GST酶的提取纯化及特性分析

通过硫酸铵分级盐析、Sephadex G-25 脱盐、A-25柱层析、丙酮沉淀、Sephadex G-75及Sephadex G-200等一系列分离纯化手段,从小麦幼穗抽提液中分离得到了电泳纯的谷胱甘肽转移酶.结果表明,1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)浓度变化的体系中,该酶表观Km=10.42 nmol/L;谷胱甘肽(GSH)浓度变化的体系中,表观Km=299 μmol/L.     

多级色谱纯化牛胎盘免疫调节多肽及性质测定

使用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换色谱、Sephadex G-25 凝胶色谱和Sephasil C18反相高效液相色谱等分离纯化技术,采用体外培养淋巴细胞增殖试验,从牛胎盘提取液中分离出了具有免疫调节活性的多肽。免疫调节多肽对淋巴细胞增殖的促进作用具有剂量依赖性。纯化后的免疫调节多肽经过毛细管电泳(CE)鉴定为单一组分。毛细管等电聚焦电泳(CIEFE)测定多肽的等电点是3.82。基质辅助激光解吸附飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)测定多肽的相对分子质量为2134。蛋白质测序仪测定多肽的序列为Tyr-X-Phe-Leu-Gly-Leu-Pro-Gly-X-Thr。     

苦瓜籽中一种抗胰蛋白肽的分离及抗真菌作用观察

利用凝胶过滤层析Sephadex G-75、强阳离子交换色谱SP-650M,从苦瓜籽中分离纯化出一种活性多肽.该多肽在Tricine-SDS-PAGE上显示为单一的谱带,分子量约为6.8 kDa.在经还原剂二硫苏糖醇(DTT)处理后的电泳结果表明该多肽不含有分子间的二硫键.此多肽是一种胰蛋白酶抑制剂,同时具有抗植物致病菌活性,是一种具有双功能作用的多肽.     

离子交换层析和凝胶过滤分离纯化抗凝血多腚

以DEAE-C52离子交换层析和Sephadex G50凝胶过滤成功地从盐源山蛭(Haemendipsa yanyuanensis)头部分离纯化了抗凝血多肽,获得了蛋白质质量浓度为1.17mg*mL-1、抗凝血酶比活性为152.78U*mg-1的抗凝血多肽,证明了DEAE-C52离子交换层析和Sephadex G50凝胶过滤是分离盐源山蛭抗凝血多肽的有效方法.     

胡萝卜籽抗氧化肽的分离纯化及活性研究

采用凝胶过滤色谱Sephadex G-50和反相高效液相色谱对胡萝卜籽中的抗氧化肽进行分离纯化.以DPPH自由基(2,2-二苯基-1-苦肼基)清除率为指标,测定多肽的抗氧化活性.采用电喷雾电离质谱法测定该多肽的相对分子质量.研究结果表明:经过分离纯化,得到一个具有较强抗氧化活性的多肽,在质量浓度为1 mg·m L-1时,其DPPH自由基清除活力达到(92.02±0.47)%,相对分子质量为339.3 u,由3个氨基酸残基组成.     

天然抗冻多肽的制备、 分离及细菌低温保护活性研究

利用热水抽提法提取鲨鱼皮明胶,控制酶法水解条件制备天然抗冻多肽.以细菌低温保护活性为指标,筛选蛋白水解酶种类及酶解时间,利用Sephadex G-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex C-25强阳离子交换色谱等分离手段进行分离,得到细菌低温保护高活性组分.结果表明,酶解鲨鱼皮明胶得到高活性抗冻多肽的最适蛋白水解酶为酸性蛋白酶,酶解温度50℃、pH 3.0、酶/底物3 000 U·g-1、底物浓度3%、酶解时间1 h;经过Sephadex G-50凝胶过滤色谱、SP-Sephadex C-25强阳离子交换色谱等分离手段得到阳离子的P2组分,经过细菌低温保护测试,当浓度为500μg·mL-1时,大肠杆菌的存活率达到80.8%.分离得到的抗冻多肽具有较高的抗冻活性,可望应用于食品、医药等产业中.     

鲢鱼（Aristichthys nobilis）鱼精蛋白的纯化和鉴定

采用Sephadex G-50凝胶层析、GM-Sepharose CL 6B离子交换层析及反相高压液相色谱等步骤从鲢鱼鱼精蛋白的粗品中分离得到一种具有抗菌活性的蛋白质。经SDS－PAGE及生物质谱鉴定,该蛋白质为单一组份,分子量为13331.9.Da。该蛋白分子中碱性氨基酸总量为33．4％,N－末端序列为NH2－Pro-Gln-Arg-His-Lys。     

一种基于信息论的蛋白质数据库搜索鉴定算法

为了有效地利用蛋白质串联质谱数据,提高蛋白质鉴定的准确性,提出了一种基于信息论的蛋白质数据库搜索鉴定算法——ITPIA(information theory based protein identification algorithm)算法.针对多肽串联质谱质量低、噪音多等问题,ITPIA算法利用了信息论中的熵理论提出了一种有效的实验串联质谱和多肽的理论质谱的匹配打分算法.该算法更大程度上从多肽串联质谱中获得蛋白质的结构信息.实验结果表明,ITPIA算法有效地提高了蛋白质鉴定的准确性.     

基于LC-MS/MS策略建立十字花科黑腐病菌蛋白质表达谱的方法研究

【目的】建立十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)的蛋白质组学研究平台,用于分离、鉴定该菌的致病相关蛋白质。【方法】Xcc 8004经过液体培养,分别提取胞内蛋白质和胞外蛋白质,对所有蛋白质进行液体酶解,通过强阳离子交换色谱预分离多肽混合物,预分离后的馏分采用EASY-nLC结合LTQ-Orbitrap质谱鉴定蛋白质表达谱。【结果】建立了基于bottom-up策略的蛋白质组鉴定方法,采用第一维离子交换预分离和第二维反相色谱分离结合,实现了高通量鉴定蛋白质组表达谱的技术体系。通过SEQUEST检索,在胞内蛋白质样品中共鉴定蛋白质数目为1595个,胞外蛋白质样品共鉴定蛋白质数目为1241个。【结论】建立的LC-MS/MS方法适合用于十字花科黑腐病菌蛋白质组学的研究,为研究微生物植物相互作用奠定了方法与理论基础。     

转移因子的性质研究

利用 Sephadex G- 2 5柱层析等方法对自制转移因子进行分离纯化 ,并进行分析 ,结果表明 ,其活性组分为多肽及核苷酸的复合物 ,各组分所携带的碱基成分一致 ,证明均为腺嘌呤 .氨基酸分析表明 ,自制转移因子的总氨基酸包括游离氨基酸和组成多肽的氨基酸     

同位素标记结合中性丢失扫描鉴定白蛋白早期糖基化修饰肽段

采用 [13C6] 同位素标记的葡萄糖作为标签,在体外建立非酶糖基化反应模型,并采用MALDI-TOF对模型中的糖基化人血清白蛋白(HSA)进行验证. 以高分辨率的液质联用四级杆飞行时间质谱(HPLC/Q-TOF MS)为分析平台,经过一级质谱(LC/MS)筛选糖基化肽段. 采用target MS/MS模式对筛选出的34条肽段进行分析. 运用蛋白质组学数据分析工具pFind软件对肽段的中性丢失扫描及二级质谱(LC/MS/MS)数据进行分析,最终获得16条早期糖基化修饰肽段的序列及修饰位点信息.      

液相色谱-质谱法测定Beagle犬血浆中利培酮及9-羟基利培酮的浓度

建立了一种LC／MS方法测定犬血浆中利培酮及其代谢产物9-羟基利培酮浓度的方法、以氯氮平为内标,使用液液萃取的方法提取待测物,经液相梯度洗脱后在质谱进行检测．液相使用Agilent eclipse XDB C18（150mm×4．6mmI．D．,5μm）色谱柱,流动相为乙睁水（10mmol·L^-1醋酸铵＋醋酸调pH至4．6）．质谱使用正离子扫描,检测离子对为利培酮的411．4→191．0和9-羟基利培酮的427．2→207．2．利培酮和9-羟基利培酮线性范围均为0．05—100ng·mL^-1,最低定量限均为0．05ng·mL^-1。日内和日间精密度均小于7．8％;方法的准确度在±8．7％．此方法可满足肌肉注射利培酮微球后犬血浆中药物浓度的测定研究的需要．     

液质联用研究人重组干细胞因子一级结构

通过高效液相色谱(HPLC)和质谱技术,对人重组干细胞因子(rhSCF)分子进行分析,以确证其一级结构.将rh-SCF样品胰酶酶切,HPLC-RPC分离,基质辅助激光解吸附电离-飞行时间串联质谱仪(MALDI-TOF-MS)对rhSCF的酶切肽段进行解析,并对rhSCF的O-糖基化和N-糖基化位点进行了分析.结果:(1)rhSCF分子质量得到测定;(2)rhSCF的一级结构得到确认,测定的肽质量谱的覆盖率达到94%,分子中有两对二硫键;(3)鉴定了样品中的N-糖基化位点,并对rhSCF产品的O-及N-连接糖型上的糖结构进行初步探讨.结果显示:rhSCF一级氨基酸序列和二硫键形成位置与理论上一致,糖基化特性符合毕赤酵母表达蛋白的糖基化特点.     

蜗牛肝超氧化物歧化酶的纯化及性质研究

实验以新鲜蜗牛肝脏为材料，经匀浆、盐析、氯仿－乙醇处理、透析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５柱层析等步骤、纯化得到超氧化物歧化酶。对其理化性质鉴定表明，用此法纯化的ＳＯＤ纯度均一，比活力为６８００Ｕ／ｍｇ·ｐｒ，分子量为３０．３ＫＤ，紫外最大吸收峰２５９．６ｎｍ，Ｎ－末端分析表明为Ａｌａ。     

GC/MS和LC/MS法检测水溶液中壬基酚的氯化产物

 含40 mg/L壬基酚的水样加入次氯酸钠有效氯含量10 mg/L),反应4天后用氯仿提取壬基酚氯化反应产物,分别用GC/MS和LC/MS进行检测。GC/MS 和LC/MS的检测结果均显示,壬基酚和次氯酸钠反应主要生成一氯壬基酚和二氯壬基酚等两类取代产物。GC/MS方法可分离壬基酚及其氯取代产物的多种同分异构体,其总离子流图上除了原料壬基酚(m/z 220)以外,还显示反应生成的产物峰,根据每个产物峰所对应的质谱图尤其是同位素峰的丰度比,再结合谱库的检索信息,可以推断出反应产物为壬基酚的一氯(m/z254)或二氯取代物(m/z 288)。LC/MS中每类化合物分别对应一个色谱峰,每个色谱峰对应的质谱图信息简单明确,由于采用(-)ESI模式,显示该化合物的［M-H］相对分子质量,因此可作为判断该类化合物的依据。同时,(-)ESI MS直接进样的方式可以实现样品的快速检测。     

气相色谱-质谱联用法检测中毒酒样中的钩吻碱

用气相色谱-质谱联用法（GC—MS）测定引起中毒的定性含有钩吻素的自酿药酒样品。样品用自制无水硫酸钠小柱干燥净化后,在DB-5MS（30m×0．25ram×0．25μm）毛细管色谱柱上分离,用气-质联用仪进行测定。结果样品定性检出钩吻素甲,色谱分离效果良好。本方法简单、快捷,灵敏度高,测定结果准确、可靠,适合日常钩吻碱中毒样品的检测。     

南美白对虾血蓝蛋白与抗人IgG相互作用的研究

以采自汕头的南美白对虾血清为研究对象, 运用Sephdex_75 柱层析、PAGE、Dot_ELISA、SDS_PAGE和Western_blotting等方法, 探索血蓝蛋白与抗人IgG之间的相互作用. 结果表明, 血蓝蛋白不仅可与兔抗虾血蓝蛋白抗血清发生特异性的结合, 也可与抗人IgG发生明显的交叉反应. 进一步研究显示, 血蓝蛋白表现为相对分子质量分别为75 kDa和73kDa的两个亚基, 其中75 kDa亚基与抗人IgG呈显著阳性, 表明, 血蓝蛋白75 kDa亚基与人Ig存在相似的抗原决定簇或高度同源的同源区域.     

快速高分离液相色谱/四级杆串联飞行时间质谱 分析山楂籽中的主要黄酮成分

采用快速高分离液相色谱/四级杆串联飞行时间质谱(RRLC/Q-TOF MS)联用技术进行山楂籽中的黄酮类化合物分析方法研究.山楂籽黄酮经超声辅助提取后,选用Welch Materials C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相组成分别为0.1%甲酸水溶液和乙腈,梯度洗脱.在正离子模式下,经飞行时间质谱分离并检测了15种黄酮成分.结果表明,快速分离液相-四级杆串联飞行时间质谱联用技术可以快速准确鉴定样品中的黄酮成分.