小白芸豆凝集素的分离纯化及性质研究

从小白芸豆中分离纯化出一种新的凝集素,对其部分理化性质和生物活性进行研究.小白芸豆经过去皮粉碎、浸提、硫酸铵分段盐析、SP Sepharose阳离子交换、Q Sepharose阴离子交换和Superdex 200凝胶过滤层析后可得到小白芸豆凝集素(Phaseolus vulgaris var.albuslectin,PVAL)纯品.测定了PVAL的表观分子质量、亚基分子质量、糖含量、等电点、氨基酸组成、酸碱稳定性以及抗癌性.PVAL的表观分子质量为136 ku,是由2种分子质量分别为36.2 ku和32.2 ku的亚基组成的四聚体,糖含量为4.93%,等电点分布在pH5.3~6.0之间.PVAL分子无半胱氨酸,也无二硫键,疏水性氨基酸质量分数约为37%.PVAL对酸碱的耐受性比较好,并且对肿瘤细胞MDA-MB-435S有较好的抗性.     

黄牛肝菌凝集素的分离纯化及部分性质

黄牛肝菌(Boletus fulvus)经生理盐水浸提、CM-Sepharose、DEAE-Sepharose及Sephacryl S-100分子筛层析后得到黄牛肝菌凝集素(BFL).经SDS-PAGE电泳及Sephacryl S-100分子筛层析检测表明,所得的BFL是由两个分子量约15.8kDa、非二硫键相连的亚基组成的表观分子量为32kDa的二聚体.BFL可快速凝集兔血红细胞,其最低凝集浓度为3.9μg/mL;糖抑制试验表明,胃粘蛋白、甲状腺球蛋白、卵粘蛋白和卵清蛋白均可抑制BFL活性.当温度在70℃以下和pH值在6.0~9.8之间时,BFL凝血活性基本不变.然而当温度至90℃以上和在极端pH值下,BFL凝血活性减弱甚至完全丧失.不同浓度的脲和盐酸胍对BFL凝血活性的影响表明:随着变性剂浓度的增加,BFL的结构逐渐被破坏.     

花椰菜凝集素的纯化及部分性质的研究

花椰菜凝集素由花蕊组织经生理盐水抽提、硫酸铵沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００、Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ凝胶层析纯化获得．ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带，说明该凝集素为纯化的糖蛋白．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱过滤分析，其相对分子质量约为９４０００．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有４个亚基，其相对分子质量分别约为２８０００、２５０００、２２０００和２００００．花椰菜凝集素经５０℃处理５分钟仍保持高的凝集活性，该凝集素对酸处理较碱处理稳定．     

大豆凝集素的分离纯化及活性鉴定

以D-半乳糖胺为配基、 FF-sepharose 4B为固定相, 制备大豆凝集素亲和层析填料. 分离和纯化大豆中的大豆凝集素蛋白, 测定其纯度、 免疫原性和凝集活性, 并与美国Sigma公司的标准品比较. 结果表明： 每毫升GalN-FF-Sepharose-4B层析填料能结合10 mg大豆凝集素; 纯化获得的大豆凝集素分子量为30 000; SDS-PAGE测定纯度大于98%; Western blot结果为阳性; 1 mg/mL SBA血集效价为1/2^10; 其纯度、 免疫原性和凝集活性等指标与大豆凝集素标准品相同, 与理论值相符.     

韭菜凝集素的纯化及部分性质的研究

用葡聚糖凝胶柱层析法从韭菜的叶片组织分离出一种对新鲜兔红细胞有强烈凝集作用的凝集素，ＰＡＧＥ鉴定和高碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂反应均显单一条带。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明该凝集素含有３个亚基，其相对分子质量分别约为３１０００、２４０００和２１０００。韭菜凝集素具有一定的热稳定性，在酸、碱处理中该凝集素对碱处理较酸处理稳定，氨基酸组成分析表明韭菜凝集素含有１４种氨基酸，其中半胱氨酸含量较高。     

大豆凝集素的分离纯化及血凝效果研究

为研究不同品种大豆中凝集素相对含量高低及血凝效果,用0.9%Na Cl溶液抽提不同品种大豆中的凝集素,通过观察凝集素提取液与2%红细胞悬液的凝集反应程度,来初步判断凝集素的含量高低;再通过测定凝集素提取液与2%红细胞悬液作用后上清液吸光值,以及凝集红细胞沉淀的干重,进一步确定不同品种大豆中凝集素的相对含量。结果表明,利用血凝法可快速测定大豆中的凝集素含量,‘晋科5号’、‘长豆34号’凝集素含量最高,‘晋豆25号’、‘晋遗57号’凝集素含量次之,‘晋遗59号’含量最低。     

凝集素的分离纯化、基因克隆及功能研究进展

凝集素(lectin)研究近年来发展迅速，尤其在植物基因工程中，植物外源凝集素基因越来越受到重视。本文从凝集素的分离纯化、基因克隆、理化性质和功能等方面进行了综述。此外还讨论了凝集素基因在植物基因工程中的应用。     

菜豆鲜荚中菜豆凝集素的提取与分离纯化工艺研究

以Bean Saint esprit a oeil rouge菜豆鲜荚为试验材料,优化了菜豆凝集素的提取和分离纯化工艺,研究了提取剂、料液比、p H值和提取时间对菜豆凝集素活性的影响,建立了硫酸铵分级沉淀、DEAE-52阴离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析的组合方法用于分离纯化菜豆凝集素。研究结果表明:以磷酸盐缓冲溶液为提取剂,料液比1∶25,p H值6~8,浸提时间8 h,菜豆植物凝集素的提取效果适宜。菜豆凝集素浸提液经硫酸铵分级沉淀,DEAE-52阴离子交换层析,Superdex-200凝胶过滤层析,冷冻干燥后可获得纯度较高的菜豆凝集素。纯化的样品经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测为单一条带,血凝法检测有血凝活性。     

紫露草中凝集素的分布及其性质初探

在紫露草的根、茎、叶、花中都检测到凝集素,凝集素对酸、碱、热不稳定,能凝集人的A、B、O型血球及兔和小白鼠的红血球。D—半乳糖、N—乙酰氨基半乳糖和D—岩藻糖能抑制其凝集活性。     

从甘薯品种中筛选凝集素

在相同种植环境,相同提取条件下,对6种甘薯抗感品种的叶片组织进行凝集素的提取,研究结果表明：6个品种均存在着凝集素,其区别在于品种之间对兔红细胞的凝集活性及活性峰不同,检没了这些凝集素的中性糖含量,热稳定性,酸碱稳定性,糖抑制作用和抑菌作用,为进一步纯化提供了一些科学依据。     

橘光绿天牛对九里香绿化球的危害及其经济损失评估

分别于2002年6月27日和8月29日调查广西生态工程职业技术学院内种植的九里香[Murraya paniculata(L．)Jack]受橘光绿天牛(Chelidonium citri Grressitt)危害的状况并进行危害价值损失评估。结果表明，九里香绿化球受害株率90．7％，枝枯株率74．1％，有虫株率75．9％，虫口密度2．11，危害度31．5％。危害造成枝枯宽度平均为61cm，占平均树冠周长的14．4％；枝枯平均深度为68．4cm，占平均树高50．8％。植株东向受害最多，占受害总株数30％；中部枝枯宽度占树冠周长比例最大，为22．9％；西南方向枝枯深度最深，占高度的90．9％。九里香绿化球价值损失占总价值的38．7％。学院的九里香绿化球受橘光绿天牛危害严重，需要及时有效的预防与防治。     

甘薯品种岩8-6凝集素的分离纯化及其性质

甘薯品种岩8－6的叶片组织依次经硫酸铵分级沉淀,甲壳素亲和层析及Sephadex G-75分离纯化得到一种凝集素（IPomoea Batatas Lectin,简称IBL）,纯化的IBL电泳显示一条蛋白质着色带,IBL的亚基相对分子质量为47000,IBL对兔红细胞有凝集作用,凝血活性可被D－果糖明显抑制,IBL对热不稳定,加热到70度时,活性完全丧失,IBL对碱敏感,IBL含有16种氨基酸,富含Asp和Glu,中性糖含量为5．07％。     

大肠杆菌holo-ACP突变体的表达纯化及相应acyl-ACP的性质初探

酰基-酰基载体蛋白（acyl-acyl carrier protein,acyl-ACP）作为酰基供体,在脂肪酸、聚酮等天然产物合成途径中具有重要作用.目前,常以酰基-辅酶A（acyl-CoA）来代替尚未商品化的acyl-ACP进行相关酶的体外活性研究.由于底物蛋白acyl-ACP的ACP部分与相关酶发生相互作用,影响酶的催化特性,这种替代无法真实认识相关酶的酰基转移特性.本文以大肠杆菌pET-28a（+）-ACP为模板,构建12株单点突变体,表达纯化出相应holo-ACP,并进一步合成C16:0-ACP和C18:1-ACP.高效液相色谱的结果表明,ACP单点突变会影响acyl-ACP整体的性质,其中T40残基的改变对acyl-ACP的疏水性、紫外吸收响应和稳定性均产生了显著影响.ACP突变体的性质表征为acyl-ACP与相关酶的互作机制研究奠定了基础.      

烟草过氧化物酶Ⅰ的分离纯化及部分光谱特性研究

烟草过氧化物酶同工酶Ⅰ (TOPⅠ )的分离纯化过程 ,主要包括匀浆、超声破碎、过滤、(NH4) 2 SO4分级沉淀、DE 5 2纤维素阴离子交换层析、SephadexG 75凝胶层析、DEAE SephadexA 5 0阴离子交换层析 .经纯化的TOPⅠ ,纯化酶的比活力为 482 6U/mg ,在SDS PAGE上显示出一条蛋白带 ,分子量在 2 1 0 0 0左右 ,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 (MALDI$CTOF MS)测得TOPⅠ分子量为 2 1 888.5 ,等电点pI为 3.5 ;光谱学分析揭示 ,在 40 2nm处有一典型的Soret带 ,在 498nm和 636nm处有特征吸收峰 ,表明TOPⅠ为一含血红素的酸性蛋白酶 .酸度对TOPI的在紫外可见区的特征吸收峰及荧光光谱均产生一定的影响 ,反映了TOPⅠ分子独特的光谱学特性     

灵芝漆酶的分离纯化及其部分酶学性质研究

将灵芝（Ganoderma lucidum）漆酶经过Sephadex G-75和DEAE-Sepharose Fast Flow两步纯化,获得具有3个同工酶的组分,并且纯度提高了81倍,酶活回收率高达83.9%。以ABTS为底物,漆酶最适pH值是2.2～2.6,在pH值4.6～7.8范围内稳定;最适温度45℃,在低于45℃时较稳定。大部分金属离子、酸根离子对灵芝漆酶普遍有抑制作用,除盐可以提高漆酶活力。     

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶分离纯化及部分性质

报道罗氏沼虾（Macrobrachium rosenbergii)经抽提,再生几丁质亲和层析,Sephadex G-100凝胶过滤,CM－Sephadex C-25凝胶离子交换层析,获得了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品,SDS－聚丙酰胺凝胶电泳法测得其分子量约为38kDa,等电聚焦测得其等电点为5.7,该酶的最适pH值为4,在pH3.0-8.0间表现稳定。最适温度55℃,高于65℃稳定性降低。     

2种江蓠凝集素的抑藻和抗菌作用

血凝实验发现真江蓠凝集素对4种供试血红细胞均有凝集作用,其中对兔血红细胞的凝集作用最强,而细基江蓠凝集素只对兔血红细胞具有凝集活性;在对8种单细胞藻的凝集实验中,它们都只对塔玛亚历山大藻有凝集作用,对其他单细胞藻不具凝集作用;抑藻、抑菌实验表明,2种江蓠凝集素对棕囊藻的生长都具有一定的抑制作用,对玉米大斑病菌、黑曲霉和圆弧青霉等真菌菌丝生长具有不同程度的抑制作用,在供试的3种细菌中,只对枯草芽孢杆菌有抑制作用.     

苦瓜过氧化物酶的提取分离及性质测定

从苦瓜(Momordica charantia L.)中分离和纯化过氧化物酶(POD),分别测定其最适pH值、最适温度、热稳定性、底物浓度对酶活性的影响。结果表明:苦瓜过氧化物酶以邻苯二胺为底物时λmax=425nm,Km=4.6×10-3,Vmax=0.137unit/s,最适pH值为4.6,最适温度是50℃。在温度为50℃时过氧化物酶的酶活力最大,酶活性较高。在温度为60℃以上时过氧化物酶的失活率升高,在温度为70℃以上时过氧化物酶基本失活。抗坏血酸和半胱胺酸对过氧化物酶有明显的抑制作用,其失活率分别达到94%和92%;Al3 的抑制作用稍弱,过氧化物酶的失活率为69%;EDTA的抑制效果最不明显,过氧化物酶的失活率仅为13%。