马铃薯Y~N病毒的研究

从我国马铃薯“里外黄”和“S41956”上分离到能在普通烟“白肋”和“黄苗榆”上引起叶脉坏死的马铃薯Y病毒株系。根据指示植物上的症状,体外生物活性,电镜下形态观察以及交互保护等试验结果,证明此分离物同1951年F.C.Bawden和B.Kassanis描述的马铃薯Y病毒烟草叶脉坏死株系(TVNV)即PVYN是一致的。用部分提纯的PVYN-S41956制备成效价为l/640的抗血清。抗血清和PVY普通株系可以进行沉淀反应。证明二者血清学是相关的。交互保护试验证明,在烟草上,PVY普通株系对PVYN-S41956的侵染无保护作用。以辣根过氧化物酶标记抗体,用酶联免疫吸附测定技术,可测出PVYN的最低浓度为10ng/ml,感PVYN马铃薯叶片汁液最高稀释浓度为1/128。     

用非同位素标记的pAV 401探针进行分子杂交鉴定马铃薯纺锤块茎类病毒

用Eoehringer Mannheim Biochemica的pAV401探针,以分子杂交的方法鉴定了马铃薯和番茄中的马铃薯纺锤块茎类病毒(PSTV)。试验表明当用探针浓度为200ng/ml, β-半乳糖苷酶为100 mU/ml,即酶结合物稀释至1:100时,可以测定出提纯PSTV—RNA最低浓度为390pg/斑点,感染PSTV的马铃薯和番茄叶片汁液最高稀释浓度为1:128。样品提取方法试验表明,以酚法教果为最佳。健康马铃薯汁液对提纯PSTV—RNA鉴定效果无明显影响。样品汁液在稀释前予先变性对提高杂交效果无明显作用。本文对Boehringer pAV401探针检测PSTV的灵敏度,所用探针浓度以及显色系统进行了讨论和评价。     

应用反向间接血凝试验测定马铃薯Y病毒的研究

用 PVY 免疫球蛋白致敏绵羊红血球,对 PVY 抗原及侵染的烟草叶片汁液进行了测定。结果表明,测定提纯的抗原所用的 PVY 免疫球蛋白致敏绵羊红血球 PBS 的最适 PH 为5.6,感病汁液 PBS 的 PH 为7.2。反向间接血凝试验测定 PVY 抗原的最低浓度为135ng/me,感染 PVY 烟草叶片汁液的最高稀释倍数为1:128。     

用长臂光敏生物素标记的cDNA探针核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒

用长臂光敏生物素标记含有马铃薯纺锤块茎类病毒（Ｐｏｔａｔｏｓｐｉｎｄｌｅｔｕｂｅｒｖｉｒｏｉｄ，ＰＳＴＶｄ）双拷贝ｃＤＮＡ的重组质粒ｐＳＴ－Ｂ１４，制备成光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针，用核酸斑点杂交检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片和块茎提取物均出现较强的阳性杂交信号，而健康马铃薯为阴性．试验结果表明：光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针检测感染ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片汁液最高稀释度为１１２８     

用复制酶基因cDNA探针检测表达病毒外壳蛋白基因马铃薯中的PLRV

利用马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）复制酶基因３′端长约６００ｂｐ的ｃＤＮＡ，用缺口平移方法进行３２Ｐ同位素标记，制备成ｃＤＮＡ探针，通过核酸斑点杂交，对提纯的马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）、病毒ＲＮＡ、ＰＬＲＶ感染的马铃薯汁液，表达ＰＬＲＶＣＰ基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测．结果表明，３２Ｐ标记的复制酶基因ｃＤＮＡ探针特异性强、灵敏度高．可测得提纯病毒的最低含量为４０８ｎｇ／ｍｌ，病毒ＲＮＡ最低量为２７．８ｐｇ／ｍｌ，未转ＣＰ基因接种ＰＬＲＶ的马铃薯叶片提取液的最高稀释度为１３７５．接种ＰＬＲＶ的转ＣＰ基因的抗性马铃薯块茎芽和叶片提取液的最高稀释度为０～１／１５．此探针和只转入病毒外壳蛋白基因，不接种ＰＬＲＶ的转基因马铃薯汁液不发生反应．表明，探针只与ＰＬＲＶ基因组ＲＮＡ特异反应，而不与外壳蛋白基因及其ｍＲＮＡ反应，从而为表达ＣＰ基因的转基因马铃薯中ＰＬＲＶ的检测和抗病性鉴定建立了一种可靠的灵敏的分子生物学技术．此项技术已用于转ＣＰ基因马铃薯Ｄｅｓｉｒｅ，Ｆａｖｏｒｉｔａ，乌盟６０１和虎头的抗病性鉴定     

用复制酶基因cDNA探针检测表达病毒外壳蛋白基因马…

利用马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）复制酶基因３＇端长约６００ｂｐ的ｃＤＮＡ，用缺口平移方法进行＾３２Ｐ同位素标记，制备成ｃＤＮＡ探针，通过核酸斑点杂交，对提纯的马铃薯卷叶病毒（ＰＬＲＶ）、病毒ＲＮＡ、ＰＬＲＶ感染的马铃薯汁液，表达ＰＬＲＶ ＣＰ基因的马铃薯叶片及块茎芽进行了检测。结果表明，＾３２Ｐ标记的复制酶基因ｃＤＮＡ探针特异性强、灵敏度高。可测得提纯病毒的最低含量为４０８ｎｇ／ｍｌ，病毒ＲＮＡ最低     

Detection of PSTVd with a New Nonradioactive Method──Digoxigenin Labeled cDNA Probe

使用非放射性标记ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的１１－ｄＵＴＰ取代３２Ｐ标记的ｄＡＴＰ或ｄＣＴＰ进行核酸斑点杂交检测马铃薯纺锤块茎类病毒（ＰＳＴＶｄ）．结果表明，ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记具有灵敏度高，操作简单快捷，无放射性污染等优点．可检出含有ＰＳＴＶｄ的马铃薯叶片汁液最大稀释度及含有ＰＳＴＶｄ全序列的质粒ＤＮＡ的最小量分别为１３００和１０ｐｇ．同时该探针也用于检测了不同马铃薯品种及ＴＰＳ亲本中的ＰＳＴＶｄ感染情况，结果显示，其中一些品种及ＴＰＳ亲本已不同程度的被ＰＳＴＶｄ感染．     

植物激素吲哚乙酸的夹心酶联免疫测定法

根据夹心法原理,初步建立了植物激素吲哚乙酸的酶联免疫测定法。在这个方法中,抗体最适包被浓度为20μg/ml。辣根过氧化物酶与抗体的结合物的最适稀释度为1:1000。4％聚乙二醇6000极大地改善了标准曲线,检测范围在每孔1.0至32ng。其它植物激素如脱落酸,吲哚丁酸与抗体的交叉反应很小。对植物材料中吲哚乙酸的含量进行了测定,并与其它作者用别的方法所得结果进行了比较。     

轮状病毒间接免疫荧光的检测方法

以兔抗SA11多克隆抗体为一抗、 Alexa 488标记的山羊抗兔抗体为二抗, 通过对反应条件的优化建立轮状病毒（RV）检测的间接免疫荧光法（IFA）. 实验结果表明, IFA最佳工作条件为: MA104细胞密度为每孔2×10⁴个, 胰酶活化轮状病毒质量浓度为1 μg/mL, 培养时间为18 h, 一抗最适稀释度为1∶800, 二抗最适稀释度为1∶500.     

斑点免疫结合法检测3种植物病毒

研究了改进的斑点免疫结合法在检测芜菁花叶病毒、烟草花叶病毒和小西葫芦黄化花叶病毒中的应用.无论是使用全抗血清还是纯化的免疫球蛋白,检测感染组织粗汁液中的病毒或纯化的病毒,均获得了满意的结果.同时进行的斑点免疫结合试验、酶联免疫吸附试验和免疫吸附电子显微术等的比较结果表明:无论是检测纯化病毒还是感染组织粗汁液中的病毒,斑点免疫结合法的检测敏感性均优于后2种方法,病毒的可测感度芜菁花叶病毒为0.65ng,烟草花叶病毒为0.39 ng,小西葫芦黄化花叶病毒为0.45 ng;应用碱性磷酸酶标记抗体及羟基吲哚磷酸盐和氮兰四唑为底物较为合适,这种底物可在室温下长期保存,并且反应产物为不褪色的紫色,易于观察和保存.     

双抗体夹心ELISA检测禽流感病毒方法的初步建立

用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒(AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法. 经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件为:兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1: 8 000(浓度为3.531 ug/mL),抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1: 800,酶标二抗的工作浓度为1: 4 000. 与其他禽易感病毒(NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应. 结果表明,本方法具有很高的特异性.     

应用酶联免疫吸附试验检测山羊日本血吸虫病抗体的研究

本研究首先制备了日本血吸虫水溶性止卵抗原和兔抗山羊酶标复合物。经测试确定了:抗原的最适包被浓度(5ug/ml);酶标复合物的最佳工作浓度(1:2500)以及血清不同稀释度下的阴—阳临界值,从而成功地建立了山羊日本血吸虫病抗体的酶联免疫检测法。以1:80稀释作参考,对25份标准阳性血.清和19份标准阴性血清的考核结果证实:在最适条件下,该法特异性,敏感性良好,具有临床和科研应用价值。随后,应用酶联免疫吸附试验对7只实验山羊血吸虫病抗体消长作了长期、细致地观察,结果表明:特异性IgG最早于尾蚴感染后第40天出现;吡喹酮治疗后,7个月消失。     

BK病毒样颗粒制备及血清学检测方法的建立

将BK病毒 ( BK polyomavirus, BKV )的结构蛋白VP1 通过重组杆状病毒在昆虫细胞中表达, 并自发装配成BKV病毒样颗粒(BK virus like particles, BK VLPs). 以BK VLPs作为包被抗原建立了间接酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)的血清学检测方法: 抗原最佳包被浓度为3.1 μg/mL, 血清最佳稀释度为1∶200, 酶标抗体最佳工作稀释度为1∶40000.并以该方法在国内对540名健康成年人进行BKV抗体阳性率情况调查, 结果显示我国健康成年人BKV抗体阳性率为79.94%.     

广西莪术和蓬莪术的离体快繁技术研究

本试验以广西莪术和蓬莪术的幼芽、嫩叶、块茎和根为外植体,接种在以MS为基本培养基、外加不同激素浓度组合的培养基上进行愈伤组织诱导、幼芽增殖、生根等培养.实验表明:诱导莪术叶、块茎和根的愈伤组织形成的最适培养基为MS+2,4-D 1.0×10-3 g/L+6BA 0.5~1.0 mg/L(+NAA 0.3 mg/L),其中莪术叶诱导率最高达96%;幼芽最适增殖培养基为MS+6-BA 3. mg/L+NAA 0.1 mg/L+KT 1.0 mg/L,其增殖倍数达3.5以上;而生根培养基以1/2MS+NAA 1.0 mg/L+BA .5 mg/L为最佳,生根率达100%,其移栽成活率达85%以上.     

ELISA法快速测定McAb培养上清中鼠源IgG质量浓度

用小鼠IgG纯品免疫新西兰大白兔,获得兔抗小鼠IgG多克隆抗体.以兔抗小鼠lgG多抗包被聚苯乙烯微孔板.配以辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG抗体和以3,3'5,5-四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了快速测定McAb培养上清中鼠源IgG的双抗体夹心ELISA方法.该方法的检测线性范围是7.02ng/mL至449.38ng/mL之间,回收率在94.83%-115.15%之间,变异系数在1.45%-9.94%之间.显然用该方法测定MeAb培养上清中鼠源IgG质量浓度是可行的.     

谷物中玉米赤霉烯酮化学发光免疫分析方法的建立

开发了一种管式磁微粒化学发光免疫分析法来测定谷物中玉米赤霉烯酮(ZEA).使待测样品中的ZEA、辣根过氧化物酶标记的ZEA(HRP-ZEA)与异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗ZEA单克隆抗体发生竞争性免疫反应,以抗FITC抗体包被的磁微粒(MPS)作为固相抗体及分离相.对免疫反应的条件及各项参数如:稀释度、温育时间、磁微粒及发光底物的体积等进行了测定和优化.在最优条件下,该法的线性范围是0.5~50 ng·mL~(-1),检测灵敏度为0.1 ng·mL~(-1);批内变异和批间变异均小于15%,回收率在89.2%~105.2%之间.通过本法对40例谷物样品检测,同时与商品化试剂盒进行对比检测,结果无明显差异.     

化学发光-酶联免疫高灵敏检测洛美沙星

建立了洛美沙星的化学发光-酶联免疫分析方法。实验对包被抗原的度盘浓度、洛美沙星抗体及辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗的稀释倍数、酶标板的种类等进行了优化。在最佳实验条件下,测得的IC₅₀值为0.22ng／mL, 检测限为0.032ng／mL。该方法具有良好的特异性,在检测的10种代表性的喹诺酮类药物中,仅诺氟沙星和氟罗沙星交叉率高于1％(分别为:6.88％和2.16％)。将该方法应用于脱脂牛奶中添加洛美沙星回收率的测定,批内和批间回收率分别为:88.7％～103.4％和97.8％～107.2％,相应变异系数分别为:6.3％～8.6％和2.4％～8.0％。     

毫微克DNA—DAPI复合物荧光法测定的研究

DAPI（4－6＝脒基－2－苯基吲哚）是检测微量DNA的专一性荧光染料，其最高灵敏度为0．1ng/ml,DNA浓度由微微克向毫微克增大时，峰位红移10－20nm。DNA浓度在1－100ug/ml时，DAPI的适宜浓度范围为30－100ng/ml。     

以赭曲霉毒素A多克隆抗体建立直接竞争酶联免疫吸附分析方法研究

将赭曲霉毒素A(OA)抗原免疫大白兔制备多克隆抗体,建立直接竞争酶联免疫吸附分析方法(ELISA)。结果多克隆抗体的效价高达1∶21万。建立的直接竞争ELISA检测方法的下限为0.05ng/ml,线性范围0.05~51.2ng/ml,OA添加到玉米粉中的样品回收率达到94.8%。     

不同施肥量和密度对马铃薯叶片叶绿素含量的影响

在不同施肥量和密度组合处理条件下,以青薯6号为试验材料,分别于初花期、盛花期、终花期和成熟期测定了马铃薯叶片的叶绿素含量。结果表明：不同施肥组合对马铃薯叶片叶绿素含量的影响前期大于后期。在低施肥量范围内,叶绿素含量随着施用量的增加而呈递增趋势,当施肥量达到纯N：184 kg/hm2,P2O5：112.13 kg/hm2,K2O：67.5 kg/hm2时,叶绿素含量最高,之后随着施肥量的增加,叶绿素含量开始下降,但随着密度的增加叶绿素含量有不断降低的趋势。氮、磷、钾、密度对初花期马铃薯叶片叶绿素a、叶绿素b含量的各个因素组合的选优与总叶绿素相同。叶绿素总含量最高为1.85 mg/g,相应的最优肥料密度组合的施肥量和密度分别为纯N：184 kg/hm2,P2O5：112.13 kg/hm2,K2O：67.5 kg/hm2,密度：6万株/公顷。初花期马铃薯叶片叶绿素a含量、叶绿素总含量、盛花期、终花期的叶绿素总含量与马铃薯块茎产量的相关性达到极显著差异,初花期马铃薯叶片叶绿素b含量与马铃薯块茎产量的相关性达到显著差异,并与理论回归方程的拟合程度高。