合浦珠母贝受精细胞学观察

用醋酸－地衣红染色制片的方法对合浦珠母贝卵子减数分裂和受精过程进行了详细的细胞学观察。精子入卵前，卵子停留于第一次减数分裂中期。精子入卵后，卵子开始成熟分裂，在海水温度２２℃的条件下，授精后２２ｍｉｎ及３９ｍｉｎ绝大部分卵子分别完成第一次减数分裂和第二次砬数分裂，排出第一极体和第二极体，雌雄原核分别形成，其染色体逐渐凝集，形成两组染色体，最后在卵裂的赤道板上联合，７１ｍｉｎ后，大部分卵子完成第一次     

合浦珠母贝精子发生过程的超微结构观察

报道了透射电镜下合浦珠母贝精子发生过程超微结构的观察结果。描述了精子发生过程中线粒体，中心体（鞭毛），顶体泡和细胞核的演变过程。精子细胞核内染色质以颗粒状形式凝集，精子核呈圆桶状，圆形的顶体泡迁移到顶体部位后变形成为圆锥形顶体。合浦珠母贝精子经过精度原细胞，精母细胞和精子细胞，最终发育成为成为成熟的精子，成熟的精子由头部（长约２μｍ），中段（长约０．６８μｍ，宽约１．６μｍ）和尾部（长约５０－６０     

合浦珠母贝卵子发育的超微结构研究

透射电镜下观察了合浦珠母贝卵子发育过程：卵原细胞被滤泡细胞完全包襄，初级卵原细胞具一明显核仁，胞质内分布少量线粒体，次级卵原细胞核仁消失，成簇的线粒分布于核膜一侧，卵黄合成前期卵母细胞体销增大，核仁重现，胞质内出现大量管状或泡状膜性小体，此期卵母细胞开始逐渐游离，并自游离端首先出现微绒毛和卵黄膜。卵黄合成期卵母细胞体迅速增大，核膜常伸出伪足状突起，胞质内出现较多的线粒体以及结构独特的内质网。此期还     

合浦珠母贝卵子成熟的细胞学观察

用细胞学的方法对合浦珠母贝卵子在体内和体外的成熟过程进行了观察，结果发现：性腺内发育的卵子大多停留于第一次减数分裂的前期，处于排卵状态时，性腺内卵子进一步发育至第一次减数分裂的前中期，解剖性腺取出的卵子能在海水中继续发育达到第一次减数分裂中期，氨海水能够促进这一发育过程。自然排放的卵子在刚刚接触到海水时仍处于第一次减数分裂的前中期，它们的进一步成熟，即发育至第一次减数分裂中期是在海水中完成的，文中     

合浦珠母贝幼苗的正常生长

调查珍珠养殖合浦珠母贝人工培育幼苗的管养和生长情况,认为合浦珠母贝的幼苗生长正常,不存在“贝种退化”的影响,成活率和生长率的提高,明显是由于幼苗营养方法的改良。     

LPS和IL-2对合浦珠母贝血细胞iNOS活性的影响

建立了一种合浦珠母贝血细胞原代培养方法,为贝类免疫学研究提供实验平台。通过台盼兰染色法检测细胞活力,结果显示:7d内细胞生长状态稳定,并且培养基中的FBS对细胞生长活力没有显著影响。以细胞中iNOS活性为检测指标,详细研究了LPS和IL-2对合浦珠母贝血细胞的激活作用。结果表明:LPS和IL-2对iNOS活性的诱导作用表现出浓度和时间依赖的特征。刺激后36h左右iNOS活性达到最大,LPS和IL-2的最佳诱导剂量范围分别为1～10g/mL和10～100ng/mL,并且IL-2对iNOS活性的激活作用较LPS快。     

合浦珠母贝（Pinctada martensii,Dunker）珍珠囊体外预培育…

０．３％胰蛋白酶液消化外套膜组织的第５－１５ｍｉｎ时间段所收获的细胞产物中，表皮细胞具有最高的纯度和贴壁活性；细胞悬液的体外短期培养过程中小牛血清和珠母贝组织提取物对于细胞在体外的生长和在珠核表面的贴附具有促进作用。     

三丁基锡暴露对褐菖鲉碱性磷酸酶活性的影响

研究了在实验室条件下,腹腔注射不同浓度(1.9、9.6、19.3、193 μg/kg)的三丁基锡(tributyltin,TBT)对褐菖鲉肝脏、肾脏和脾脏碱性磷酸酶[alkaline phosphatase (AKP)]活性的影响.研究结果表明,在7 d的曝污实验中,低剂量的TBT对碱性磷酸酶活性主要产生诱导作用,碱性磷酸酶活性随着TBT浓度的增大呈现先增大后减小的钟形曲线.这提示TBT暴露会影响褐菖鲉正常的代谢及其免疫功能.     

金属离子对鲍鱼碱性磷酸酶活力的影响

碱性磷酸酶(ALP,EC3.1.3.1)是一种金属酶,其结构的维持和酶活性的表现均需金属离子.本文研究了几种金属离子分别对鲍鱼ALP活力的影响.结果表明,Li ,Na 和K 等正一价碱金属离子对酶活力没有任何效应;碱土金属离子Mg2 ,Ca2 和Ba2 对酶有激活作用,其激活程度依次为:Mg2 >Ca2 >Ba2 ,而且Mg2 在5.0mmol/L时可以使酶活力提高267%;在过渡金属离子中,Zn2 ,Mn2 ,Co2 和Cu2 对酶的效应不同,Zn2 、Cu2 为抑制作用,而Co2 、Mn2 表现为激活作用;重金属离子Hg2 、Pb2 、Ag 和Cd2 对酶有抑制作用,其中Hg2 的抑制效应最强,1.0mmol/LHg2 可使酶活力抑制94%.研究Mn2 和Cu2 的抑制类型表明,Mn2 为混合型激活作用,而Cu2 对酶的抑制类型为非竞争性抑制作用,其抑制常数(KI)为0.316mmol/L.     

Inhibition of Alkaline Phosphatase from Pearl Oyster Pinctada fucata by o-Phthalaldehyde： Involvement of Lysine and Histidine Residues at the Active Site

Alkaline phosphatase from Pinctada fucata was inactivated by o-phthalaldehyde （OPA）. The inactivation followed pseudo first-order kinetics with a second rate constant of 0.167 （mmol/L）^-1·min^-1 at pH 7.5 and 25℃. A Tsou＇s plot analysis showed that inactivation occurred upon formation of one isoindole group. The OPA-modified enzyme lost the ability to bind with the specific affinity column and the presence of substrates or competitive inhibitors protected the enzyme from inactivation. The results revealed that the OPA-reaction site was at the enzyme substrate binding site. Prior modification of the enzyme by lysine or histidine specific reagent abolished formation of the isoindole derivatives, suggesting that lysine and histidine residues were involved in the OPA-induced inactivation. Taken together, OPA inactivated the alkaline phosphatase from Pinctada fucata by cross-linking lysine and histidine residues at the active site and formed an isoindole group at the substrate binding site of the enzyme.     

乙醇对鲍鱼碱性磷酸酶活力与构象的影响

以乙醇为效应物研究对鲍鱼碱性磷酸酶(ALP)活力影响的结果表明．酶的剩余活力随着乙醇浓度增大而迅速下降，乙醇浓度40％可使酶活力完全丧失．说明乙醇对鲍鱼ALP有明显的失活作用，JG50为13％．含较低浓度乙醇(30％)的失活过程是可逆的反应．测定乙醇对酶的失活作用机理．结果表明乙醇对鲍鱼ALP的失活作用是非竞争性机制，说明底物存在不影响乙醇对酶的失活作用．应用荧光光谱、紫外吸收光谱研究鲍鱼ALP经乙醇微扰后的分子构象变化，发现乙醇对酶分子构象有显的影响，酶的内源荧光强度随乙醇浓度增大而增强．荧光发射峰逐渐发生红移．紫外吸收光谱在276nm吸收峰随乙醇浓度增大而增强．这些结果表明．酶蛋白分子中的生色基团残基的微环境发生变化．     

鲍鱼碱性磷酸酶的分离纯化和性质研究

以杂色鲍(Haliotis diversicolor)内脏为原料,经Tris HCl缓冲液(pH 7.5,含0.1mol/L NaCl)抽提,正丁醇处理,硫酸铵分级沉淀分离,DE 32离子交换、Sephadex G 150分子筛、DE 32纯化,得到电泳单一纯的碱性磷酸酶制剂,比活力为1 226 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明:该酶催化对硝基苯磷酸水解反应的最适 pH值为 10.08,最适温度为48℃.米氏常数Km 值为0.80 mmol/L,Vm 值为20.1 mmol/L·min-1(pH 10.0,37℃).酶的热稳定性研究表明:该酶在pH 7~11区间和在温度低于55℃下稳定.金属离子对酶活力的影响结果表明:Li+、Na+和K+对酶活力没有影响,Mg2+、Ca2+、Ba2+、Mn2+和Co2+对酶有不同程度的激活作用,而Cu2+、Cd2+、Zn2+、Hg2+、Ag+、Bi2+和Pb2+等对酶起抑制作用.     

家蚕碱性磷酸酶的功能基团研究

用PCMB、NBS、PMSF、TNBS、SUAN、DTT、BrAc、IAc等在一定条件下选择性修饰家蚕碱性磷酸酶的部分氨基酸残基,对酶活力的变化进行测定.结果表明:PMSF、SUAN、BrAc、IAc和TNBS的修饰能显著抑制酶的活性,且酶活力降低程度与修饰剂的浓度相关;PMSF、DTT和NBT的修饰对酶的影响较小.初步认为,巯基和组氨酸的咪唑基可能是家蚕碱性磷酸酶的必需功能基团,赖氨酸残基和二硫键对保护酶的催化能力是必需的.     

赤子爱胜蚓碱性磷酸酶的酶学性质研究

以赤子爱胜蚓(Eisenia foetida sarigng)整体为材料,采用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-纤维素柱层析、葡聚糖凝胶过滤等方法分离纯化得到蚓体中的一种碱性磷酸酶(AKP)并对其性质进行研究。经测定其分子量为126000Da,富含谷氨酸、脯氨酸。以磷酸苯二钠为底物,测其最适温度为37℃,最适pH为10．10,Km值为1．15mmol／L,Mg^2 、Ca^2 、Mn^2 对酶有激活作用,KH2PO4、ME、EDTA、L-Cys、DFP则对AKP有抑制作用。     

僧帽牡蛎碱性磷酸酶功能基团的研究

采用化学修饰法研究僧帽牡蛎碱性磷酸酶活性功能基团性质.酶经0.4mmol·L-1PCMB修饰30min后活力仍然保持不变,提示巯基与酶的活力无关;用二巯基苏糖醇(DTT)对酶进行修饰,当DTT浓度达到2.5mmol·L-1时,酶活力丧失98%,表明硫 硫键与酶活力有密切的关系;以N 溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰酶的色氨酸残基,酶的修饰失活呈一级反应,当NBS浓度达到0.65mmol·L-1时,酶活力丧失100%,并辅以紫外吸收光谱的变化分析,表明色氨酸残基是酶催化活力所必需的;醋酸酐、马来酸酐、甲醛等氨基试剂对酶的修饰作用显示氨基是酶的必需基团.     

长期饥饿和再投喂对泥鳅不同组织糖原、酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的影响

研究长期饥饿和再投喂对泥鳅肝、消化道和肌肉3种组织细胞糖原、酸性和碱性磷酸酶的细胞化学变化.对泥鳅进行饥饿处理,0～28 d不喂养食物,29～35 d恢复正常喂食.分别于0,7,14,21,28和35 d取材,利用显微石蜡切片、组织化学染色的方法检测其肝、消化道和肌肉细胞糖原、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(ALP)细胞化学特征.结果表明,随着饥饿程度的加深,糖原的量减少,碱性磷酸酶活性下降,酸性磷酸酶活性则增强,投喂后,糖原量、酸性和碱性磷酸酶活性都有不同程度的恢复.整个过程中,它们的变化存在组织差异.泥鳅中酸性和碱性磷酸酶均与长期饥饿条件下机体的应激反应有关.     

正畸牙移动过程中龈沟液碱性磷酸酶活性的变化

碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）被认为是成骨细胞分化和功能状态的重要标志，为评价正畸牙移动过程中ALP活性的变化趋势及其所起的作用，选择17颗需远中移动的正畸尖牙，分别在加力前与加力后1h、24h、7d、14d、21d和30d收集尖牙近远中侧龈沟液（gingival crevicular fluid，GCF），生化分析ALP活性的变化．结果显示：加力后7d、14d和21d，GCF-ALP活性均较受力前显著增加（p〈0．05），且在14d达到峰值（p〈0．01）；近、远中位点GCF-ALP活性存在差异，近中侧大于远中侧（p〈0．05）．表明GCF-ALP活性的变化趋势反应了正畸力作用下牙周骨组织改建模式，并与牙移动过程密切相关．ALP是反应正畸牙移动和牙周组织改建生物指标之一．     

杂色鲍碱性磷酸酶在DMSO溶液中的活力与构象变化的研究

以二甲亚砜（DMSO）为效应物．研究其对杂色鲍碱性磷酸酶（ALP）活力的影响，结果表明：该酶的剩余活力随着DMSO浓度增大而迅速下降，当DMSO浓度达40％，酶活力几乎完全丧失．说明DMSO对杂色鲍ALP有明显的失活作用．导致酶活力丧失50％的DMSO浓度为17％．在较低DMSO浓度（〈20％）的失活是可逆的反应过程．动力学研究表明，该酶的失活过程属于混合型．进一步测定游离酶（E）和酶底物络合物（ES）与DMSO的结合常数（K1和K1s），结果表明K1〈K1s即说明底物存在对酶被DMSO的失活作用有一定的保护作用．应用荧光发射光谱研究杂色鲍ALP经DMSO微扰后的分子构象变化情况，随着DMSO浓度增大，荧光强度逐渐增强．但发射峰未发生明显变化现象．说明酶分子中的生色基团残基的微环境发生了一定的变化．