一株海因酶产生菌形态特征与培养条件

报道了一株假单胞杆菌(Pseudomonas putida Yz-Ⅱ6)的形态特征及产海因酶的发酵条件．结果表明该菌为杆状，菌落圆形光滑，革兰氏染色阴性，单根极生鞭毛．该菌产海因酶最佳发酵条件为起始pH值7.0的YCG培养基，并用0.1％海因诱导，25℃摇床培养20h，酶活力可达到1.3U／mL菌液．     

铜绿假单胞杆菌调节基因突变株的分离及特性

铜绿假单胞杆菌ＰＡＯ１经过亚硝基胍诱变获得了弹性蛋白酶缺失的突变株。经弹性蛋白营养琼脂平板法，从１０次独立处理的６００００个菌落中得到７１株该酶缺失的突变株，其突变株对Ｎ－３－氧代己酰－Ｌ－高丝氨酸内酯（ＨＳＬ）诱导物有无反应分成２组。ＰＡＮＯ６７菌株在加入诱导物后能恢复该酶产生，经过菌落形态、生化特征和细胞膜蛋白质成份的分析，除该酶产生缺失外，突变株ＰＡＮＯ６７与亲本菌株ＰＡＯ１相同，结果表明，ＰＡＮＯ６７是弹性蛋白酶操纵子的调节基因发生突变的诱变菌株。     

繁茂膜海绵共附生假单胞菌属菌株DEH138A中脱卤酶的分离纯化及性质表征

用硫酸铵沉淀,Q-Sepharose HP离子交换层析,Superdex 200凝胶过滤层析和Mono-Q离子交换层析方法,对从大连潮间带繁茂膜海绵中分离得到的1株假单胞菌DEH138A(Pseudomonas sp.DEH138A)中的脱卤酶进行分离纯化和酶学性质表征。结果显示,假单胞菌菌株DEH138A中含有一种能降解L-2-氯丙酸的L-2-卤代酸脱卤酶(L-DEX)。经纯化后,L-DEX亚基分子量为27.8kDa,全酶分子量为42.5kDa,推测其为一个二聚体蛋白。L-DEX最适pH值及最适反应温度分别为10.0和30℃,Km值为0.63mmol/L。L-DEX能够作用于多种2-卤代酸,而且对单溴乙酸的脱卤效果最好。DTT和EDTA对L-DEX无抑制作用,Cu2+和Co2+对L-DEX有明显的抑制作用。L-DEX具有立体选择性等独特的酶学特性,在环境修复、精细化工等领域具有潜在的应用价值。     

假单胞菌TS-1138 L-半胱氨酸脱巯基酶的纯化和性质研究

假单胞菌TS-1138L-半胱氨酸脱巯基酶经DEAECellulose-52阶段洗脱、SephadexG-100柱层析被纯化了80.3倍,SDS-PAGE鉴定为单一条带,该酶的相对分子质量为53.0kDa;酶反应的最适pH为7.5,最适反应温度为35℃,该酶的米氏常数为2.37μmol/L,最大反应速度为0.11μmol/mL·min·Pb2+对该酶有很强的激活作用,Zn2+对该酶有较强的抑制作用,羟胺为该酶特异性的抑制剂.     

荧光假单胞菌Pseudomonas fluorescens GcM5 1A菌株的 胞外木素过氧化物酶的部分纯化和鉴定

荧光假单胞菌GcM5 1A是松材线虫携带的一种致病菌。在GcM5 1A的培养液中发现有木质素过氧化物酶的活性，同时显示很强的毒性。通过对其胞外木质素过氧化物酶的酶学性质的初步研究发现：其最适温度为35 ℃，最适pH为4.0。在15~35 ℃、pH为6.0~9.0范围内，酶活保持相对稳定。NH2OH·HCl和KCN对酶活的抑制作用分别达到88 %和57 %，而NaN3对酶活的抑制作用只有15 %左右。Ca2+、Mn2+ 和Fe3+对其活性有增强作用，但是Hg2+ 和 Zn2+却有中等的抑制作用。KCN 和NH2OH·HCl抑制其酶活性分别达57 %、88 %，而NaN3的抑制率仅为15 %。吸收光谱显示该酶在406 nm处有一个Soret峰，加入1 mmol/L Na2S2O4后，吸光度出现了明显的下降，但Soret峰没有显著移动。     

一株产海因酶菌种的筛选与鉴定

通过对土壤中微生物以单一海因类似物作为唯一氮源富集、分离和纯化,利用双层琼脂法筛选获得产海因酶菌株,以基因工程手段提取其DNA,并进行特异性的16S rDNA测序,最终利用Blastn工具将其基因序列与GenBank数据库中的进行序列比对。研究表明:该菌与Bacillus megateriumQM B1551(NC004604)序列相似性达到98%,证明该菌为巨大芽孢杆菌。     

沼泽红假单胞菌的分离鉴定、纯化及计数培养基优化研究

目的:通过分离鉴、纯化与鉴定菌株,然后按沼泽红假单胞菌所需的营养组分,优化计数培养基的配方,为生产中的计数提供试验数据.方法:待分离的菌落接种于培养基,然后进行反复的纯化,最后观察菌落的形态,按照细菌鉴定手册鉴定;按所需碳源、氮源、磷酸盐、酵母膏等因素进进行正交设计,优化出最佳的培养基配方.结论:分离与纯化得到一株红红螺菌科沼泽红假单胞菌;通过优化得到最优及验证试验得到最佳的计数培养基配方为:氯化铵1.5 g/L,乙酸钠1.5 g/L磷酸氢二钾0.4g/L,氯化钠1.0g/L,硫酸镁0.3g/L,酵母膏2.0g/L,琼脂14.0g/L.该配方能够对沼泽红假单胞菌准确及简捷的计数.     

一株拮抗稻瘟病菌的产荧光假单胞杆菌

从稻草茬中分离到的拮抗细菌中,筛选出高效菌株ＪＫＤ－２．无论在稻瘟菌孢子培养基或扩大培养基中,它都具有溶解菌丝体和抑制孢子形成的能力．在土豆培养基中,对多种植物病原菌具有拮抗作用．经电镜观察,培养物性状和生理生化鉴定,可确定该菌为具有荧光的假单胞杆菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐｐ．）的一个成员．该菌体培养液经氯仿、乙酸乙酯、８０％丙酮水和水分别提取,除８０％的丙酮水外,都能从细菌菌体或培养基中获得对稻瘟菌的拮抗物质．在盆栽试验中,水稻秧苗叶面喷洒ＪＫＤ－２,能抑制稻瘟菌的接种感染,与对照组相比,防治效果可达６０％,差异达到显著程度．该菌经稻草培养基诱导,能分泌一种胞外蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,相对分子质量约为１３ｋｄ．     

非天然D-型氨基酸生物转化中酶的纯化及其基因序列

D-海因酶 (D- Hydantoinase,HDTase )和 N -氨甲酰基 - D-氨基酸酰胺水解酶 (D- Carbam oylase,DCase )是医药和食品工业上用于生物转化 D-型氨基酸的酶。为了用人工酶替代现用的天然酶转化工艺 ,我们用热变性、硫酸铵分级及 Q - Sepharose、Phenyl- Sepharose、Superose12等多步柱层析 ,从现用菌株 No.2 2 6 2中纯化了 HDTase和 DCase,二酶均达到 SDS- PAGE纯 ,经 N -端序列分析 ,HDTase和 DCase的 N -末端氨基酸序列分别为 :MDKL IKNGTI和 MTRQKIL AF。首先 ,根据酶的 N -末端氨基酸顺序推论并合成了正向多核苷酸简并引物 ,然后按蛋白质数据库资料 ,在比较不同菌株氨基酸残基同源性基础上 ,化学合成了数对反向多核苷酸引物 ,以菌株 No. 2 2 6 2基因组 DNA为模板 ,经 PCR扩增获得了 HDTase的部分基因序列 (～ 70 0 bp )和 DCase的全部基因序列 (912 bp ) ,为使人工酶用于非天然 D-型氨基酸的生物转化奠定了基础。     

一株新的氧化硫硫杆菌的分离纯化与培养

采用Starky-Na2S2O3和Waksman液体培养基以及Starky-Na2S2O3-琼脂固体培养基,从某矿矿坑水中分离、纯化得到一株新的氧化硫硫杆菌,并初步研究了这株氧化硫硫杆菌在液体培养基Starky-Na2S2O3和W aksman中的生长情况,发现W aksman培养基更适合用来培养这株氧化硫硫杆菌.     

铜绿假单胞菌的LexA蛋白在大肠杆菌中的高效表达与纯化

目的:对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)的阻遏蛋白LexA进行基因克隆、重组表达及蛋白纯化.方法:采用PCR法从PAO1株基因组中扩增出1 086 bp的LexA基因,将此基因片段插入到表达载体pET32a( )上,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.包涵体洗涤后用8 mol/L尿素溶解,以镍离子亲合柱层析作为第1步纯化,Superdex75凝胶过滤层析作为第2步精细纯化,反相高相液相色谱法(HPLC)测定蛋白的浓度.结果:LexA以包涵体形式表达,表达量为45%,经镍离子亲合柱层析纯化后LexA蛋白纯度达到85%以上,回收率大于80%,镍离子亲合柱层析和凝胶过滤层析两步纯化目的蛋白,经HPLC测定,最终目的蛋白的纯度为98.97%.结论:在pET32a( )表达系统中实现了PA的LexA蛋白的高效表达,两步纯化法获得高纯度的目的蛋白,为进一步鉴定LexA靶位点奠定了基础.     

荧光假单胞菌产木聚糖酶的纯化和性质

有硫酸铵分级沉淀,葡聚糖凝胶分离技术,对荧光假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕ．）所产的半纤维素酶进行分离纯化,得到单一组分的木聚糖酶。通过凝胶电泳法,测得其摩尔式量为３３０００。研究表明,该酶的最适ｐＨ值为６．０,最适温度６０℃。酶的动力学研究测出米氏常数Ｋｍ值为４．７６ｍｇ／ｍｌ。     

普鲁兰酶的纯化及其性质

采用ＤＥＡＥ—纤维素柱和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱色谱对从土壤中筛选得到的普鲁兰杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓａｃｉｄｏｐｕｌｕｌｙｔｉｃｕｓ）菌株所产生的普鲁兰酶（丹麦ＮｏｖｏＮｏｒｄｉｓｋ产品）进行分离纯化。酶活测定的结果表明,该酶的最适催化ｐＨ为４８,最适温度为３８℃,有相当高的热稳定性,米氏常数Ｋｍ为５２ｍｍｏｌ。     

玉米Mn-SOD的分离纯化与性质分析

利用金属螯合亲和层析,结合DEAE-纤维素离子交换层析,从玉米匀浆液中分离纯化到电泳纯的Mn-SOD组分.双向电泳和SDS-PAGE分析表明:玉米Mn-SOD的亚基分子质量为26.2 kD,等电点为5.3;热稳定性、酸碱稳定性高于玉米Cu/Zn-SOD.     

基于PT2262/2272的防盗器

本文介绍了一种由AT89C2051单片机控制的背包防盗器的设计。利用编、解码芯片PT2262/2272实现查询信号的无线传输。系统具有使用方便、价格低廉、安全可靠等众多优点。     

枯草杆菌SBS6中一种纤溶酶的纯化及部分特性

从枯草杆菌SBS6菌株发酵上清液中分离得到电泳纯的纤溶酶，经SDS—PAGE和凝胶过滤测得其分子质量为31ku，最适pH8．9，最适温度为50oC，酶在60℃下pH5～12范围内相当稳定，Ca^2 ，Mg^2 ，Zn^2 ，Mn^2 等离子对酶的溶解血纤维活性无明显影响，Fe^2 和Fe^3 分别抑制酶活性的17％和20%。     

Purification and Partial Characterization of a Collagenolytic Enzyme Produced by Pseudomonas aeraginosa SCU Screened from Rotten Hides

Strain Pseudomonas Aeraginosa SCU isolated from rotten hides is shown to produce various gelatinolytic enzymes with molecular masses ranging from - 50 to - 200 kD. A gelatinolytic enzyme called PAC exhibiting collagenolytic activity is purified by SP sepharose fast flow, Sephadex G-200 gel filtration and native PAGE cutting method. The purified enzyme has an apparent molecular weight of about 110 kD by SDS PAGE without β-mercaptoethanol. Treatment withtβ-Me suggests that PAC is dissociated into three subunits approximately 33 kD, 25 kD and 20 kD with a ratio of 2:1:1, named sub A, sub B and sub C repectively. EDFA and EGTA display a significant inhibitory effect on the enzyme activity while PMSF, leupeptin and pepstain do not appreciably inhibit it. The first 15 amino acid residues of the major subunit (subA) are determined and the sequence is Ala-Glu-Ala-Gly-Gly-Pro-Gly-Gly-Asn-Gln-Lys-Ile-Gly -Lys-Tyr. This sequence is identical to that of elastase of P. aeruginosa. The fragment of encoding mature sub A is cloned and its sequence is determined, which has a high homology with the gene of elastase. These results indicate that PAC is a novel collagenolytic metalloprotease composed of three kinds of subunits, of which elastase is the major one.     

基于PT2262/PT2272的四路无线遥控开关的设计

伴随电子科技的繁荣和人们对生活水平和质量要求的不断提高,无线遥控开关的设计也越来越先进化、高科技化。为了扩大无线遥控开关的适用范围,本文设计了一款结构简单、使用简易方便、空间体积小的基于PT2262/PT2272的四路无线遥控开关,简要分析了设计原由,电路设计主要包含发射部分和接收部分,并对整个电路进行了详细的描述。     

蕲蛇蛇毒中凝血酶样酶的分离纯化与特性

蕲蛇粗毒经DEAE -SephadexA - 5 0、POROS 5 0HS及TSKG30 0 0SW分离纯化 ,得到 1个具有凝血酶活力的峰 .该峰经SDS -PAGE和PAGE检测均为一条带 ,分子量约 2 8.0kDa ,加DTT处理后 ,拆分为约 14.8kDa的亚基 .其凝血酶活力为 14.7NIHu/mg ,精氨酸酯酶活力为 2 1.98TAMEμmol/mg·min .该组分具有激活因子ⅩⅢ的活性 ,但没有明显的出血反应 .肝素不影响该组分的凝血酶和精氨酸酯酶活性 ,EDTA、PMSF、DFP则会产生不可逆抑制作用 ,表明该组分属于金属蛋白 .