绞股蓝多糖脱蛋白工艺及相对分子质量的测定

采用Sevag法、木瓜蛋白酶-Sevag法、TCA-Sevag法对绞股蓝粗多糖脱蛋白工艺进行研究.通过DEAE—52纤维素柱层析和葡聚糖凝胶G—200柱层析对粗多糖进行分离纯化,采用高效液相色谱分析法对精制多糖GPM—21的相对分子质量进行测定分析.结果表明:木瓜蛋白酶-Sevag法效果最佳,蛋白脱除率高且多糖损失量小,累计蛋白脱除率可达63.08%,多糖保留率为77.34%.液相渗透色谱法测定GPM—21的相对分子质量为200 576.     

短裙竹荪（Dictyophor a duplicata）多糖的研究（I）：Dd多糖的分离…

竹荪子实体经热水提取，乙醇沉淀，蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合去蛋白，再通过ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－２５和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００柱层析纯化，得到竹荪多糖（简称Ｄｄ）纯品，经凝胶过滤法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明，Ｄｄ多糖为均一的物质，Ｄｄ经紫外扫描，无核酸和蛋白质的特征吸收峰，ＩＲ－４００扫描表明典型多糖吸收峰，Ｄｄ的相对分子质量约为１９６０００。     

超微粉碎和普通粉碎对柳松菇多糖的提取及凝胶柱层析分离的研究

对超微粉体及三种不同大小粉体提取的柳松菇多糖及多糖的凝胶柱层析分离进行研究,结果表明,超微粉碎和普通粉碎对总糖、还原糖的提取基本没有影响,对多糖的提取影响较大．由300目超微粉提取的多糖含量和得率分别为50％和13％,未粉碎的块状、40目粗粉和100目细粉提取的多糖含量和得率分别为300目超微粉的42．8％、65．7％、72．1％和28．2％、45．7％、71．2％．采用SephadexG-200凝胶柱层析分离柳松菇多糖,得到纯化的多糖Ⅰ和Ⅱ两个多糖组分．在超微粉碎提取的柳松菇多糖中,主要是相对分子质量高的多糖Ⅰ,在未粉碎的块状提取的柳松菇多糖中,以相对分子质量低的多糖Ⅱ为主,超微粉碎有利于相对分子质量商的多糖Ⅰ的提取．多糖Ⅰ为胞内多糖,其含糖量为78％,相对分子质量约为424137,在260nm、280nm均无吸收;多糖Ⅱ的含糖量为42．9％,相对分子质量为12944,在280nm无吸收,但在260nm有一个吸收峰．     

短裙竹荪（Dictyophora duplicata）多糖的研究（Ⅰ）──Dd多糖的分离、纯化及其部分理化性质

竹荪子实体经热水提取，乙醇沉淀，蛋白酶法和Ｓｅｖａｇ法相结合去蛋白，再通过ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析纯化，得到竹荪多糖（简称Ｄｄ）纯品。经凝胶过滤法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定表明，Ｄｄ多糖为均一的物质。Ｄｄ经紫外扫描，无核酸和蛋白质的特征吸收峰，ＩＲ－４００扫描表明有典型多糖吸收峰，Ｄｄ的相对分子质量约为１９６０００。     

粪鬼伞多糖的提纯与定性研究

采用水提醇沉法提取粪鬼伞粗多糖（CPS）,并对其提纯与鉴定。CPS经酶法结合Sevag法脱除蛋白,上DEAE—cellulose-52柱和Sepharose-6B凝胶柱层析,分离纯化得多糖CPS—Ⅰa。经紫外光谱扫描,Sephadex G-100凝胶柱层析和红外光谱分析,结果显示,多糖CPS—Ⅰa具有葡萄糖醛酸的特征吸收峰,α—D吡喃糖苷键连接,是一种酸性多糖。     

半枝莲多糖的研究 分离纯化及其基本性质

半枝莲经乙醚脱脂,热水提取,Sevage 法脱蛋白质,乙醇沉淀后得半枝莲多糖粗品.经 DEAE-纤维素(DE-52)柱层析和 Sephadex G-200凝胶过滤得半枝莲多糖精品.紫外光谱分析表明不含有核酸和蛋白质.经乙酸纤维薄膜电泳、琼脂糖电泳和 Sephadex G-200凝胶过滤法柱层析结果表明均为单一条带或者单一峰,证明此多糖精品是均一的.分析表明此多糖精品的总糖含量以半乳糖为标准为115%,以葡萄糖为标准为56%,以糖原为标准是58%.用 SephadexG-200分子筛法测得平均分子量为1×10~4道尔顿.体外实验表明半枝莲多糖对移植肉瘤 S-180细胞和腹水癌细胞均有一定的抑制作用.     

长白山林蛙输卵管糖蛋白的分离鉴定

以长白山林蛙为研究对象, 对其输卵管糖蛋白进行提取分离及鉴定. 长白山林蛙输卵管冲洗液经饱和硫酸铵沉淀, DEAE-Cellulose 52离子交换柱, Sephadex G-100凝胶柱层析纯化, 得到蛋白质和糖的重合峰, 经透析、 冷冻干燥得长白山林蛙输卵管糖蛋白纯品OGP-Ⅰ. SDS PAGE电泳实验结果表明, OGP-Ⅰ是分子量为116 000的均一带. 对其分别进行蛋白和糖染色, 同一位置都出现单一条带; 紫外全扫描OGP-Ⅰ有多糖特征峰和蛋白吸收峰, 表明OGP-Ⅰ是糖蛋白纯品.     

铁皮石斛多糖的分离纯化及其结构研究

采用DEAE-52阴离子交换柱色谱法以及Sephadex G-100凝胶柱色谱法对铁皮石斛粗多糖进行分离纯化,得到4个不同相对分子质量(Mw)纯多糖组分(DOP1、DOP2、DOP3和DOP4)。运用柱前衍生化高效液相色谱法、凝胶渗透色谱(GPC)法和傅立叶红外光谱对其单糖组成、纯度和相对分子质量以及结构中单糖连接方式进行分析。研究结果表明:分离得到的4种铁皮石斛多糖的GPC色谱图均呈现为单一狭窄的对称峰,表明多糖纯度很高且均一性很好。单糖组成测定结果显示其主要为D-甘露糖和D-葡萄糖组成杂多糖,但D-甘露糖和D-葡萄糖的摩尔比在4种多糖中有一定差异性。红外光谱结果表明这四个多糖均为β-构型为主的酸性吡喃糖。研究结果可为今后铁皮石斛多糖活性和构效关系的研究奠定基础。     

海芋多糖的研究

海芋用去离子水煮提,乙醇沉淀,Sevage法去蛋白,并经凝胶柱层析精制,获得均一的海芋多糖;用紫外可见光谱仪测定海芋中多糖的含量;凝胶层析法测定海芋多糖的平均相对分子质量;酸水解、高效液相色谱分析海芋多糖的单糖组成;红外光谱测定糖残基的连接方式.结果表明海芋中多糖质量分数为0.74%,海芋多糖的平均相对分子质量为26 400,主要由葡萄糖(97.3%)通过β-糖苷键连接而成.     

香菇多糖的分离纯化研究

目的：建立一套从香菇子实体浓缩液中快速高效分离纯化香菇多糖的工艺．方法：采取超滤、乙醇沉淀、DEAE-纤维素柱层析、SephadexG-200凝胶柱层析、聚丙烯酰胺凝胶连续电泳等一系列分离纯化检测方法．结果：通过上述方法,从香菇浓缩液中纯化的LNT Ⅰb的纯度为95．55％;证实LNTⅠb为糖蛋白．     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.     

柱色谱法分离玉米油中三亚油酸甘油酯

以玉米油为研究对象,采用柱色谱法,分离提纯其中的三亚油酸甘油酯。分别以硅胶、巯丙基键合银离子硅胶为固定相,以正己烷-乙腈-异丙醇为洗脱剂。采用LC-MS和高温GC-MS的方法对各组分进行结果分析。结果表明:巯基键合银离子硅胶和硅胶这两种固定相应结合使用,玉米油中的三亚油酸甘油酯的分离效果最佳。     

高纯度黄芩素的制备及表征

提出了由黄芩制备高纯度黄芩素的方法。采用酸沉碱溶法从黄芩中提取黄芩苷,通过水解黄芩苷制取黄芩素粗品,再经硅胶和聚酰胺柱层析纯化,得高纯黄芩素,用高效液相色谱法（HPLC）测得其纯度为99.35%。采用正交试验法优化了实验条件,并对最佳条件下制备的黄芩素纯品进行了红外吸收光谱（FTIR）、紫外吸收光谱（UV）和核磁共振氢谱（¹H-NMR）表征,结果表明其为目标产物。      

溶解-沉淀法分离纯化去氢枞酸丙烯酸乙二醇酯

【目的】考察溶解-沉淀法分离纯化去氢枞酸丙烯酸乙二醇酯(DAEA)的可行性。【方法】从歧化松香中提取去氢枞酸(dehydroabietic acid,DHAA),经酰氯化、与丙烯酸(2-羟基)乙酯(HEA)反应得到DAEA粗产物,再分别通过硅胶柱层析法和溶解-沉淀法进行分离纯化,并利用1 H-NMR、熔点仪、GC-MS和元素分析法对所得产物进行表征和测试。【结果】硅胶柱层析法和溶解-沉淀法得到的DAEA的纯度分别为97.19%和98.73%,收率分别为48.37%和46.18%。【结论】与硅胶柱层析法比较,溶解-沉淀法减少洗脱剂的使用量,缩短处理时间,为松香乙烯基单体的分离纯化提供一个更简便的方法。     

番薯过氧化物酶的分离纯化及其性质研究

从番薯皮中分离和纯化番薯过氧化物酶,对其酶学性质进行表征,分析了温度、pH对酶促反应的影响,考查了酶的热稳定性、酸碱稳定性.分离纯化过程包括匀浆、水提、双水相萃取、Sepharose CL-6B凝胶层析、Phenyl Sepharose 6 fast flow疏水层析、Con A Sepharose 4B亲和层析.经纯...     

纤维素酶液中β-葡萄糖苷酶的分离纯化

通过(NH4)2SO4分级沉淀、HiPrep 26/10 Desalting脱盐柱、Source15Q阴离子交换柱、Source 15 S阳离子交换柱、HiTrap 16/60 Sephacryl S 200 HR凝胶过滤等技术,分离纯化3种来源里氏木霉、黑曲霉、里氏木霉与黑曲霉混合纤维素酶液中的β-葡萄糖苷酶。结果表明,经SDS PAGE电泳鉴定均为电泳纯,测得黑氏木霉、黑曲霉单独培养β-葡萄糖苷酶相对分子质量分别为68、129 ku,而混合菌培养分离得到两种β-葡萄糖苷酶分子质量大小分别为66.2、134 ku。与单独培养的β-葡萄糖苷酶相似。3种来源的β-葡萄糖苷酶经多步分离纯化后的纯化倍数分别为37.25、40.21、30.12,酶活回收率分别为20.1 2%、23.21 %、28.56 %。     

红枣环磷酸腺苷(cAMP)的提取工艺

建立从红枣分离纯化cAMP的工艺路线,以及用反向高效液相色谱法测定其含量的可行性方法．采用离子交换层析法,从红枣中提取了cAMP,并用硅胶柱层析技术进行纯化,反向高效液相色谱法测定其含量．在其提取纯化过程中,首次用国产的离子交换树脂替代进口树脂,并用硅胶柱层析技术替代了硅胶薄层色谱技术．通过此工艺路线获得了纯度为98．43％的样品．     

用柱层析和薄层层析法从菜籽“油脚”中分离MGDG和DGDG的初步研究

本文应用柱层析和薄层层析法,从菜籽“油脚”中分离,提纯单半乳糖甘油二酯(Monogalactosyl Diglyceride,MGDG)和双半乳糖甘油二酯(Digalactosyl Diglyceride,DGDG)并对菜籽中提纯的MGDG和DGDG的脂肪酸组成做了测定。     

蛹虫草发酵产物新纤溶酶的分离纯化

笔者所在项目组的前期研究发现,蛹虫草深层培养可以产生至少两种纤溶酶.基于此,文中对蛹虫草深层培养产生的纤溶酶的分离纯化展开了研究.采用硫酸铵盐析、Sephadex G-25凝胶色谱、Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱、CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex 75凝胶色谱对纤溶酶进行分离.最终纯化后的纤溶酶Ⅰ比活力达1467.44U/mg,纯化倍数为36.07,回收率为5.79%.纤溶酶Ⅱ比活力达1681.58U/mg,纯化倍数为41.33,回收率为4.00%.两种纤溶酶经电泳鉴定均达到电泳纯,相对分子质量分别约为28000和32000.     

牛小肠碱性磷酸酶部分性质研究

摘要：用正丁醇抽提、硫酸铵分级沉淀、EAE-32柱层析和Sephadex G-150 凝胶过滤,从牛小肠中分离纯化出牛小肠碱性磷酸酶（BIAP）.提纯倍数为50.69,比活力为48.87U/mg蛋白.酶液经SDS-PAGE呈现单一条带,且不含DNA核酸酶.该酶催化对硝基苯磷酸二钠（p-NPP）水解反应的最适pH值为9.7,pH小于6.5大于11.5均不稳定;最适温度为45℃,高于50℃不稳定.Km值为0.29mmol/L.45℃,pH9.7时最大反应速度（Vmax）为4.6μmol/(L•min).利用SDS-PAGE测定酶亚基的分子量为66KD. Mg2+、Mn2+和Ca2+对酶有不同程度的激活作用,Zn2+和EDTA对酶有抑制作用。随着Mg2+、Zn2+和EDTA浓度增加,270nm处紫外吸收值增加.