖疾病,采用复乳化-溶剂挥发法制备缓释微球疫苗,通过灌胃方式免疫中华鳖(体质量150～200 g),每只灌胃0.05 g或0.1g,微球含灭活菌约为6.75×1010/g.免疫应答反应结果显示,缓释微球疫苗体外释放可持续近40 d,血清抗体效价、白细胞吞噬率、白细胞吞噬指数及淋巴细胞转化率最高分别可达512,71.25％,1.51和77.25％.结果表明:中华鳖嗜水气单胞菌微球缓释疫苗可以达到注射灭活菌液疫苗的水平,且持续性略优于注射免疫.通过灌胃方式(0.1 g/只)、注射方式分别对中华鳖进行免疫,研究攻毒后的免疫保护率,结果显示注射免疫组和微球疫苗免疫组的免疫保护率均为85％.免疫应答实验和攻毒实验结果分别证明了中华鳖口服缓释微球疫苗免疫的持续性和有效性.     

结核杆菌ESAT-6基因疫苗对结核杆菌感染小鼠的免疫保护效果研究

为研究结核杆菌ESAT-6基因疫苗的免疫原性及对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果,将雌性C57BL／6N小鼠32只,随机分为4组,即结核杆菌ESAT-6基因疫苗组、BCG组、pcDNA3．1（＋）组和PBS组。取小鼠脾细胞培养上清检测细胞因子水平;并按效靶比例分别为100：1、50：1、10：1进行CIL杀伤活性检测。用结核杆菌H37Rv国际标准强毒株静脉注射攻击小鼠,计数肺和脾组织中的结核杆菌菌落数,对小鼠部分肺和脾组织作病理切片,HE染色观察组织病变程度,Z—N染色检查抗酸杆菌,观察陔疫苗对小鼠结核杆菌感染的免疫保护效果。结果表明,结核杆菌ESAT-6基因疫苗对小鼠结核杆菌感染有一定的免疫保护效果,可诱导较强的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,细胞因子IFN-γ和IL-1分泌增加,IL-4分泌减少,CTL特异件活性增加;使小鼠肺和脾组织中的结核杆菌菌落数较空载体组显著减少,组织病变明显减轻。     

补中益气散对猪瘟疫苗免疫效果的影响

为了进一步提高猪瘟疫苗的免疫效果,探讨补中益气散对该疫苗的免疫增强作用,该研究以某猪场27头30日龄健康仔猪随机分为3组,对照组和试验1,2组.对照组仅注射猪瘟疫苗;试验1组用补中益气散拌料饲喂一周后注射疫苗;试验2组注射疫苗同时拌料饲喂补中益气散一周,中药用量均按0.2%加入饲料.分别于免疫当天、免疫接种后7,30d无菌操作采集血样,运用正向间接血凝试验检测血清中的抗体水平.结果表明:补中益气散可显著提高血清中的抗体水平,免疫后30d免疫保护率维持在88.9%以上,提示补中益气散具有显著增强猪瘟疫苗免疫效果的作用.     

胚期接种IBD疫苗对雏鸡ND4倍剂量免疫接种效果之影响

为了研究用IBD疫苗进行鸡胚免疫的可行性，探讨了胚期接种IBD疫苗对雏鸡ND4倍剂量免疫接种效果的影响．将IBD中等毒力疫苗接种18日龄鸡胚，出壳后采用4倍剂量ND疫苗进行免疫，通过抗体水平、免疫细胞数量及功能和免疫保护力等的检测，结果表明：胚期接种IBD中等毒力疫苗对雏鸡4倍剂量免疫仍具有免疫抑制作用．     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验

从PRRSV野毒株细胞培养上清提取RNA，用RT-PCR的方法扩增出M蛋白基因片段（525bp），并将该基因克隆到pMD18-T载体，测序结果与PRRSV BJ-4等株同源性最接近．以pIRES-neo为载体，构建表达PRRSVM蛋白的基因疫苗，按100μg／只的DNA量免疫小鼠，二免后二周抗体水平显著高于同期免疫空载体pIRES～neo组，于免疫后14、28、42天后均能检测到较高的细胞免疫水平．这说明表达M蛋白的基因疫苗能够刺激机体产生免疫应答．     

玛多地区家畜寄生虫病防治方法

玛多县常见并且危害较为严重的家畜寄生虫病有牛羊肝片吸虫病、腹腔吸虫病、前后盘吸虫病，牛羊绦虫病，棘球蚴病(包虫病)，脑包虫病，牛羊胃肠道线虫病、肺线虫病、牛皮蝇幼虫病、羊鼻蝇幼虫病。牛羊外寄生虫病主要由蜱、螨、虱蝇、虱、蠕形蚤、虻等引起，其中牛羊胃肠线道线虫病、肺线虫病、牛皮蝇幼虫病、牛羊外寄生虫病、棘球蚴病在全县普遍流行，并且对畜牧业的危害也最为严重，近几年来玛多地区经常性开展的几项防治寄生虫病方面的工作就是针对以上疾病进行。一是应用冬季驱虫技术进行绵羊及幼羊牦牛驱虫；二是应用喷洒或药浴杀灭牛羊外寄生虫技术。此二项技术应重点掌握和应用，以下进行重点介绍。