钙离子敏感受体基因cDNA的克隆与序列分析

本研究通过RT-PCR技术从妊娠第九天的大鼠子宫中扩增出长为423bp的钙离子敏感受体cDNA片段,PC R产物经凝胶回收纯化后,克隆在PGEM-T载体的T位点.测序结果和序列分析表明,本试验已成功地扩增、克隆了钙离子敏感受体基因cDNA序列,为进一步研究钙离子敏感受体在大鼠子宫中的表达与调节奠定了基础.     

有活性的激酶C受体(Rack1)在大鼠胚胎植入中的作用

目的:探讨有活性的激酶C受体(receptor for activated C kinase, Rack1)与胚胎着床及蜕膜化的关系.方法:建立大鼠早期妊娠、假孕、延迟着床和人工诱导蜕膜化模型,收集各种模型的子宫材料,利用激光共聚焦显微术检测了Rack1在大鼠子宫中的表达.结果:Rack1在妊娠第6～9天的子宫蜕膜上强表达;假孕第6～9天和延迟着床的大鼠子宫腔上皮下基质中无明显的免疫信号,而延迟着床激活胚胎周围的腔上皮下基质中有强的免疫信号.蜕膜化子宫中整个蜕膜区呈强的免疫染色信号.结论:Rack1蛋白的表达与胚胎着床及蜕膜化过程密切相关.     

早孕小鼠子宫内膜组织中IASPP表达对胚胎着床的作用

目的:探讨早孕小鼠子宫内膜组织中P53凋亡刺激蛋白抑制因子(IASPP)的表达对胚胎着床的作用.方法:对NIH雌鼠进行阴道涂片以确定其动情周期,采用实时荧光定量PCR、Western blot以及免疫组化等分别在分子和蛋白水平上检测雌鼠子宫内膜上IASPP的表达情况;对实验组小鼠左侧子宫角注射IASPP抑制剂,最后测量...     

子宫内膜异位症的子宫内膜雌激素受体和孕激素受体mRNAs的表达

目的 :探讨雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)在子宫内膜异位症 (内异症 )子宫内膜的表达。方法 :利用大鼠内异症动物模型 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,检测子宫内膜ER和PRmRNAs的表达情况。结果 :内异症模型组大鼠异位内膜ER、PRmRNAs的表达低于在位内膜和对照组正常子宫内膜 ,与后两者比较差异有显著性意义 (P <0 0 1) ;而模型组在位内膜ER、PRmRNAs的表达与正常对照组比较差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。内异症模型组异位内膜ER/PRmRNA大于在位内膜和正常子宫内膜ER/PRmRNA(P <0 0 1)。结论 :内异症大鼠异位内膜ERmRNA表达的相对增高在内异症的发生与发展中起着一定的作用     

子宫内膜胞饮突表达判断冻融胚胎移植时机的研究

目的研究利用扫描电镜观察到的子宫内膜成熟胞饮突表达判断冻融胚胎移植时机。方法对本科完成自然排卵冻融胚胎移植123个周期进行回顾性分析,按判断冻融胚胎的移植时机方法不同分为A组（利用扫描电镜观察到的成熟胞饮突判断）、B组（利用血LH峰来判断）。结果两组临床妊娠率分别为34.37%和17.58%,胚胎着床率分别为16.7%和8.6%。结论利用成熟胞饮突判断冻融胚胎移植时机可提高临床妊娠率及胚胎着床率。     

鸡生长激素受体基因的个体发育性表达研究

利用原位杂交技术揭示了鸡生长激素受体基因的个体发育性表达规律：肝组织细胞于胚胎期６ｄ龄开始表达生长激素受体基因，表达强度在胚胎期７ｄ龄时就达到最高水平；心脏、肾、肠、肺、脾组织细胞在胚胎期７ｄ龄时也能表达生长激素受体基因，表达强度分别在胚胎期９和１０ｄ龄时达到最高峰，在脑、睾丸和卵巢组织细胞中能够发现生长激素受体基因的表达，表达强度相对较弱，所有的骨组织细胞都不存在生长激素受体基因的表达。生长激素     

子宫内膜胞饮突表达判断冻融胚胎移植时机的研究

目的研究利用扫描电镜观察到的子宫内膜成熟胞饮突表达判断冻融胚胎移植时机。方法对本科完成自然排卵冻融胚胎移植123个周期进行回顾性分析,按判断冻融胚胎的移植时机方法不同分为A组(利用扫描电镜观察到的成熟胞饮突判断)、B组(利用血LH峰来判断)。结果两组临床妊娠率分别为34.37%和17.58%,胚胎着床率分别为16.7%和8.6%。结论利用成熟胞饮突判断冻融胚胎移植时机可提高临床妊娠率及胚胎着床率。     

上皮型钙粘附蛋白在人子宫内膜和早期胚胎的表达和变化

目的 :探讨上皮型钙粘附蛋白 (E -cadherin)在人子宫内膜和早期胚胎的表达和变化。方法 :采用免疫组织化学、间接免疫荧光和激光共聚焦显微镜等方法 ,检测人子宫内膜和人早期胚胎E -cadherin的表达。结果 :月经周期各阶段子宫内膜腺上皮均见E -cadherin表达 ,分泌中期达高峰 (P <0 .0 5 ) ,间质细胞未见表达。卵母细胞和早期胚胎表面均见E -cad herin表达 ,囊胚组的表达显著高于 2 - 7细胞期胚胎组 (P <0 .0 5 )。结论 :E -cadherin在子宫内膜及胚胎的表达增多变化有同步性 ,可能有利于着床。     

小鼠着床前胚胎Dicer 1和DGCR 8基因的表达

研究了miRNA生成相关基因Dicer 1和 DGCR 8在小鼠着床前胚胎各发育阶段的表达,探讨其对着床前胚胎发育的作用.建立小鼠超排、交配系统,采集着床前胚胎;采用二步法RT-PcR方法鉴定着床前胚胎Dicer1和DGcR 8表达.结果显示:小鼠卵母细胞及受精后1.5 d、2.5 d、3.5 d和4.5 d着床前胚胎均表达Dicef 1和DGcR 8基因.这是着床前胚胎IlliRNA生成物的重要基因,miRNA及其生物合成相关基因可能对着床前胚胎发育起重要作用.     

miRNA与子宫内膜容受性

microRNAs(miRNAs)是一种内源性非编码小RNA,以完全或非完全互补的方式与其靶mRNA相结合,通过影响靶基因转录或翻译来调控细胞发育、分化、增殖、凋亡及疾病的发生发展等.在胚胎着床的子宫内膜容受性形成及蜕膜化过程中,胚胎滋养层细胞对子宫内膜的有控性侵袭是胎儿正常发育的基础.虽然,目前对miRNA与子宫内膜容受性的关系仍不十分清楚,但是已有一些研究表明,在正常妊娠胎盘、绒毛和正常子宫内膜中,一些miRNA与靶基因存在一定的的互作关系.本文简要综述了miRNA与子宫内膜容受性相关的研究进展.     

用HPLC法测定红酵母中β-胡萝卜素的含量

对从红酵母中提取β－胡萝卜素的方法进行了初步探讨，并以高压液相色谱（ＨＰＬＣ）方法测定了红酵母中β－胡萝卜素的含量，采用ＯＤＳ为固定相，以甲醇∶氯仿（７０∶３０）为流动相，检测波长为４５０ｎｍ，该方法准确、快速、可靠．平均回收率为９２．０％．     

子宫平滑肌细胞雌,孕激素受体含量在性周期中的变动

采用放射免疫法（ＲＩＡ）检测大鼠在动情周期中再侧子宫角胞浆中雌、孕激素受体的含量，结果表明，大鼠在动情周期中子宫胞浆雌，孕激素受体含量呈周期性变化，与血清孕酮水平呈一定的对应关系，但两侧子宫胞浆雌，孕激素受体含量在各期无明显差异，提示大鼠可作为一种甾体激素受体测定的理想同体对照实验模型。     

Expression of vascular endothelial growth factor in rat uterus during peri-implantation

The first distinct mark of rodent implantation is the increased vascular permeability and significant angiogenesis at the sites of blastocyst implantation, but its mechanism is not clearly defined. Vascular endothelial growth factor (VEGF) is the key mediator for angiogenesis during embryogenesis and adult span and also serves as a vascular permeability factor. The aim of this study is to explore VEGF regulation mechanism and the possible role that VEGF plays in implantation by studying the VEGF expression and angiogenesis in the rat uterus during estrous cycle, ovarioectomized and peri-implantation stages usingin situ message RNA hybridization and confocal laser scanning techniques. The results indicated that VEGF was regulated by ovarian steroid hormones. VEGF expression before implantation was localized at luminal epithelium, shifted to stroma as implantation initiated and extensively located at the decidualizing stroma region after implantation. Bandeiraea simplicifolia-1 (BS-1) agglutinin and antibody against von Willebrand factor (vWF) were used to mark the endothelial cells and blood vessels. The results showed that the active angiogenesis occurred during the implantation process and this effect was probably mediated by VEGF. The results suggest that under the regulation of ovarian steroid hormones, VEGF plays an essential role in angiogenesis and increasing vascular permeability in endometrium, which are necessary for successful implantation.     

小立碗藓CAS基因的克隆及与拟南芥CAS基因的比较

钙信号在动植物的生长、发育过程中具有不可替代的作用.胞外钙受体(Extracellular Calcium-sensing receptor,CAS)是动植物质膜上一种跨膜离子通道蛋白,可以感受胞外Ca2 水平,充当第一信使将胞外的信号传递到细胞内.但迄今为止,仅2003年从植物拟南芥中克隆了胞外钙受体CAS基因,其起源进化我们知之甚少.本实验成功克隆了小立碗藓CAS基因,其cDNA全序列共1 574 bp,5′-非翻译区80个核苷酸,3′-非翻译区234个核苷酸,开放阅读框(ORF)1 257 bp,编码419个氨基酸,共有6个内含子.虽然藓类植物与被子植物进化距离较远,但小立碗藓CAS基因前五个内含子的插入位置以及相位与拟南芥完全相同,这说明植物中CAS基因在漫长的进化过程中非常保守,暗示被子植物胞外钙离子信号感受、传递机制起源于藓类植物.     

大鼠耳蜗血管纹胆碱能M受体的表达及意义

目的:研究胆碱能M受体在耳蜗血管纹的表达.方法:采用RT-PCR技术检测大鼠耳蜗血管纹上胆碱能M受体的基因表达.结果:扩增出标志M2、M3、M4和M5受体亚型基因表达的PCR产物,未扩增出标志M1受体亚型的产物.结论:胆碱能M2、M3、M4和M5受体亚型在耳蜗血管纹有表达,提示胆碱能M受体可能参与了血管纹功能的调节,为研究胆碱能M受体在血管纹上的功能提供分子生物学基础.     

实验性癫痫大鼠补体C3b受体的表达

目的：建立大鼠的实验性癫痫模型，探讨实验性癫痫大鼠补体C3b受体的表达，进一步揭示癫痫的免疫炎症机制．方法：采用皮下注射海仁酸方法建立实验性癫痫大鼠模型；采用免疫组织化学染色方法观察实验性癫痫大鼠补体C3b受体的表达．结果：给大鼠皮下注射海仁酸可成功地建立实验性癫痫大鼠模型，其大脑海马锥状细胞层可见到神经元的变性，并可见补体C3b受体的明显表达．结论：实验性癫痫大鼠大脑海马硬化发生过程中，存在着补体系统参与的免疫反应发生，并引起炎症反应、     

大鼠促红细胞生成素受体基因克隆及其在颅脑损伤模型中的表达分析

利用巢式PCR(nest PCR)的方法克隆大鼠促红细胞生成素受体基因.该基因ORF区全长1 524bp,编码507个氨基酸,推测其相对分子质量为55.48ku,等电点5.07.实时荧光定量PCR结果显示:大鼠早期颅脑损伤中,EPOR基因表达呈逐步上升趋势,颅脑损伤后24h表达量达到顶峰,为对照组的6倍.     

利用不同冷冻方法建立大鼠胚胎保种库的研究

采用程序冷冻、玻璃化冷冻和OPS法对大鼠囊胚进行了冷冻保存,探讨了不同冷冻方法对胚胎存活率的影响,解冻后存活率分别为82．4％,76．9％,85．7％;孵化率分别为47.1%,46.1%,53.6%。3种方法所得的囊胚存活率及孵化率均无显差异,均可作为对大鼠囊胚进行冷冻保存的有效方法,可用于胚胎建库。     

孕鼠子宫内5-HT免疫反应阳性肥大细胞的研究

以正常孕鼠和自然抗着床鼠的子宫为实验材料,采用组织化学和免疫组织化学技术,研究了小鼠子宫肥大细胞(mast cell,MC)在胚泡着床前后(孕3~7 d)表达5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的状况.结果表明:(1)绝大多数子宫MC为5-HT免疫反应阳性,阳性率在77.3%~93.6%之间;(2)自然抗着床鼠的5-HT阳性率显著高于正常孕鼠(P<0.05).实验结果提示:(1)子宫MC是孕鼠子宫内5-HT的重要来源,5-HT在着床过程中可能具有免疫调节作用;(2)子宫内MC表达5-HT量的异常与抗着床现象的发生有一定的关系.     

干扰大鼠背根神经节MrgC受体mRNA的实验研究

大鼠MrgC受体与人的MrgX1受体有相似特性,但至今尚无MrgC受体的拮抗剂,阻碍了对其功能的研究.将大鼠的背根神经节(DRG)进行体外培养,加入小分子片段RNA(siRNA)对MrgC受体进行干扰.干扰时间为4 h,24 h之后再重复干扰1次.结果显示干扰后DRG中MrgC受体的mRNA表达减少84%,表明该分子片段RNA能有效使MrgC受体基因"沉默".